1型糖尿病患者外周血单个核细胞miR-146a、miR-150和miR-424的异常表达及临床意义

目的探讨微小RNA(miR-150、miR-146a、miR-181a、miR-424、miR-142-3p)在T1DM患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况及临床意义。方法应用实时荧光定量聚合酶反应检测69例T1DM患者、46例T2DM患者和56名健康对照者(NC)PBMCs miRNAs的表达水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线评价有差异表达的miRNAs对T1DM的诊断价值,同时将其表达量与临床指标进行相关性分析。结果与NC组和T2DM组比较,T1DM组PBMCs中miR-146a、miR-424、miR-150相对表达量降低(P0.05)。T1DM组和NC组ROC曲线下面积(AUC)分别为(0.860±0.061)、(0.905±0.058)和(0.844±0.066);T1DM组和T2DM组AUC分别为(0.868±0.068)、(0.921±0.064)和(0.698±0.065);与GADAb抗体阴性者比较,miR-146a、miR-150、miR-424在GADAb抗体阳性的T1DM患者中进一步下降。结论 miR-146a、miR-150、miR-424在T1DM患者PBMCs中低表达,可能与自身免疫状态有关,有助于早期发现T1DM患者。     

161例成人起病经典1型糖尿病微血管并发症的临床特征及相关风险因素分析

目的：分析成人起病经典1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）微血管并发症的临床特征及相关风险因素。方法：研究对象为2017年1月—2020年12月在南京医科大学第一附属医院内分泌科确诊的161例成人起病经典T1DM患者,对患者入组时的资料进行回顾性分析。将患者分为无微血管并发症组和微血管并发症组,比较两组在性别、病程、年龄、体重指数、舒张压、收缩压、糖化血红蛋白、血尿素氮等方面的差异,进一步采用Logistic回归分析成人起病T1DM微血管并发症的相关风险因素。结果：共纳入成人起病经典T1DM患者161例,男80例,女81例。T1DM合并微血管并发症的患病率为27.3%（44例）,其中糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变和糖尿病周围神经病变的患病率分别为5.6%（9例）、14.9%（24例）和18.0%（29例）。微血管并发症组的男性比例、病程、受访时年龄、收缩压、舒张压、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、血尿素氮、尿酸、糖化血红蛋白较无微血管并发症组更高,差异有统计学意义（P＜0.05）。多因素Logistic回归模型显示长病程（OR=1.093,95%CI=1.023~1.168）及收缩压（OR=1.049,95%CI=1.021~1.078）、糖化血红蛋白（OR=1.214,95%CI=1.006~1.464）和血尿素氮（OR=1.487,95%CI=1.113~1.987）水平升高是成人起病经典T1DM微血管并发症的相关风险因素（P＜0.05）。结论：应重视长病程、血糖和血压控制不佳、肾功能受损的成人起病经典T1DM患者,其合并微血管并发症的风险较大。     

负载HIP的耐受性树突状细胞对BDC2.5T细胞的免疫调节作用

目的：探究负载 HIP(hybrid insulin peptide)的耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cell，tolDC)对致糖尿病性 BDC2.5 T细胞的免疫调节作用。方法：采用细胞因子诱导生成NOD(non?obese diabetic)小鼠骨髓细胞来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell，iDC)，培养过程中额外加入维生素D3可生成tolDC，脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激24 h后可以分别获得 LPS?iDC、LPS?tolDC，收集其上清液检测细胞因子白介素(interleukin，IL)?12p70 及转化生长因子?β(transforming growth factor?β，TGF?β)，通过形态学及流式细胞术鉴定上述树突状细胞(dendritic cell，DC)的表型。将致糖尿病性T细胞即 BDC2.5 CD4+ T细胞与负载HIP的4组DC共孵育72 h后，检测T细胞增殖、活化以及调节性T细胞(regulatory T cell，Treg)的产生情况。结果：表型鉴定结果显示tolDC呈现低表达共刺激分子CD80和CD86、高表达共抑制分子PD?L1的耐受性表型， 在脂多糖的刺激下仍保持稳定，且与LPS?iDC相比，LPS?tolDC分泌低水平的IL?12p70、高水平的TGF?β。负载HIP的tolDC及 LPS?tolDC均可以抑制BDC2.5 T细胞的增殖和活化，诱导抗原特异性Treg的产生。结论：负载HIP的tolDC可以通过其稳定的耐受表型及功能抑制致糖尿病性BDC2.5 T细胞的增殖活化，诱导抗原特异性Treg的产生。     

1型糖尿病与HLA-DRB1?DQB1基因相关性研究

目的: 研究中国江苏地区汉族人群1型糖尿病(T1DM)与人类白细胞抗原(HLA)-DRB1?DQB1基因及单倍型频率的相关性?方法:选取江苏地区汉族人群T1DM患者(112例)与对照组(69例),运用聚合酶链反应-寡核苷酸探针序列特异性引物(PCR-SSO)技术,进行HLA-DRB1?DQB1基因分型,两组间等位基因频率比较采用χ2检验,通过Arlequin软件进行单倍型频率的分析?结果:112名T1DM患者中检测到DRB1位点等位基因17个(对照组19个),DQB1位点等位基因7个(对照组7个)?与对照组相比,T1DM组DRB1*0901?DRB1*0405和DRB1*0301频率明显增高,DQB1位点的DQB1*0201与DQB1*0303频率明显高于对照组;与对照组相比,T1DM患者明显升高的单倍型频率为:DRB1*0901-DQB1*0303?DRB1*0301-DQB1*0201?DRB1*0405-DQB1*0401和DRB1*0405-DQB1*0302?结论:中国江苏地区汉族T1DM患者HLA基因DR位点的DRB1*0901?DRB1*0405?DRB1*0301及DQ位点的DQB1*0201?DQB1*0303对T1DM易感?发现了4个新的具有易感作用的单倍型:DRB1*0901-DQB1*0303?DRB1*0301-DQB1*0201?DRB1*0405-DQB1*0401和DRB1*0405 -DQB1*0302?     

免疫印迹和放射免疫沉淀法检测胰岛自身抗体的比较

目的 探讨免疫印迹法(IB)和放射免疫沉淀法(RIP)在胰岛自身抗体检测中的差异.方法 IB和RIP分别测定本院55例和外院218例1型糖尿病(T1DM)患者的谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)和胰岛素自身抗体(IAA)水平;再从218例外院患者中随机抽取24例,用IB和RIP分别检测血清中GADA和IA-2A,评价两种方法的敏感性.结果 IB和RIP检测IA-2A阳性率无明显差异(P>0.05),而GADA、IAA总阳性率的差异均有统计学意义(P<0.05).两种方法联合检测GADA和IA-2A的抗体总阳性率为91.7%,高于单一方法的检测结果.结论 IB检测GADA和IAA的敏感性明显低于RIP,且两种方法联合检测的抗体检出率明显高于单一方法.     

新诊断1型糖尿病患者胰岛功能及其影响因素的临床研究

目的:探讨新诊断1型糖尿病患者胰岛功能水平及其影响因素。方法：选取2010年1月—2015年12月在南京医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的新诊断1型糖尿病患者105例,测糖化血红蛋白、胰岛自身抗体及HLA-A和-DR位点,控制血糖<10 mmol/L后行混合餐试验,测血糖、胰岛素及C肽,计算峰值C肽≥0.2 nmol/L的比例,并采用Logistic回归分析影响新诊断1型糖尿病患者胰岛功能的因素。结果：89.5%的患者初诊时峰值C肽≥0.2 nmol/L。初诊年龄≤18岁（OR=0.08,95%CI：0.01~0.90）,酮症或酮症酸中毒起病（OR=0.08,95%CI：0.01~0.83）,携带高危HLA-A-DRB1基因单倍型（OR=0.07,95% CI： 0.01~0.61）,胰岛自身抗体阳性数>2（OR=0.10,95%CI：0.01~0.87）者峰值C肽≥0.2 nmol/L率更低。结论：1型糖尿病患者初诊时仍有部分胰岛功能。因此,胰岛功能不能作为鉴别诊断1型或2型糖尿病的唯一依据。新诊断1型糖尿病患者胰岛功能与初诊年龄、酮症或酮症酸中毒起病、HLA-A-DRB1基因单倍型及胰岛自身抗体有关。     

胰岛人类白细胞抗原-A2限制性T淋巴细胞表位体外筛选方法的建立

目的 应用表位多肽与人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子结合力和解离率分析建立新型T淋巴细胞表位体外筛选方法.方法 采用基于矩阵算法的SYFPEITHI和BIMAS数据库预测6种胰岛细胞自身抗原[包括谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、胰岛素瘤相关抗原2(IA-2)、前胰岛素原(PPI)、胰岛特异性葡萄糖6-磷酸酶催化亚基相关蛋白(IGRP)、胰岛淀粉样多肽(IAPP)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)]的表位序列,根据预测的结合力指数和已有数据分析筛选并合成15个HLA-A2限制性候选表位多肽.采用HLA-A2转基因的T2细胞检测候选肽与HLA-A2的分子结合力,通过多肽/HLA复合物解离率实验分析复合物的稳定性.采用单因素方差分析进行数据统计.结果 T2细胞肽结合力分析显示,15个候选表位多肽中,IGRP152～160、IGRP215～223、IGRP228-236、PPI2～10、胰岛素B10～18、IA-2172～180、GFAP143～151与HLA-A2的分子结合力＞80%.肽/HLA复合物解离率分析显示,上述结合力较强的7个表位多肽中,胰岛素B10-18、IGRP228～236、GFAP143～151、IA-2 172～180 4 h解离率低于20%.结论 本实验建立的候选多肽结合力与解离率相结合的T淋巴细胞表位体外筛选方法有助于减少研究中目标肽数量,推进1型糖尿病T淋巴细胞诊断方法的研究.     

1型糖尿病研究进展——12thIDS会议侧记

T1DM是遗传易感个体在环境因素触发下,由T淋巴细胞介导的以胰岛B细胞选择性破坏为特征的器官特异性自身免疫性疾病。近年来,TIDM在基础和临床研究领域都有了新进展。本文围绕2012年在加拿大维多利亚市召开的第12届国际自身免疫糖尿病会议（IDS）内容,从发病机制、免疫标志物检测新技术、预防治疗临床研究、动物模型等方面对T1DM的全球研究进展和热点作简要评述。     

1型糖尿病患者人类白细胞抗原Ⅰ类基因与胰岛功能及胰岛自身抗体的关系

目的 探讨1型糖尿病（T1DM）患者胰岛功能、胰岛自身抗体[谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）、胰岛素自身抗体（IAA）和阳离子外流锌转运体蛋白抗体（ZnT8A）]与人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ类等位基因的关系.方法 选取2008年6月至2012年10月在南京医科大学第一附属医院及其开放课题26家医院（共同组成江苏省T1DM合作组）内分泌科就诊的T1DM患者330例.采用聚合酶链反应-寡核苷酸探针序列特异性引物（PCR-SSO）技术进行T1DM患者HLAⅠ类基因（A、B基因）分型,放射免疫配体法检测胰岛自身抗体（GADA、ZnT8A、IA-2A、IAA）.选择同地区、遗传背景相近的中华骨髓库无关供者HLA分型资料20 248份作为研究对照.通过Arlequin软件进行HL4Ⅰ类等位基因频率及单倍型频率分析.定量资料的组间比较采用独立样本的t检验.结果 与对照组相比,T1DM组HLA-A＊24、B＊08、B＊41、B＊54、B＊58频率明显升高（OR=1.250、2.062、6.927、2.472、1.608,均P＜0.05）;A＊01、B＊07、B＊27、B＊52、B＊57频率显著下降（OR =0.481、0.464、0.372、0.160、0.315,均P＜0.05）;HLA-A＊24-B＊ 54单倍型频率明显升高（OR=4.128,P＜0.05）.携带A＊02基因位点的T1DM患者其空腹C肽水平高于不携带A ＊02的患者[（356±249）比（250±199） pmol/L,t=-3.004,P＜O.05].未发现HLAⅠ类基因与胰岛自身抗体存在统计学关联.结论 江苏地区汉族T1DM患者中,HLAⅠ类等位基因不仅可影响T1DM的发病风险,而且可能影响发病后胰岛功能的衰竭速度.