基于网络药理学探讨哮喘宁颗粒治疗支气管哮喘的作用机制及PI3K/Akt信号通路验证

目的 基于网络药理学预测哮喘宁颗粒治疗支气管哮喘的潜在分子机制，并采用卵蛋白（OVA）致敏诱发的支气管哮喘大鼠模型对关键信号通路之一磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）进行实验验证。方法 利用传统中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）和中药分子机制生物信息学分析网络（BATMAN-TCM）筛选哮喘宁颗粒的主要有效成分和作用靶点。通过人类基因数据库（GeneCards）、人类孟德尔遗传靶点数据库（OMIM）等5个疾病数据库获取支气管哮喘相关的疾病靶点。筛选并通过韦恩图获得两者的共同靶标，使用蛋白相互作用数据库（STRING）构建化合物-疾病的蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI），并用Cytoscape 3.8.0建立“哮喘宁关键活性成分-核心靶基因”网络。通过基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。制备OVA刺激诱导的支气管哮喘大鼠模型，通过苏木素-伊红（HE）染色观察支气管与肺组织炎症情况，蛋白免疫印迹法（Western blot）实验验证网络药理学富集分析结果。结果 该实验分别获取哮喘宁活性成分232个，相关靶点4 687个，收集哮喘宁与支气管哮喘的共同靶点233个，包括嗜酸性粒细胞衍生神经毒素1（EDN1）、环磷腺苷效应元件结合蛋白1（CREB1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、表皮生长因子受体（EGFR）、丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、Akt1等。KEGG通路分析筛选了186条相关信号通路，显示PI3K/Akt信号通路可能在哮喘宁治疗支气管哮喘的过程中起关键作用。动物实验表明，与哮喘模型组比较，哮喘宁组可明显减轻大鼠气道炎症反应和平滑肌增生，并明显下调PI3K、Akt蛋白表达（P<0.05）。结论 哮喘宁治疗哮喘具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点，其中哮喘宁可能通过调控PI3K/Akt信号通路相关基因的表达，进一步发挥抗炎症的药理效应，为后续深入研究哮喘宁治疗支气管哮喘的复杂机制提供了理论依据。     

哮喘宁颗粒对支气管哮喘大鼠气道炎症反应的调节作用机制

目的 探讨哮喘宁颗粒对支气管哮喘大鼠气道炎症反应的调节作用。方法 将雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组(哮喘宁颗粒2.48 g·kg^-1·d^-1灌胃)、西药组(布地奈德混悬液雾化),每组12只。除正常组外,其余各组大鼠分别于实验的第1、8天腹腔注射10%卵清蛋白(OVA),第15天开始予氢氧化铝混合液+1%OVA溶液雾化激发建立哮喘模型;连续干预2周。实验结束后,检测大鼠肺功能、外周血白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数、肺泡灌洗液白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-13(IL-13)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠支气管病理;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测肺组织IL-4、IL-5、IL-13 mRNA表达。结果 与模型组比较,中药组大鼠肺功能用力肺活量(FVC)、0.1 s用力呼气容积(FEV0.1)、FEV0.1/FVC、呼出50%FVC量时流速(FEF50%)显著升高(P<0.05);外周血白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数显著降低(P<0.05);肺泡灌洗液IL-4、IL-5...     

5个常用经典名方治疗儿童哮喘急性发作疗效的网状Meta分析

目的:应用网状Meta分析方法比较与评价5个经典名方治疗儿童支气管哮喘(BA)及咳嗽变异性哮喘(CVA)急性发作的临床疗效,并分别进一步比较与评价其中不同方剂治疗寒性哮喘或热性哮喘两大类证型的临床疗效。方法:运用计算机检索并筛选维普数据库(VIP),中国知网(CNKI)与万方(Wanfang Data)等数据库中关于5个经典名方(三子养亲汤、麻杏石甘汤、射干麻黄汤、小青龙汤、定喘汤)治疗哮喘急性发作的随机对照试验(RCT),时间区间段为创库以来至2021年8月15日。对纳入文献进行评估和筛选,并完成资料提取。借助软件Stata 16.0实施网状Meta分析。结果:共纳入47个RCT,总计有5114例儿童哮喘急性发作期患者,涉及10种干预措施。其中寒性哮喘有16个RCT,共计1912例患者,涉及其中的6种干预措施;热性哮喘有10个RCT,共有1054例患者,涉及其中的4种干预措施。网状Meta分析结果提示,这10种干预措施中,整体疗效最显著的是麻杏石甘汤+西医常规治疗,另外,麻杏石甘汤+西医常规治疗>西医常规治疗,射干麻黄汤+西医常规治疗>小青龙汤+西医常规治疗>射干麻黄汤>定喘汤+西医常规治疗。在寒性哮喘中,射干麻黄汤+西医常规治疗组效果最显著;在热性哮喘中,定喘汤+西医常规治疗组疗效最显著。而改善第1秒用力呼气容积(FEV₁)占预计值的百分比(FEV₁%)最显著的是射干麻黄汤组。结论:与西医常规治疗儿童哮喘急性发作比较,5个经典名方与西药合用能增强疗效,其中,麻杏石甘汤与西药合用疗效较显著,在寒性及热性哮喘中疗效较显著的分别是射干麻黄汤+西医常规治疗、定喘汤+西药治疗。但仍需要大量设计科学的、质量更高的RCT来对此研究结论加以验证和说明。     

保肺康颗粒通过调控Wnt/β-catenin信号通路干预大鼠肺纤维化

目的:基于保肺康颗粒对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响,探讨其对于肺纤维化大鼠模型的干预作用。方法:将50只健康大鼠适应性喂养1周后,随机选取8只作为空白组,其余42只大鼠采用常规麻醉后气管内注入硫酸博莱霉素溶液(5 mg·kg^-1)的方法制备肺纤维化模型,空白组以相同操作方法注入等量生理盐水。造模后第7天,将剩余33只存活的博莱霉素造模大鼠随机剔除1只,其余32只随机分为模型组、醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组,每组8只。保肺康高、低剂量组分别给予保肺康颗粒27.18,13.59 g·kg^-1灌胃,醋酸泼尼松组给予醋酸泼尼松片1.17 mg·kg^-1灌胃,空白组和模型组以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续21 d。比较各组大鼠肺顺应性和通气功能、病理学改变和纤维化程度评分、肺组织内Ⅰ型胶原(ColⅠ)和血清内羟脯氨酸(HYP)水平及肺组织中Wnt3a,β-catenin蛋白相对表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺功能指标用力肺活量(FVC),用力最大呼气流速(PEF),肺总阻力(RL)和动态顺应性(Cydn)均明显下降(P<0.05,P<0.01),模型组肺组织形态严重毁损,大量连续纤维化灶形成,纤维化严重程度评分显著升高(P<0.01),肺组织内ColⅠ和血清内HYP水平均显著升高(P<0.01),Wnt3a,β-catenin蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组FVC,PEF,Cydn均明显提高(P<0.05,P<0.01);醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组病理学表现均有所改善,纤维化程度评分低于模型组(P<0.05,P<0.01),保肺康高、低剂量组评分低于醋酸泼尼松组(P<0.01);醋酸泼尼松组、保肺康低、高剂量组肺组织ColⅠ,HYP水平均低于模型组(P<0.05,P<0.01),保肺康高剂量组ColⅠ水平低于醋酸泼尼松组(P<0.01),保肺康高、低剂量组血清内HYP的水平均低于醋酸泼尼松组(P<0.01);保肺康高剂量组Wnt3a蛋白表达水平低于模型组(P<0.05),醋酸泼尼松组、保肺康低剂量组和保肺康高剂量组β-catenin蛋白表达水平低于模型组(P<0.05,P<0.01),且保肺康高剂量组表达水平低于醋酸泼尼松组(P<0.01)。结论:保肺康颗粒能够减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化,减少胶原沉积,改善肺顺应性,提高肺通气功能,对Wnt/β-catenin信号通路的抑制可能是其机制之一。     

桑梅止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症反应的作用及机制

目的:观察桑梅止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠炎症反应的调节作用及机制。方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组(桑梅止咳颗粒2.48 g·kg^-1灌胃);模型组、中药组分别在第1,8天腹腔注射10%卵蛋白(OVA),氢氧化铝混合液+第15天开始1%OVA溶液雾化激发建立CVA模型;第15天各组连续干预2周。实验结束,检测大鼠肺功能,外周血炎细胞计数,血清白细胞介素(IL)-4,IL-5,IL-10含量,肺组织苏木素-伊红(HE)染色;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα),NF-κB蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠0.1 s用力呼气容积(FEV_0.1),0.1 s内平均流速(FEV_0.1/FVC),呼出50%FVC量时流速(FEF50%)明显降低(P<0.05,P<0.01);外周血白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数显著升高(P<0.01);血清IL-4,IL-5,IL-10含量显著升高(P<0.01)。HE染色显示模型组支气管可见上皮细胞脱落,气道狭窄,黏液腺增生扩张,各层结构紊乱,细胞排列混乱,大量炎细胞浸润。与正常组比较,模型组肺组织NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01),IκBα蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,中药组大鼠FEV_0.1,FEV_0.1/FVC,FEF50%明显升高(P<0.05);外周血白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数显著降低(P<0.01);血清IL-4,IL-5,IL-10含量显著降低(P<0.01);HE染色显示中药组支气管黏膜损伤较轻,炎细胞浸润、腺体增生、上皮变性坏死等明显减轻。与模型组比较,中药组肺组织NF-κB p65蛋白表达明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:桑梅止咳颗粒具有改善CVA大鼠肺功能、抑制气道炎症反应的作用,机制可能与调控大鼠肺IκBα/NF-κB表达相关。     

基于网络药理学探讨保肺康颗粒对肺纤维化大鼠模型PI3K/Akt信号通路的调节作用

目的 基于网络药理学及动物实验验证的方法探讨保肺康颗粒（保肺康）对治疗肺纤维化的作用靶点及机制。方法 借助相关中药药理学数据库和分析平台筛选保肺康的有效成分及靶点；于各疾病数据库中检索肺间质纤维化疾病相关靶点，提取保肺康与肺纤维化的共同靶点，利用蛋白相互作用数据库（STRING）构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，通过Cytoscape 3.8.0软件对关键靶点进行网络拓扑学分析，建立“保肺康关键活性成分-核心靶基因”网络，对核心靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析以探究保肺康治疗肺纤维化可能的分子机制。以博来霉素气管滴注的方式建立肺间质纤维化大鼠模型，分为正常组、模型组、保肺康组（27.18 g·kg^-1）、醋酸泼尼松组（1.17 mg·kg^-1），灌胃21 d，对各组肺组织用苏木素-伊红（HE）染色进行形态学观察，运用免疫组化（IHC）对大鼠肺组织内的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和蛋白激酶B（Akt）蛋白进行检测。结果 网络药理学方法筛选出保肺康治疗肺间质纤维化疾病关键基因18个，包括Akt1、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、核蛋白类癌基因（MYC）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）重组蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、表皮生长因子受体（EGFR）、核心结合因子2（RUNX2）等。KEGG富集分析预测保肺康主要是通过PI3K/Akt信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、白细胞介素-17（IL-17）信号通路等发挥抗纤维化作用。IHC结果显示，与模型组比较，保肺康组内PI3K、Akt蛋白表达均明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 保肺康在治疗肺纤维化上具有毒性低、多层次、多靶点的特点，其可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响肺纤维化程度，从而达到改善肺功能的作用。     

哮喘宁颗粒对心理应激哮喘大鼠的治疗作用及抗氧化作用机制

目的:观察哮喘宁颗粒对心理应激性哮喘大鼠的治疗作用及抗氧化机制。方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、应激组、应激哮喘组、中药组(哮喘宁颗粒2.48 g·g^-1灌胃)、西药组(布地奈德混悬液雾化);第1,8天腹腔注射10%卵蛋白(OVA),氢氧化铝混合液+第15天开始1%OVA溶液雾化激发建立哮喘模型;其中应激组、应激哮喘组、中药组、西药组从第1天起给予束缚刺激,连续刺激28 d,最终建立心理应激性哮喘模型;第15天开始各组连续干预2周。第15,28天进行糖水偏好实验,旷场实验检测;实验结束,检测体质量,血清白细胞介素(IL)-4,IL-5,IL-13含量;肺组织丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH)水平;肺苏木素-伊红(HE)染色;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2),血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达。结果:与应激哮喘组比较,中药组大鼠体质量、糖水消耗率、旷场路程明显升高(P<0.05);血清IL-4,IL-5,IL-13含量明显降低(P<0.05);肺组织SOD,GSH水平明显升高(P<0.05),MDA水平明显降低(P<0.05);HE染色显示中药组支气管黏膜损伤较轻,炎细胞浸润、腺体增生、上皮变性坏死等明显减轻;与应激哮喘组比较,中药组肺组织Nrf2,HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:哮喘宁颗粒具有调节心理应激性哮喘大鼠心理应激状态作用,同时缓解气道炎症反应、抗氧化,与其上调Nrf2/HO-1蛋白表达相关。     

金思维对拟散发性AD小鼠海马PSD95和Shank1表达及学习记忆的影响

目的 通过研究中药复方金思维(简称金思维)对拟散发性阿尔茨海默病(sporadic Alzheimer’s disease,SAD)模型小鼠海马神经元突触相关蛋白突触后致密蛋白95(postsynaptic density95,PSD95)和骨架蛋白(Shank1)的表达,探究金思维对拟SAD小鼠学习记忆的改善作用。方法链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对C57/BL6J小鼠双侧侧脑室隔日注射,制备拟SAD模型;将部分小鼠双侧侧脑室注射人工脑脊液作为对照组(0.5%CMC)。随机将拟SAD模型小鼠分为模型组(0. 5%CMC)、多奈哌齐组(0. 92 mg·kg~(-1)·d~(-1))、金思维大、中、小剂量组(20、10、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组12只,连续灌胃3个月。在最后一次灌胃结束后进行行为学跳台检测并取材。运用蛋白质印迹法和免疫组织化学染色技术对小鼠海马CA1区PSD95和Shank1蛋白进行检测。结果 蛋白印迹法和免疫组化结果趋势一致,模型组小鼠海马CA1区PSD95表达(P0.01)和Shank1表达(P0.05)较于对照组均降低,且金思维各干预组较模型组不同程度增加了PSD95和Shank1蛋白的表达(P0.01或P0.05)。结论 金思维可能通过调节突触相关蛋白PSD95和Shank1来改善突触的结构和功能,进而提高拟SAD小鼠记忆获得和保持能力。     

基于厥阴病机特点探讨乌梅丸在肺系疾病中的运用

[目的] 基于厥阴病机特点探讨乌梅丸在肺系疾病中的运用。[方法] 通过梳理厥阴病机的实质,整理并分析医案,以肺系感染性疾病、激素依赖性哮喘、过敏性哮喘/咳嗽变异性哮喘、慢性阻塞性肺疾病为例,阐述乌梅丸在治疗肺系疾病中的具体临床运用。[结果] 通过查阅古今各医家对厥阴病机实质的认识,梳理可得厥阴病机以“寒热错杂,阴阳失和”为主要特点,而这一病机特点与肺系疾病发生、发展过程中出现的“寒热错杂,虚实相兼,气机升降失常”的病机特征相符合。例如乌梅丸加减治疗激素依赖型哮喘患者,可明显减少患者激素用量,减轻哮喘症状,提高生活质量。[结论] 乌梅丸作为治疗厥阴病的代表性方剂,具有“平调寒热,燮理阴阳,和畅气血”的证治特点,将乌梅丸应用于肺系疾病的治疗,拓宽了乌梅丸的应用范畴。     

基于突触和突触蛋白探讨复方金思维对拟散发性阿尔茨海默病小鼠早期突触传递和功能的影响

目的通过观察复方金思维干预后拟散发性阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠海马突触形态以及α7尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nicotinic acetylcholine receptors,α7-nAChRs)和代谢性谷氨酸受体5(metabotropic glutamate receptors 5,mGluR5)两种突触相关蛋白的变化,探讨复方金思维对拟散发性AD小鼠早期学习记忆的影响。方法将3月龄C57/BL6J小鼠随机分为对照组、模型组、多奈哌齐组[0.92 mg/(kg·d)]及复方金思维大、中、小剂量组[20 mg/(kg·d),10 mg/(kg·d),5 mg/(kg·d)],对照组双侧侧脑室注射人工脑脊液,其余各组小鼠双侧侧脑室注射链脲佐菌素建立散发性AD模型,造模1个月后连续灌胃3个月,进行Morris水迷宫行为检测,之后取小鼠海马对其CA1区突触进行超微结构观察,并采用免疫组织化学和Western blot技术对海马CA1区α7-nAChRs和mGluR5分布和表达进行检测。结果Morris水迷宫结果显示,随着训练次数的增加每组小鼠定向航行潜伏期均缩短。电镜结果显示,与模型组相比,各干预组小鼠突触超微结构均有一定程度改善。免疫组化结果显示,与模型组比较,多奈哌齐组和复方金思维大剂量组α7-nAChRs的阳性细胞数均有所增加(P<0.05),多奈哌齐组及复方金思维大、中剂量组mGluR5的阳性细胞数均有所减少(P<0.01或P<0.05);Western-blot检测mGluR5结果与免疫组化结果一致。结论复方金思维可能通过改善拟散发性AD小鼠海马CA1区突触结构,调节突触相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5表达起到早期神经保护作用,进而提高其学习记忆能力。