口服轮状病毒活疫苗病毒滴度评价国家参考品的制备

目的 制备口服轮状病毒(rotavirus,RV)活疫苗病毒滴度评价的国家参考品.方法 选取检定合格的口服RV活疫苗原液,加入保护剂,1.0 ml/安瓿分装,冷冻干燥,制备病毒滴度参考品.用微量细胞病变法检测参考品的病毒滴度,用Karber法计算半数细胞培养感染量(50％ cell culture infective dose,CCID50).由3家实验室对参考品的病毒滴度进行协同标定,采用单因素方差分析和最小显著差数法对3家实验室的标定结果进行统计学分析.另外,将参考品于-20℃放置1年、4℃放置1年、37℃放置14d、-60℃放置2年,测定病毒滴度,分析参考品的热稳定性和长期稳定性.结果 经单因素方差分析比较,3家实验室检测结果的差异无统计学意义(F=0.379,P=0.686).采用最小显著差数法对3家实验室检测结果的均值进行两两比较,差异亦无统计学意义(s(x)值均为0.078 2,P值均＞0.05).参考品的平均病毒滴度为6.5 lgCCID50/ml,于不同温度放置一段时间后病毒滴度下降均未超过1.0 lgCCID50/ml.长期稳定性试验结果的变异系数为4.9％.结论 制备了可用于口服RV活疫苗病毒滴度检测的国家参考品.     

2020年国产口服轮状病毒活疫苗质量一致性研究

目的：评价口服轮状病毒疫苗(Oral Rotavirus Vaccine,ORV)的质量一致性,提升该疫苗的安全性和有效性,保证婴幼儿用药安全。方法：对2020年国产ORV的关键控制指标(病毒滴度)的检验结果进行趋势分析,并与其前一年结果进行比较;将中国食品药品检定研究院(简称中检院)检测结果与企业结果进行比较。结果：2020年度该疫苗病毒滴度趋势分析结果显示未见超趋势(Out of Trend, OOT)。2020年度和2019年度比较结果显示企业年度间具有较好的一致性。中检院与企业病毒滴度检测结果比较差异均无统计学意义(P=0.3263,P＞0.05);Bland-Altman法统计显示,97.7%批次的检测结果在不同浓度范围内的差值位于2倍标准差(2SD)以内。结论：2020年国产口服轮状病毒活疫苗质量稳定、可控,具有良好的一致性。今后应加强趋势分析中对OOT结果的调查、反馈,加强年度间比较分析,以及中检院与企业不同实验室间的比对研究。     

开封农村地区婴幼儿甲型肝炎抗体分析

目的了解开封农村地区婴幼儿的甲型肝炎抗体水平及动态变化,为疫苗接种提供参考。方法随机抽取该地区569名7~30月龄的婴幼儿,进行甲肝抗体定性及定量检测,分析不同月龄组的抗体水平。结果被调查婴幼儿7~10月时抗体阳性率均在30%以上,之后逐渐下降,13~18月时降至最低之后缓慢上升。7~10月龄抗体阳性率显著高于13~18月龄(P<0.05)。结论该地区婴幼儿甲肝疫苗免疫的最佳时间应为13~18月龄。     

TG-ROC分析方法在检测试剂质量评价中的应用

目的比较人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)ELISA检测试剂和Western Blot(简称WB)确认试剂的关系,分析HTLV检测试剂的质量水平。方法通过WB确认试剂对156份ELISA初筛阳性的人血清标本进行HTLV抗体的检测,使用TG-ROC分析方法来选出ELISA最佳CO值(阈值),以2×2列联表分析这两种检测结果的一致性,并用McNemar检验评估检测结果的一致性,综合评价HTLV检测试剂质量水平。结果 156份ELISA初筛阳性的人血清标本经过WB进行确证后仅有40份为阳性,其余116份为阴性。TG-ROC分析结果得出该ELISA检测试剂的敏感性和特异性分别为97.5%和45.7%,McNemar检验也表明ELISA与WB检测结果差异有统计学意义(P0.05)。通过调整阈值,能使ELISA敏感性和特异性同时达到88.8%(参数法)。比较参数法和非参数法,得到曲线下面积为0.923 5(参数法),两者的结论基本一致。结论虽然该ELISA试剂结果与WB结果有差别,但是通过调整阈值,可以提高其敏感性和特异性,继而增加诊断结果的可靠性。     

非洲绿猴肾细胞中猪圆环病毒1型的检测

目的 建立轮状病毒疫苗污染事件中的外源因子猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCV1)感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)的检测方法.方法 培养感染PCV1的Vero细胞6d后,通过定性PCR、定量PCR、电子显微镜(电镜)检查和原位杂交检测PCV1的复制与增殖.结果 从感染PCV1的Vero细胞培养物提取的DNA,其PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳可见特异性条带;定量PCR检测显示,感染6d后病毒总拷贝数是感染前的794.3倍;定性和定量PCR的最低检出浓度均为102.0拷贝/ml;电镜观察到PCV1特征性形态病毒颗粒;原位杂交检测到出现深色阳性信号的PCV1阳性细胞.结论 PCV1感染Vero细胞后的复制增殖可以通过上述方法进行检测.     

血浆中丙型肝炎病毒核酸在不同保存条件下的稳定性

目的探讨不同保存条件和时间对丙型肝炎病毒(HCV)RNA稳定性的影响。方法将22份血浆样本置于-20℃保存4周,4℃保存12d,室温(20~25℃)保存7d,反复冻融5次,采用荧光定量聚合酶链反应测定HCV RNA水平,考察HCV RNA稳定性。结果样本在-20℃保存4周HCV RNA平均下降幅度小于或等于0.14lg,±95%CI≤0.20lg;4℃保存12dHCV RNA平均下降幅度小于或等于0.39lg,4℃保存12d时95%CI下限为-0.50lg,12d时±95%CI≤0.24lg;室温保存7dHCV RNA平均下降幅度小于或等于0.40lg,室温保存7d处理组95%CI下限为-0.53lg,7d时±95%CI≤0.29lg;反复冻融5次HCV RNA平均下降幅度小于或等于0.10lg,±95%CI≤0.15lg。结论血浆样本在-20℃保存4周、4℃保存9d、室温保存5d和反复冻融5次时,对HCV RNA水平影响不明显,但4℃保存12d或室温保存7d后,RNA水平显著降低,所以应避免在这种条件和时间下保存和运输血浆。