miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

苯甲酰芍药苷上调miR-520c-3p缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤研究

目的 探究芍药单体成分苯甲酰芍药苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的作用及分子机制。方法 将75只SPF级小鼠按照随机数表法分成5组：空白对照组（生理盐水）、ALI组（2.00 mg/kg LPS 100μl）、阳性对照组（2.00 mg/kg LPS 100μl+血必净注射液100μl）、苯甲酰芍药苷低剂量组（2.5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）、苯甲酰芍药苷高剂量组（5 mg/kg苯甲酰芍药苷100μl）,通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;ELISA法检测ALI小鼠肺组织中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）水平;蛋白免疫印迹（WB ）检测肺组织IκB激酶（IKKβ）/核因子κB（NF-κB）表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC（RT-PCR）检测ALI小鼠肺组织中miR-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测miR-520c-3p靶基因;A549转染miR-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果 苯甲酰芍药苷低、高剂量均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比（P＜0.05）,ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示苯甲酰芍药苷低、高剂量能明显降低ALI小鼠肺组织中TNF-α、IL-6的水平（P＜0.05）;WB结果显示,与空白对照组相比,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RT-PCR结果发现苯甲酰芍药苷有效促进miR-520c-3p在ALI中的表达（P＜0.05）;Targetscan预测结果显示miR-506-3p直接靶向NF-kB p65亚基RELA基因3’UTR序列;补救实验显示miR-520c-3p inhibitor有效逆转了苯甲酰芍药苷对ALI过程中TNF-α、IL-6的抑制作用（P＜0.05）。结论 苯甲酰芍药能有效缓解LPS引起的ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调miR-520c-3p的表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB 信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。     

预测脓毒症急性肾损伤短期不良预后列线图的构建

目的建立个体化预测脓毒症急性肾损伤（SA-AKI）短期不良预后（30d病死）的列线图模型。方法以2016年3月至2019年5月入住急诊重症监护室的318例SA-AKI患者为研究对象,根据30d预后情况分为病死组225例和存活组93例。采用多因素logistic回归分析法筛选SA-AKI患者30d病死的影响因素,建立预测SA-AKI短期不良预后的列线图模型。结果年龄、真菌感染、APACHEⅡ评分、SOFA评分、抗凝血酶-Ⅲ、AKI分期是SA-AKI患者短期不良预后的独立危险因素（均P＜0.05）;以这些因素为变量建立SA-AKI短期不良预后列线图。对列线图模型进行验证,初始AUC为0.943,经1000次模型内部验证后为0.945,区分度良好;校正曲线提示观察值与预测值的一致性良好。结论基于6个影响因素（年龄、真菌感染、APACHEⅡ评分、SOFA评分、抗凝血酶-Ⅲ、AKI分期）构建的列线图,能较为准确地预测SA-AKI患者短期不良预后发生的风险,有助于尽早采取干预措施,从而改善患者的预后。     

溃疡性结肠炎患者肠组织FOXP3 和miR-664a-3p的表达关系及意义

目的 研究FOXP3和miR-664a-3p在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)患者肠组织中的表达关系及临床意义。方法 分别选择收治的50例UC患者为病例组,50例结肠息肉患者为对照组,通过qRT-PCR法、Western blot法、免疫组化检测两组样本结肠组织中FOXP3、miR-664a-3p的表达;观察FOXP3、miR-664a-3p与UC患者临床病情程度的关系;通过Pearson方法分析FOXP3和miR-664a-3p表达水平的相关性。结果 与对照组比较,UC组中FOXP3和miR-664a-3p表达水平明显升高(P<0.01)。患者结肠组织中FOXP3、miR-664a-3p与临床病情严重程度呈显著正相关(P<0.01)。FOXP3和miR-664a-3p表达水平呈正相关(P=0.000)。结论 UC患者肠组织中FOXP3和miR-664a-3p表达显著增加,二者呈正相关且与患者的临床病情严重程度相关,有助于对UC的病情进展及预后分析。     

miR-519d-3p调控TLR4抑制脂多糖所致THP-1源性巨噬细胞炎症的机制研究

目的探究miR-519d-3p在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症中的作用和分子机制。方法用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激细胞产生炎症反应作为后续实验的细胞模型,应用荧光定量PCR检测miR-519d-3p表达;利用antago-miR-519d-3p及antago-NC或者miR-519d-3p mimic及mimic-NC分别转染细胞,构建细胞内miR-519d-3p低表达或者过表达THP-1巨噬细胞系,si RNA构建细胞内TLR4表达敲低模型;利用ELISA检测细胞上清液炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β分泌水平,Western blot检测各细胞系TLR4、p-p65、T-p65、p-IκBα、T-IκBα蛋白水平。结果 LPS诱导的THP-1源巨噬细胞炎症模型miR-519d-3p表达(1.85±0.10)较对照组(1.00±0.25)明显升高(P<0.05);抑制miR-519d-3p表达显著抑制细胞炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β分泌[TNF-α:(1.23±0.34)比(6.33±0.61);IL-6:(1.08±0.18)比(5.75±0.54);IL-1β:(1.17±0.23)比(4.76±0.45),P均<0.05],同时降低p-p65、p-IκBα蛋白水平。抑制miR-519d-3p能明显抑制LPS刺激的巨噬细胞TLR4表达;TLR4敲低的细胞模型研究表明,miR-519d-3p通过TLR4调节炎症反应。结论 miR-519d-3p可能通过调控TLR4表达参与LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,进而在急性肺损伤中发挥重要作用。     

慢性阻塞性肺病患者血清中长链非编码RNA GM15621的表达变化及意义

目的 探讨长链非编码RNA GM15621(LNCRNA GM15621)在慢性阻塞性肺病患者血清中的表达变化及其意义。方法 qPCR检测198例慢性阻塞性肺病(COPD)患者和140例健康对照者血清中长链非编码GM15621HG表达,通过酶联免疫吸附试剂盒检测血清中炎症相关因子的表达,在COPD患者来源的炎症细胞中添加不同浓度的miR-15621 mimics或PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶)抑制剂, 处理24h后收获细胞,免疫印迹分析检测过表达LNCRNA GM15621对磷酸化AKT(蛋白激酶B)的影响。结果 COPD患者血清中LNCRNA GM15621表达显著低于正常健康对照者(P<0.05),炎症因子表达显著升高,抗炎因子水平明显降低,且LNCRNA GM15621低表达与不良预后相关,慢性阻塞性肺病患者来源的炎症细胞中添加miR-15621 mimics或PI3K抑制剂处理24h后,p-AKT表达显著降低(P<0.05),炎症因子表达显著降低,抗炎因子水平明显升高。结论 COPD患者血清中LNCRNA GM15621表达降低,LNCRNA GM15621低表达与患者不良预后相关,而过表达LNCRNA GM15621可以通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制炎症因子的表达,上调抗炎因子水平。