Caveolin-1对喉鳞状细胞癌抑制作用的体内外研究

目的探讨caveolin-1对喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞生长的影响。方法通过脂质体法转染喉鳞癌细胞株Hep-2细胞，筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆，并用实时定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定；用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的体外增殖能力；免疫印迹法检测细胞中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、磷酸化EGFR、细胞外信号调节激酶1、2（extracellular signal-regulated kinase，Erk1、2）、磷酸化Erk1、2，caveolin-1蛋白的表达；免疫共沉淀法检测caveolin-1和EGFR的结合情况；转染后的细胞接种至裸鼠皮下，观察肿瘤的生长情况，裸鼠移植瘤中caveolin-1、磷酸化EGFR、磷酸化Erk1、2的蛋白表达用免疫组织化学法检测。结果成功筛选到稳定高表达caveolin-1的克隆；与对照组相比，转染后的细胞体外增殖能力明显减弱；细胞接种到裸鼠皮下，未转染组和转染空载组中裸鼠均形成肿瘤（100％，4／4），稳定转染caveolin-1的Hep-2-CAV1-2组中裸鼠未形成实体肿瘤（0％，0／4），Hep-2-CAVl-3组中4只裸鼠中只有3只形成肿瘤（75％，3／4），但肿瘤生长缓慢，最终生成肿瘤的重量与未转染组相比明显减小（t=3．05，P〈0．05）；免疫共沉淀显示caveolin-1与EGFR在Hep-2细胞中是结合的；免疫印迹法和免疫组织化学法发现转染caveolin-1后细胞中EGFR和Erk1、2的磷酸化水平降低。结论caveolin-1能够抑制喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2的生长，抑制EGFR-MAPK信号通路可能与其抑癌作用相关。     

Fascin蛋白在胃腺癌中的表达及与MMP-2、MMP-9的相关性

Fascin蛋白是一种肌动蛋白结合蛋白,能促使细胞胞膜突起并增加细胞运动性.它在一些肿瘤中表达上调,与肿瘤的转移密切相关.基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9是目前研究较为深入的肿瘤转移相关蛋白,胃癌中Fascin蛋白的表达与MMP-2、MMP-9是否相关,目前还不清楚.本研究主要用免疫组化法检测胃腺癌中Fascin蛋白的表达,探讨其与MMP-2、MMP-9及临床指标的相关性,现报道如下.     

Fascin在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的检测Fascin在乳腺浸润性导管癌中的表达情况,并探讨其临床意义。方法用免疫组织化学法检测72例乳腺浸润性导管癌及配对癌旁组织中Fascin蛋白的表达和定位,以21例乳腺良性病变（10例乳腺纤维腺瘤、5例单纯性乳腺导管上皮增生和6例乳腺小叶增生）做为对照,收集病例临床病理资料,统计分析浸润性导管癌中Fascin的表达变化及与临床病理参数的相关性。结果Fascin蛋白在浸润性导管癌、癌旁乳腺组织、乳腺良性病变中的表达阳性率分别为26-39％（19／72）、0．14％（1／72）和0％（0／21）,浸润性导管癌中Fascin蛋白的表达明显高于癌旁乳腺及乳腺良性病变（P值均〈0．01）;浸润性导管癌中Fascin的表达与临床TNM分期、肿瘤病理分级和淋巴结转移相关（P值均〈0．05）;ER或PR阴性的浸润性导管癌病例Fascin表达阳性率更高（P值均〈0．05）。结论Fascin蛋白的检测对评价乳腺浸润性导管癌生物学行为和预后具有一定的参考价值,也有望成为一个乳腺癌的治疗靶点。     

E-cadherin、FAK在声门上型喉癌组织中的表达及其与颈淋巴结隐性转移的相关性

目的探讨E-cadherin、FAK的表达在声门上型喉癌早期淋巴结转移诊治中的价值。方法采用免疫组化法检测30例声门上型喉癌患者活检组织中E-cadherin、FAK的表达情况,并结合肿瘤分化程度及局部肿瘤分期选择性进行颈淋巴结清扫治疗,然后分析E-cadherin、FAK的表达与淋巴结转移的相关性。结果cN1-3患者18例,术后淋巴结转移15例,无转移3例。cN0患者12例,其中6例E-cadherin低表达、FAK中高表达,且分化程度为中或低分化,行双侧选择性淋巴结清扫术（Ⅱ～Ⅳ区）,后经病理检查证实3例有淋巴结转移。所有患者均随访1．5年,未行淋巴结清扫的6例cN0患者中1例发生同侧淋巴结转移,行淋巴结清扫的6例cN0患者均未见淋巴结转移。结论声门上型喉癌转移与否与E-cadherin、FAK的表达相关,利用肿瘤组织分化程度、原发肿瘤分期及E-cadherin、FAK的检测可指导声门上型喉癌选择性进行颈淋巴结清扫治疗。     

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

目的比较三种文献报道的改良脱钙液的效果,获得简单、便捷、适用于临床病理制片的脱钙液。方法考察在常温及37℃恒温条件下,三种改良脱钙液对骨组织的脱钙及染色效果。结果常温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为72h左右,组织结构损伤小,改良脱钙液Ⅰ、Ⅲ染色效果佳;37℃恒温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为8—14h,改良脱钙液Ⅰ镜下组织结构破坏,改良脱钙液Ⅱ组织结构破坏且染色效果不佳,改良脱钙液Ⅲ组织结构损伤小,染色效果佳。结论37℃恒温条件下,改良脱钙液Ⅲ是较适合于临床病理制片的脱钙溶液。     

siRNA靶向慢病毒对人喉癌Hep-2细胞系FAK基因的沉默效应

目的探讨siRNA靶向慢病毒对人喉癌Hep-2细胞系FAK基因的沉默效应,以期探索喉鳞癌基因治疗的新途径。方法 Western Blot检测人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2中的FAK蛋白表达水平。用FAK-RNAi慢病毒转染Hep-2细胞,同时监测转染效率。半定量RT-PCR检测FAK基因被FAK-siRNA沉默后mRNA的表达水平。Western-blotting检测FAK基因被FAK-siRNA沉默后蛋白质的表达水平。采用荧光PI染色检测凋亡细胞数目,MTT法检测细胞体外增生能力。结果 Western blot结果显示Hep-2细胞中FAK的3个蛋白片段表达量较高。多次重复western blot检测转染前后Hep-2细胞的FAK基因蛋白表达发现,FAK-RNAi慢病毒对目的基因在Hep2细胞中具有显著knockdown作用。使用RT-PCR技术检测FAK-siRNA干扰Hep-2细胞系前后FAK mRNA的表达发现,FAK-RNAi慢病毒对目的基因,在mRNA水平有明显knockdown作用。PI染料染色后,可见FAK-RNAi组30%～35%的肿瘤细胞凋亡。MTT Assay结果显示,FAK-siRNA慢病毒转染Hep2细胞后,Hep2细胞活力明显下降。结论经用慢病毒载体介导的FAK-siRNA在喉鳞癌细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应。     

七氟醚预处理对大鼠急性肾缺血再灌注损伤肾功能的影响

目的:探讨七氟醚预处理对大鼠急性肾缺血再灌注损伤肾功能的影响。方法:将SD雄性大鼠72只随机分为假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(S组),每组24只,后两组根据再灌注时间分为再灌注后4、12、24 h 3个亚组,每个亚组8只。实验结束检测血BUN、Cr,观察肾组织的病理变化,对肾小管损害进行评分,并进行比较。结果:S组和I/R组BUN、Cr均较C组明显升高(P<0.05),再灌注后同时相点比较,12h、24h S组BUN、Cr均明显低于I/R组,4h两组差异不显著;肾小管Paller氏评分,与C组相比,I/R、S组均高于C组(P<0.05),S组各时相点评分较I/R组降低(P<0.05)。结论:七氟醚预处理对大鼠急性肾缺血再灌注损伤有保护作用。     

端粒酶hTERT mRNA在乳腺癌中的表达及与c-myc相关性分析

目的 探讨人乳腺癌中原癌基因c-myc与hTERT mRNA表达的关系.方法 收集癌旁正常乳腺组织、导管原位癌、浸润性导管癌各12、18和25例,用原位杂交法检测hTERT mRNA表达,并用免疫组织化学法检测乳腺导管癌c-myc表达.结果 ①hTERT mRNA在癌旁正常乳腺组织中未见表达,在导管原位癌、浸润癌中的阳性率分别为83.33%和88.00%,后两组hTERT mRNA表达明显高于正常组;②hTERT mRNA表达与浸润性导管癌肿块大小及淋巴结转移与否无相关性（P＞0.05）;③43例乳腺导管癌中hTERT mRNA与c-myc表达呈正相关（γ=0.388 4,P＜0.05）.结论 端粒酶hTERT的表达可能在乳腺导管癌的组织发生中起关键作用,c-myc的过度表达可能与乳腺导管癌hTERT基因转录激活有关.     

宫颈鳞癌组织中Maspin、UPA和MMP9的表达及其意义

目的观察Maspin、尿激酶型纤溶酶原激活物（UPA）、基质金属蛋白酶9（MMP9）在宫颈鳞癌组织中的表达，探讨其与宫颈鳞癌临床病理特征的关系及意义。方法运用免疫组织化学Envision二步法检测Maspin、UPA、MMP9在正常宫颈组织、C1N和宫颈鳞癌组织的表达情况，并进行统计学分析。结果宫颈鳞癌组织中Maspin的表达率为50％，明显低于正常组、CIN组（P〈0．01）；UPA、MMP9在宫颈鳞癌中表达率分别为66．3％、61．6％，明显高于正常组、C1N组（P〈0．01）；Maspin、UPA、MMP9与宫颈鳞癌的临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关（P〈0．05、P〈0．01）；Maspin与UPA、MMP9在宫颈鳞癌中表达呈负相关（P〈0．01），UPA与MMP9间的表达呈正相关（P〈0．01）。结论Maspin在宫颈鳞癌中表达下调，UPA、MMP9呈过表达，在宫颈鳞癌的浸润和转移中起重要作用，可作为反映宫颈癌生物学行为的有效指标。