高压氧对脑损伤后脑组织Bcl-2及Bax表达的影响

背景国内外大量临床及实验报道,高压氧对严重颅脑损伤具有治疗意义,但目前对高压氧通过何种机制产生治疗作用尚未达成共识,可能与细胞凋亡而非细胞坏死有关.目的探讨高压氧对创伤性脑损伤的治疗作用与脑组织Bcl-2及Bax蛋白的表达之间的关系.设计完全随机设计,对照实验研究.地点与材料本实验在上海第二医科大学神经创伤与脑血管病研究室的实验室内进行.实验动物为购自上海医科大学实验动物中心的SD大鼠.SD雄性大鼠56只,随机分为假手术组、外伤组和伤后高压氧治疗组,后两组又分别为8 h,24 h和48 h组,共7组.干预以50 g×15 cm冲击力自行制作自由落体脑挫裂伤动物模型(SD大鼠),设立高压氧治疗组和对照组,分别使用Western Blot和免疫组化方法检测Bcl-2及Bax蛋白在脑组织的表达情况.主要观察指标Western Blot检测脑外伤后及高压氧治疗前后Bcl-2及Bax蛋白的脑组织表达.免疫组化检测脑外伤和高压氧治疗前后阳性细胞计数.结果创伤性脑损伤后脑挫裂伤灶和海马结构Bcl-2及Bax蛋白的表达均明显增强,高压氧治疗组Bcl-2的表达明显强于对照组(P＜0.05),而Bax虽在各组均有表达,但在各组间无显著性差异(包括假手术组).结论研究表明高压氧治疗对创伤性脑损伤后脑组织Bcl-2蛋白表达有显著影响,并进而改变Bcl-2/Bax的比例,而其比值与细胞凋亡密切相关,所以抑制细胞凋亡很可能是高压氧对创伤性脑损伤治疗作用的重要机制.     

促红细胞生成素对挫裂伤脑组织线粒体的影响

目的 探讨重组促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠颅脑损伤后脑线粒体能量代谢以及线粒体呼吸功能的影响.方法 健康雄性SD大鼠63只,随机分为rhEPO治疗组(n=28):以自由落体法制作大鼠腑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射rhEPO 10 U/g,每10 h重复注射1次;对照组(n=28):同样脑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射相同剂量生理盐水;假手术组(n=7):只钻孔不致伤.采用生化检测的方法分别测定治疗组治疗后6 h、12 h、24 h和48 h及各自的对照组大鼠脑组织线粒体ATP酶和SOD的活性和MDA水平以及线粒体呼吸功能.各组数值进行F和t检验.结果 重组促红细胞生成素治疗后12 h、24 h和48 h治疗组大鼠脑组织线粒体ATP酶、SOD活性和呼吸功能均高于各自时间点对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),而MDA水平则明显低于各自对照组(P＜0.01).结论 重组促红细胞生成素可以通过影响线粒体能量代谢及呼吸功能而减轻大鼠创伤性脑损伤后的继发性脑损害.     

弥散加权成像在弥漫性轴索损伤伤情判断和预后评价中的应用价值

目的 探讨弥散加权成像(DWI)对弥漫性轴索损伤(DAI)患者伤情判断和预后评估的价值. 方法 回顾性分析29例DAI患者临床影像学资料及伤后6个月随访结果,比较DWI与常规MRI序列脑内病灶的检出数,分析DWI中不同部位病灶数与患者相应GCS、GOS评分的关系. 结果 (1)29例各序列脑内DAI病灶平均检出数为:DWI(19.24±5.72)个,FLAIR(14.41±4.50)个,T2WI(10.58±3.79)个,T1WI(4.83±2.11)个.DWI的病灶检出数最高,与其他序列比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)脑中轴(胼胝体、基底节区、脑干)病灶数与GCS、GOS评分旱负相关(P<0.05),总病灶数及外周病灶数与GCS、GOS评分均无相关性(P>0.05).结论 DWI为DAI病灶检出的敏感序列,脑巾轴病灶检出数可作为DAI患者伤情判断和预后评估的客观指标.     

纳洛酮治疗急性重型颅脑损伤的临床疗效观察

目的 为了观察纳洛酮对重症脑损伤的临床治疗效果。方法 选择GCS5－8分患30例，每天应用纳洛酮4．8mg克；随机以30例同等伤情、常规治疗病例作为对照。比较观察意识觉醒、血液流变学及临床征象。结果 纳洛酮治疗后，病人觉醒天数缩短，外伤后脑血管痉挛发生率、血液粘滞度降低，伤残率减少。结论 纳洛酮对于内源性阿片肽引起的生理功能的应激性疾病起效快，作用可靠，其使用中未见有毒副作用。     

新型弥漫性轴索损伤动物模型的建立

了大鼠DAI模型,且具良好的稳定性和重复性.     

弥漫性轴索损伤预后影响因素的Logistic回归分析

目的 探讨影响弥漫性轴索损伤（DAI）患者长期预后的相关因素。方法 采用定群病例的前瞻性研究,记录75例DAI患者的相关指标及伤后6个月随访结果,对其临床和影像相关指标与预后进行单因素和多因素分析,多因素分析采用Logistic逐步回归分析。结果 Logistic逐步回归分析显示入院格拉斯哥昏迷评分(GCS）(OR=0.021,95%CI 0.007～1.557)、双侧瞳孔变化（OR=27.532, 95%CI 8.975～57.413)、MRI弥散加权成像脑中轴部位病灶数（OR=5.753, 95%CI 2.136～9.392)及脑中轴部位平均表观弥散系数（OR=0.353, 95%CI 0.134～0.964)是影响DAI患者预后的相关因素;上述相关因素结合后预测DAI患者预后的准确率达92.0%。结论 入院GCS、双侧瞳孔变化、MRI弥散加权成像脑中轴部位病灶数及脑中轴部位平均表观弥散系数是影响DAI患者预后的独立相关因素;临床因素与影像学指标结合则能更准确地评估DAI患者预后。     

SLC22A1828基因表达对胶质瘤细胞生长的抑制作用

我们利用基因转染技术,观察SLC22A18(solute carrier family 22,member 18)基因对胶质瘤U251细胞增殖的影响,探讨SLC22A18对胶质瘤的治疗价值. 一、材料和方法 1.材料:胶质瘤U251细胞购自中国典型培养物保藏中心,pcDNA3和pCDNA3.SLC22A18表达质粒由为武汉大学医学病毒学国家重点实验室构建.     

SLC22A18基因启动子甲基化与胶质瘤SLC22A18表达的关系

目的 探讨胶质瘤中SLC2218基因肩动子甲基化与其表达的关系.方法 选取上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科自2006年9月至2009年6月、武汉大学中南医院神经外科自2002年9月至2005年6月间手术切除的胶质瘤标本30例,另选10例行内减压术颅脑损伤患者的正常脑组织作为对照.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测标本中SLC22A18基因启动子甲基化的状态,RT-PCR和Westem blotting分别检测SLC22A18 mRNA和蛋白的表达.体外培养胶质瘤U251细胞于含2 μmol/L去甲基化药物5-aza-2-deoxycytidine的培养液(实验组1中,同时设普通培养液作对照,培养3、5、7 d后进行细胞计数并应用Western blotting检测SLC22A18蛋白的表达.结果 MSP检测结果显示15例胶质瘤组织出现甲基化,对照脑组织均表现出非甲基化;15例甲基化胶质瘤组织中SLC22A18 mRNA、蛋白的表达明显低于对照脑组织.培养5、7 d实验组U251细胞计数少于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).培养7 d Western blotting检测结果发现实验组细胞SLC22A18蛋白的表达明显高于对照组.结论 SLC22A18基因启动子甲基化导致其表达下调;去甲基化药物能恢复U251细胞SLC22A18的表达,并抑制U251细胞增殖.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between aberrant methylation of SLC22A18 gene promoter and SLC22A18 expression in human glioma. Methods Thirty patients with glioma and 10 patients with craniocerebral injury performed decompression were chosen in our study;their tissue samples were prepared. Methylation-specific PCR (MSP) was used to detect the methylation status of SLC22A18 gene promoter;and Western blotting and RT-PCR were employed to measure the protein and mRAN expressions of SLC22A18 in these tissue samples. U251 cells were cultured in vitro with demethylating agent 5-aza-2-deoxycytidine (experimental group, 2μmol/L) and common medium (control group), resepectively;the re-expression of SLC22A18 in U251 cells was measured by Western blotting and cell growth suppression induced by 5-aza-2-deoxycytidine was also observed 3, 5 and 7 d after the culture. Results The methlylation of SLC22A18 gene promoter existed in glioma tissues of 15 patients (50%) but that did not exist in the tissues of patients with craniocerebral injury. The protein and mRAN expressions of SLC22A18 in the tissue samples of these 15 patients were significantly decreased as compared with those in patients with craniocerebral injury (P<0.05);cell counting of U251 cells in the experimental group on the 5th and 7th d of culture was significantly decreased as compared with that of those in the control group (P<0.05). On the 7ht d of culture, Western blotting indicated that the protein b expression level of SLC22A18 in the experimental group was obviously higher than that in the control group. Conclusion The aberrant methylation of SLC22A18 gene promoter plays a key role in down-regulating SLC22A18 expression, and demethylation agents can restore the SLC22A18 expression and suppress the growth of U251 cells.     

沉默Bcl-XL逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药

目的:探讨RNA干扰Bcl-XL(siRNA）在人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药中的作用。方法:以Bcl-XL siRNA转染获得性SLC22A18耐药的人胶质瘤U251-SLC22A18/R细胞,用重组人SLC22A18蛋白处理,MTT法和流式细胞仪检测肿瘤细胞的存活率,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8的表达情况。结果:Bcl-XL siRNA能够降低U251-SLC22A18/R细胞中Bcl-XL的表达,也能逆转其对SLC22A18的耐药。U251-SLC22A18/R细胞经过Bcl-XL siRNA和重组人SLC22A18蛋白共同处理4 h后细胞凋亡率>50%,细胞存活率<30%;而对照组和重组人SLC22A18蛋白处理组的细胞凋亡率和存活率无明显变化。经Bcl-XL siRNA与重组人SLC22A18蛋白联合处理后,U251-SLC22A18/R细胞中Caspase-3和Caspase-8均明显活化。结论:Bcl-XL siRNA能有效逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药,为治疗胶质瘤耐药提供一种新的思路。