钙敏感性受体活化促进缺血/再灌注损伤心肌细胞的凋亡及炎症反应

目的:探讨钙敏感性受体活化与心肌细胞缺血/再灌注损伤后凋亡及炎症反应的关系?方法:缺氧/复氧法处理新生大鼠心肌细胞,建立心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型?新生大鼠心肌细胞随机分为对照组?缺血/再灌注组?GdCl3(CaSR激动剂)组?GdCl3 + SB203058(p38MAPK特异抑制剂)组?TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定钙敏感性受体(calcium-sensing receptor,CaSR)?肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达;免疫蛋白印迹法(Western blot)测定Caspase-3?Bcl-2 和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白表达?结果:模拟I/R增强了CaSR?TNF-α?IL-6?p38MAPK的表达及心肌细胞凋亡;GdCl3进一步增强了上述作用,而对Caspase-3和Bcl-2则分别起着正向及负向调节作用;与GdCl3组相比,GdCl3 + SB203058组p38MAPK?TNF-α?IL-6的表达明显降低,而心肌细胞凋亡及CaSR的表达无明显改变?结论:CaSR激活不仅促进新生鼠心肌细胞I/R损伤后心肌细胞凋亡,且通过p38MAPK信号转导促进I/R区域的炎症反应?     

钙敏感性受体活化与心肌细胞缺血/再灌注损伤凋亡的关系

目的:探讨活化的钙敏感性受体与心肌细胞缺血/再灌注损伤凋亡是否有关。方法:新生鼠心肌细胞在模拟心肌缺血状态下,培养2 h后,在标准培养液中再培养24 h,从而建立一个模拟心肌缺血/再灌注模型。使用末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL),检测心肌细胞凋亡。钙敏感性受体mRNA表达通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定。采用免疫蛋白印迹法(Western blotting),测定Caspase-3和Bcl-2。结果:模拟I/R增强了钙敏感性受体表达及心肌细胞凋亡。GdCl3,一种特殊的CaSR激活剂进一步增强了钙敏感性受体表达及心肌细胞凋亡,而对Caspase-3和Bcl-2则分别起着正向及负向调节作用。结论:CaSR与新生鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤及心肌细胞凋亡有关,其促进了Caspase-3而抑制了Bcl-2的表达。     

血管内皮生长因子165通过抑制钙敏感性受体减少缺血/再灌注心肌细胞凋亡

目的:探讨血管内皮生长因子165(vascu-lar endothelial growth factor 165,VEGF165)在缺血/再灌注损伤中的抗细胞凋亡作用及与钙敏感性受体(calciumsensing receptor,CaSR)表达下调的关系。方法:新生鼠心肌细胞在模拟心肌缺血状态下孵育2 h,然后在标准培养液中再培养24 h,从而建立一个模拟心肌缺血/再灌注模型。通过末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡。CaSR mRNA表达通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定。通过免疫印迹法(Westernblot)测定促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2含量。结果:模拟的缺血/再灌注后CaSR mRNA的表达(I/R组:2.6±0.4;对照组:1.0±0.3,P<0.01)和TUNEL阳性细胞增加(I/R组:15.3%±2.5%;对照组:2.9%±1.4%,P<0.01)。GdCl3、CaSR mRNA的表达(GdCl3组:4.5±0.6;I/R组:2.6±0.4,P<0.01)及TUNEL阳性细胞进一步增加(GdCl3组:25.4%±2.6%;I/R组:15.3%±2.5%,P<0.01),同时上调了Bax表达(GdCl3组:1.93±0.28;I/R组:1.50±0.21,P<0.01),下调了Bcl-2的表达(GdCl3组:0.82±0.18;I/R组:1.71±0.30,P<0.01)。VEGF165组Bax表达减少(GdCl3+VEGF165组:1.12±0.23;GdCl3组:1.93±0.28,P<0.05)和Bcl-2的表达增加(GdCl3+VEGF165组:2.56±0.54;GdCl3组:0.82±0.18,P<0.05),TUNEL阳性细胞减少(GdCl3+VEGF165组:11.8%±1.9%;GdCl3组:25.4%±2.6%,P<0.05),CaSR mRNA的表达下调(GdCl3+VEGF165组:1.5±0.4;GdCl3组:4.5±0.6,P<0.01)。结论:VEGF165通过抑制CaSR,促进Bcl-2和抑制Bax的表达来减少缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡。     

肌醇依赖性激酶1α对心脏发育的影响

目的 探讨肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)对非洲爪蟾心脏发育的影响.方法 通过显微注射IRE1αmRNA实现基因过表达,注射IRE1α或其下游基因XBP1特异性反义寡核苷酸(MO)实现基因封闭;利用全胚胎原位杂交方法检测基因表达,免疫组化方法检测体节形成.结果 过表达IRE1α对心脏发育无明显影响;利用MO封闭IRE1α或XBP1后,心脏明显减小,形态异常,心脏发育相关基因nkx2.5表达下降,但对体节无影响.结论 IRE1α影响非洲爪蟾心脏的发育,可能是通过XBP1发挥作用.     

糖尿病和冠心病患者血清糖基化终产物与血管细胞黏附分子1浓度的变化

目的 研究糖基化终产物(AGEs)与血管细胞黏附分子1(VCAM-1)间的关系,探讨AGEs在动脉粥样硬化中的作用.方法 分别抽取30例健康人群(A组)、32例糖尿病患者(B组)及36例冠心病患者(C组)的外周血液,用ELISA法检测各组血清中AGEs与VCAM-1的水平.结果 B组AGEs和VCAM 1浓度均较A组明显升高[(12.43±0.52) U/ml vs.(8.82±0.36) U/ml和(735.50±55.75) pg/ml vs.(417.80±27.34) pg/ml](P＜0.01)；而C组AGEs和VCAM-1浓度为(9.04±0.38) U/ml和(417.80±27.34) pg/ml,均与A组相仿(P＞0.05).B组、C组血清中AGEs浓度与VCAM-1浓度均呈显著正相关(r=0.7347、0.6329,P＜0.01).结论 AGEs在体内可以促进VCAM-1的分泌,这可能是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的重要机制之一.     

糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞VCAM-1表达的影响

目的:探讨糖基化终产物 (AGEs))对人单核细胞源树突状细胞(DCs)血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响?方法:用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L和重组人白细胞介素-4(rhIL-4) 20 μg/L的RPMI1640培养,使其分化为DCs,加入糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA) 200 μg/ml,采用RT-PCR和Western blot法,观察AGE-HSA对DCs VCAM-1 mRNA和蛋白表达的影响,同时检测培养液上清中IL-12和IL-18的浓度?结果:与空白对照相比,AGE-HSA可上调DCs VCAM-1 mRNA和蛋白的表达(P < 0.05),并且明显促进了DCs IL-12和IL-18的分泌(P < 0.05)?AGE-HSA干预组与空白对照组相比差异无统计学意义(P > 0.05)?结论:AGEs能够上调DCs VCAM-1的表达,并且促进DCs IL-12和IL-18的分泌,这可能是糖尿病通过DCs促进动脉粥样硬化发生的重要机制之一?     

封闭内质网蛋白激酶IRE1α对肠道发育的影响

目的探讨肌醇酶1α(IRE1α)在非洲爪蟾胚胎发育中的作用。方法利用全胚胎原位杂交法检测IRE1α在胚胎发育晚期的表达;设计合成特异性封闭IRE1α的反义寡核苷酸(MO),通过显微注射方法实现基因封闭。结果 IRE1α在胚胎发育晚期高表达于胰腺。在体外翻译系统中,IRE1αMO可以阻断IRE1α蛋白质的合成。封闭IRE1α对胚胎发育早期无明显影响;但在发育晚期导致肠道结构消失,胚胎发育明显异常。结论 IRE1α对非洲爪蟾胚胎发育早期无影响,但在晚期导致肠道发育异常。     

姜黄素对代谢综合征大鼠血浆TNF-α和血清sICAM-1水平的影响

目的：探讨姜黄素对代谢综合征大鼠血浆TNF-α和血清sICAM-1水平的影响。方法：雄性SD大鼠20只施行两肾一夹术后普通饲料喂养4周，诱发肾性高血压，继以高果糖饲料喂养4周，诱导建立代谢综合征模型。将造模成功的17只SD大鼠随机分为模型组（n=8），姜黄素组（200mg／kg／d）（n=9），另设假手术对照组（n=8）。姜黄素组直接灌胃给药，模型组和假手术组灌等量的生理盐水。用药6周后，检测血清学指标，以及用ELISA法测定血浆TNF-α和血清sICAM-1的蛋白水平，以胰岛素敏感指数判断机体胰岛素抵抗状态。结果：模型组大鼠血浆TNF-α和血清sICAM-1水平明显高于正常对照组大鼠（P〈0．05）；姜黄素组大鼠血浆TNF-α和血清sICAM-1水平明显低于模型组大鼠（P〈0．05）。结论：姜黄素能明显降低代谢综合征大鼠血浆TNF-α和血清sICAM-1水平，改善胰岛素抵抗，阻止或延缓减慢动脉粥样硬化的发生。     

新疆少数民族地区先天性心脏病核心家系标本库的建立和应用

目的 :探讨在新疆伊犁少数民族地区建立多民族先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)核心家系标本库,样本的采集、保存和质量控制,为各民族CHD遗传学研究提供实验标本和研究资料。方法:超声诊断明确并进行手术治疗的CHD先证者及其血缘父母进行调查和填写调查表,采集人群的血液学标本和组织标本按分子生物学实验要求分装处理,深低温冷冻保存。结果:收集多民族CHD核心家系患者200余例,存储标本700余份。具备完整的血样标本、心肌标本和相关临床资料。包括哈萨克族、维吾尔族、汉族、回族、蒙古族、锡伯族等。调查中发现2例CHD家系患者。通过标本库的建立和应用,摸索积累与患者及家属交流、争取配合、采样、保存和信息管理的经验。结论:建立规范的多民族CHD核心家系标本库是进行CHD遗传学研究的基础之一,完善的标本及相关资料为后续研究提供了保证,标本库的建立有利于合理有效地利用资源     

GSIS相关基因在大鼠胚胎胰腺发育后期表达模式

目的探讨大鼠胚胎发育晚期胰腺13细胞GSIS功能相关基因的表达趋势。方法利用显微分离方法分离胚胎15．5d（E15．5）和胚胎18．5d（E18．5）胰腺组织，提取RNA并与大鼠基因组芯片杂交。数据处理后，获得E15．5和E18．5胰腺组织基因表达谱。进而利用RT—PCR对芯片结果进行验证。结果在E15．5至E18．5，肝核因子（hepatocyte nuclear factor，Hnf）1α及4α特异表达，其下游基因胰岛素1（Insl），葡萄糖转运体2（Glut-2）、L型丙酮酸激酶（L—PK）和醛缩酶B（Aldolase B）表达上调，而葡萄糖激酶（GCK）无表达。RT-PCR方法进一步验证，Hnflα及Hnf4α在E18．5特异表达，至初生时，Hnflα表达下调，Hnf4α无表达，GCK明显表达。结论Hnflα及Hnf4α及其下游基因在大鼠胚胎胰腺发育后期出现高表达。