射频消融亚致死性温度对肝癌干细胞的影响

目的 研究亚致死温度射频消融(RFA)对肝癌干细胞(LCSC)产生及其相关转录因子表达的影响.方法 利用小鼠Hep1-6肝癌细胞株和肝细胞癌(HCC)患者临床样品,检测LCSC相关标志物和转录因子的表达.结果 不同温度分别刺激Hep1-6细胞后发现,45℃是不能诱导细胞死亡的亚致死性温度.流式细胞仪(FCM)检测显示45℃处理可引起CD13+、CD44+、CD90+、CD133+ Hep1-6细胞水平明显上调,提示45℃温度导致Hep1-6细胞中以上各型LCSC产生增加;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测显示45℃温度导致CD13、CD90、CD133 mRNA水平明显上调.CD13 mRNA水平在5例HCC患者复发肝癌组织中均明显上调,CD133 mRNA在4例复发肝癌中上调,CD90 mRNA仅在1例复发肝癌中上调;FCM检测显示CD13+ LCSC水平在4例复发肝癌中明显上调,CD133+ LCSC水平仅在1例复发肝癌中上调,提示CD13+ LCSC水平上调与45℃温度关系更密切.RT-qPCR检测显示4例CD13+ LCSC上调的复发肝癌患者13个LCSC相关转录因子中Sox2、Stat1明显上调,FCM检测显示45℃处理Hep1-6细胞后Sox2、Stat1 mRNA明显上调.用Sox2、Stat1 siRNA分别沉默了Sox2、Stat1基因,表明Sox2 、Stat1均参与了45℃温度诱导的CD13+ LCSC产生.结论 RFA治疗中45℃亚致死性温度所致CD13+ LCSC水平增高与Sox2、Stat1表达有关.该结果对肝癌复发研究有一定借鉴意义.     

经皮注入骨水泥与保守治疗对骨质疏松性胸腰椎骨折临床疗效分析

目的:观察经皮注入骨水泥(PVP)与保守治疗对骨质疏松性胸腰椎骨折的疗效。方法:将骨质疏松伴胸腰椎骨折患者80例随机分为经皮注入骨水泥组(I组)和保守治疗组(II组),每组40例,I组给予PVP治疗,II组给予卧床、补钙及口服促进骨折愈合药物等治疗。观察每组临床疗效和用药前后疼痛缓解程度及Cobb角的变化。结果:I组总有效率为97.5%与II组的95%(P0.05)差别无统计学意义,治疗8周后,I组与II组Cobb角的变化无统计学意义。结论:经皮注入骨水泥与保守治疗对治疗骨质疏松性胸腰椎骨折的疗效无显著差别。     

人类CC3配体样蛋白1在果蝇Schneider-2细胞的表达和活性分析

目的对HIV-1辅助受体趋化因子受体5（CCR5）配体人类CC3配体样蛋白1（CCL3L1）进行果蝇Schneider-2细胞融合蛋白表达，纯化后活性分析。方法克隆人类CCL3L1cDNA，构建CCL3L1表达载体pMT／BiP／His，获得Schneider-2果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白，同时克隆pCDNA3．1-flag—CCR5表达载体，培养稳定表达flag—CCR5的细胞株，检测表达人趋化因子CCL3L1活性。结果成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白真核表达载体pMT／BiP／His，表达并纯化出融合蛋白His—CCL3L1。免疫沉淀法和Western印迹法分析发现，纯化的His—CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体，His—CCL3L1蛋白在浓度1～50nmol／L存在剂量依赖性，50～100nmol／L无剂量依赖性。结论果蝇Schneider-2细胞表达的His—CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性，为进一步探讨CCL3L1影响HIV-1感染的机制奠定了基础。     

外源性 AFP 对肝癌细胞增殖和抗凋亡的作用研究

目的：探讨外源性甲胎蛋白（ AFP）对体外培养的肝癌细胞系的生物学功能及意义。方法该实验选用了HepG2（AFP阳性）和HLE（AFP阴性）两种常见的肝癌细胞系,再加入不同浓度的外源性AFP处理24 h后,用MTT检测细胞的增殖情况;在这两种细胞系中加入凋亡诱导剂ATRA处理的同时加入外源性AFP,检测AFP对于细胞的抗凋亡能力的影响。结果在HepG2和HLE细胞中,加入不同浓度的外源性AFP后, MTT结果显示AFP可以明显促进肝癌细胞的增殖;而加入凋亡诱导剂ATRA之后,FCM结果显示细胞凋亡明显增加,加入外源性AFP后,细胞凋亡的情况明显好转,外源性AFP可以增强肝癌细胞的抗凋亡能力。结论外源性AFP不仅可以促进肝癌细胞系的增殖,同时还可以增强肝癌细胞的抗凋亡能力。     

晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用

目的 在非酒精性脂肪肝体外模型中研究油酸长期刺激对自噬的影响及其作用.方法 用含浓度为400 μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型.向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生.采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬.用...     

TAT-HBX-EGFP蛋白的表达与纯化

目的构建TAT-HBx-EGFP质粒,转化大肠埃希菌BL21,进行蛋白的表达、鉴定及纯化。方法 PCR扩增目的基因HBx,进行EcolR1单酶切,与经EcolR1单酶切的TAT-EGFP质粒进行连接,转化大肠埃希菌BL21,利用IPTG对其进行诱导。应用West-ern blot方法鉴定表达的融合蛋白,采用Ni2＋-金属螯合亲和层析柱法对融合蛋白进行纯化。结果得到构建好的TAT-HBx-EGFP质粒及纯化的目的融合蛋白TAT-HBX-EGFP。结论通过对TAT-HBx-EGFP质粒的构建和TAT-HBX-EGFP蛋白的表达与纯化,为进一步研究HBX蛋白的致肝癌作用奠定了实验基础。     

K18及K18磷酸化改变与慢性HBV感染后肝脏疾病的关系

细胞角蛋白属于中间丝蛋白，是细胞骨架的构成部分。细胞角蛋白包括30多种分子，细胞角蛋白18（K18）是其中的一种类型，研究发现K18以及K18不同位点的磷酸化与肝脏疾病相关。K18高度磷酸化与肝脏疾病进展相关。     

失代偿期乙型肝炎肝硬化抗病毒治疗耐药增加肝细胞癌风险研究

目的分析失代偿期乙型肝炎肝硬化患者队列肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生的危险因素及抗病毒方案的优化。方法选择2008年1月—2011年10月随访2年的193例乙型肝炎肝硬化患者队列,包括拉米夫定(LAM)组29例、阿德福韦(ADV)组57例、替比夫定(LDT)组30例、恩替卡韦(ETV)组38例及对照组39例。按HCC发生前是否耐药将接受抗病毒治疗患者分为耐药组(31例)和无耐药组(123例),分析各组Child-Pugh评分、病毒学指标、耐药率、HCC发生率、患者生存率及安全性。结果各抗病毒治疗组在随访2年时Child-Pugh评分较基线均显著下降(P均<0.05);血清HBVDNA水平明显低于基线值,各组HBeAg血清学转换率和HBeAg阴转率差异无统计学意义;ETV组累计2年耐药率低于LAM组、ADV组和LDT组(P均<0.05);抗病毒治疗各组及对照组间累计2年HCC发生率、患者生存率差异无统计学意义,但耐药组HCC发生率明显高于无耐药组和对照组(P均<0.05);在2年随访中各组均未出现严重肌病等不良反应。结论 ETV治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化疗效优于其他单药治疗,抗病毒治疗耐药可增加HCC发生风险。