鸟苷酸交换因子Trio通过调控神经嵴细胞迁徙影响颅颌面发育

目的:研究鸟苷酸交换因子Trio在胚胎发育过程中对神经嵴细胞的影响。方法:将trio反义寡核苷酸通过显微注射入斑马鱼胚胎内,抑制其trio功能;在斑马鱼胚胎发育96 h时使用体式显微镜观察神经嵴细胞衍生物下颌骨的发育情况,120h时通过阿尔辛蓝染色观察颅颌面部软骨的发育状况。利用转基因斑马鱼(sox10:EGFP)特异性标记神经嵴细胞,通过延时摄影观察trio敲低后对斑马鱼神经嵴细胞迁徙的影响。体外培养小鼠神经嵴细胞,转染慢病毒敲低Trio的表达,通过划痕实验观测Trio对神经嵴细胞迁徙的影响。结果:斑马鱼体内敲低trio后,下颌发育不足,麦克尔软骨位置靠后,同时神经嵴细胞的迁徙距离减小。在体外实验中,Trio敲低组神经嵴细胞迁移后划痕面积增大。结论:Trio可能通过调节神经嵴细胞的迁徙功能促进颅颌面部神经嵴衍生物的发育。     

Trio对破骨细胞的调控作用

目的：构建破骨细胞特异性Trio基因敲除小鼠模型,探究Trio在骨改建过程中对破骨细胞的影响。方法：应用cre?loxp系统培育破骨细胞特异性Trio基因敲除小鼠,Micro?CT扫描小鼠股骨,股骨组织切片采用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察成骨细胞及破骨细胞数量。使用核因子（nuclear factor,NF）?κB受体活化因子配体及巨噬细胞集落刺激因子诱导小鼠骨髓细胞分化为破骨细胞,观测Trio对破骨细胞形成的影响。结果：Trio基因敲除小鼠的体型小,Micro?CT显示骨密度及相关参数升高。组织学染色表明基因敲除小鼠股骨的骨量增加,破骨细胞变少。体外实验中,Trio基因敲除小鼠骨髓细胞诱导分化的破骨细胞数量减少。结论：成功构建破骨细胞特异性Trio基因敲除小鼠模型,Trio敲除后,小鼠骨量增加,破骨细胞的分化受到抑制。     

miR-206-3p调控RAW264.7细胞向破骨细胞分化的体外研究

目的:探究miR-206-3p对破骨细胞生成的影响.方法:RAW264.7细胞体外诱导破骨分化,过表达或抑制其miR-206-3p,实时定量RT-PCR检测miR-206-3p表达水平.通过纤维状肌动蛋白染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成,实时定量RT-PCR及Western Blot检测破骨细胞分化相关基因——活化T细胞核因子1(NFATc1)的表达.结果:过表达miR-206-3p后,破骨细胞生成受到抑制,NFATc1表达水平降低,而敲减miR-206-3p后可促进破骨细胞的生成,NFATc1表达显著上调(P<0.05).结论:miR-206-3p通过影响NFATc1的表达,调控RAW264.7细胞向破骨细胞分化.