重组人pEGFP-C2-NPHS2表达载体的构建及其在人胚胎肾293细胞中的表达

目的:构建人pEGFP-C2-NPHS2表达载体,并观察其在人胚胎肾(HEK)293细胞中的表达.方法:应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白与NPHS2的融合表达载体,经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定,应用基因转染技术将其转入HEK293细胞中,荧光显微镜和免疫印迹检测NPHS2的表达产物podocin.结果:经鉴定目的基因NPHS2全长插入重组质粒,HEK293细胞不表达NPHS2基因,转染后可以检测到绿色荧光蛋白分布于细胞的膜周部,免疫印迹证实为编码蛋白podocin.结论:成功构建重组人pEGFP-C2-NPHS2表达载体,有助于进一步研究podocin在足细胞疾病中的作用.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在肾脏纤维化中的作用

肾脏纤维化是多种肾脏疾病进展至终末期肾病的共同途径,以成纤维细胞增生和细胞外基质的过度积聚为特征,其发生和进展机制复杂.近年来的研究发现,过氧化物酶体增殖物激活受体γ及其激动剂,除增加胰岛素敏感性、调控脂肪细胞分化外,还具有抗炎、抗纤维化等作用,参与了抗纤维化的调节过程,成为学者们关注的热点之一.     

初发过敏性紫癜患儿肾脏受累危险因素分析

目的 对初发过敏性紫癜(HSP)患儿进行随访,探讨HSP患儿肾脏受累的危险因素.方法 前瞻性纳入2009年12月至2010年11月在南京医科大学附属南京儿童医院肾脏科住院的初发HSP患儿,随访6个月,根据肾脏受累定义,将HSP患儿分为肾脏受累组和无肾脏受累组.复习文献提取与肾脏受累可能相关的3项人口学特征、8项临床症状...     

热休克蛋白27及其mRNA在实验性肾小管间质损伤中的表达

热休克蛋白是细胞在环境变化时产生的一组应激蛋白，在体内参与细胞的生长、发育和分化，更在细胞抵抗有害刺激损伤^[1]、维持细胞抗氧化机制^[2]、抑制细胞凋亡及调节免疫等方面发挥重要作用。本研究应用单侧输尿管梗阻(unilatral ureteral obstru—ction，UUO)肾小管间质损伤人鼠模型，观察热休克     

环磷酰胺静脉冲击疗法对频繁复发性肾病综合征患儿的临床疗效

目前 ,儿童难治性肾病的治疗仍是临床上较为棘手的问题 ,由于其病因、发病机制、病理类型不同而直接影响其疗效及预后。近年来有关大剂量环磷酰胺静脉冲击疗法 (ＣＴＸ ＰＴ)治疗小儿难治性肾病的报道较多 ,但结果不尽相同。我们的研究显示 ,ＣＴＸ ＰＴ治疗小儿难治性肾病综合征 (简称难治性肾病 )取得了较好效果[1,2 ] 。本文观察了ＣＴＸ ＰＴ对儿童频繁复发性肾病综合征 (ＦＲＮＳ)的预防效果以及远期转归 ,报道如下。1　对象和方法1.1　临床资料　 1991年 9月～ 1999年 12月接受ＣＴＸ ＰＴ治疗且具有完整资料的ＦＲＮＳ患儿 2 2例 ,临…     

PEA3在白蛋白诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用

目的:探讨PEA3在白蛋白诱导的肾近端小管上皮细胞损伤中的作用及机制?方法:体外培养小鼠近端肾小管上皮细胞,实验组分为对照组?空载对照组?PEA3过表达组?白蛋白造模组和PEA3处理组?实时荧光定量PCR检测PEA3转染效率?应用Annexin V-FITC/PI双染和Hoechst染色检测细胞凋亡?Western blot法和RT-PCR检测肾小管上皮细胞标志物E-cadherin?α-SMA及Vimentin的蛋白和mRNA变化水平? 结果:①PEA3质粒转染后,过表达组的PEA3表达水平增高了2.5倍;②加入白蛋白刺激后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达PEA3显著抑制白蛋白诱导的小管细胞凋亡;③白蛋白刺激降低E-cadherin 的表达,而增加了α-SMA和Vimentin的表达,PEA3过表达阻断白蛋白对E-cadherin的抑制作用,并降低α-SMA和Vimentin 的表达?结论:PEA3可抑制白蛋白诱导的小管上皮细胞凋亡和上皮-间充质转分化?     

氧化应激介导的Ras-ERK信号通路活化参与醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨氧化应激介导的Ras-胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化在醛同酮( ALDO)诱导的系膜细胞增殖中的作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;Western印迹检测Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2活化.结果 ALDO可显著促进系膜细胞增殖,抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖(均P＜ 0.01).ALDO刺激系膜细胞3h,活化的Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2表达显著增强,分别是对照组的4.05倍、3.62倍、4.52倍和3.40倍(均P＜0.01).抗氧化剂NAC几乎完全阻断ALDO诱导的Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK 1/2活化(均P＜0.01).Ki-RasA siRNA可呈浓度依赖性降低系膜细胞Ki-RasA表达,并显著抑制ALDO诱导的Ki-RasA活化及系膜细胞增殖(P＜0.01).c-Raf抑制剂GW5074和MEK1/2抑制剂PD98059亦显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖,其抑制率均达到65％(P＜0.01).Ki- RasA siRNA不能降低ALDO诱导的磷酸肌醇-3激酶( PI3K)磷酸化.联合应用PI3K抑制剂LY294002和MEKl/2抑制剂PD98059可完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖(P＜0.01).结论 ALDO可通过氧化应激活化Ki-RasA-c-Raf-MEK-ERK信号通路.同时阻断ERK1/2和PI3K信号通路可完全抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖.     

如何对待肾积水

2008年7月句容市天王镇发生1例狂犬病病人,经抢救无效,于发病6d后死亡,现将发病情况调查处理报告如下.     

α—平滑肌肌动蛋白与肾脏胚胎发育

目的　了解α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）在肾脏胚胎发育过程中的表达规律及α－ＳＭＡ变化与肾脏成熟的关系。方法　用免疫组化链霉菌素亲生物素－过氧化物酶连接法（ＳＰ）测定不同胎龄的胚胎肾α－ＳＭＡ的表达。结果　α－ＳＭＡ在整个肾脏的发育过程中经历了早期阶段的无表达，较为成熟的肾小球系膜区呈强阳性，成熟肾小球呈阴性表达。结论　α－ＳＭＡ在肾脏的表达具有一定的时空顺序，遵循一个离心方式，肾小球内α－ＳＭＡ的表达是短暂的发育现象，与肾小球的发育成熟相关     

Tenascin在原发性系膜樯殖性肾小球肾炎中诊断价值的研究

Ｔｅｎａｓｃｉｎ (ＴＮ)为细胞外基质 (ＥＣＭ )重要组成成分之一[1,2 ] 。有研究表明 ,ＴＮ蛋白水平表达及ｍＲＮＡ表达可作为确定ＩｇＡ肾病 (ＩｇＡＮ)活动性及慢性的指标[3] 。为此 ,我们观察了原发性系膜增殖性肾小球肾炎 (ＭｓＰＧＮ)患儿ＴＮ的表达以及其与疾病活动性及慢性指标等的关系。材料和方法1 材料 :选用 1997～ 1999年 3月住院并确诊的原发性ＭｓＰＧＮ(经皮肾活检 )患儿 2 4例 ,其中男 17例 ,女 7例 ;年龄 1岁 4个月～ 13岁 (6 7± 2 3岁 )。病程最短 4个月 ,最长 6年5个月 (30± 9个月 )。所有患儿均经临床及实验室检…