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现今世界上发达国家的人均寿命已经超过80岁,然而19世纪以前,人类的平均寿命仅有30~40岁,传染性疾病是当时占据首位的死亡原因。一个多世纪以来,人类寿命和健康水平的提高,得益于疫苗和药物的诞生,而在发现和发明这些具有里程碑式的“灵丹妙药”背后,是一场科学的革命。本文对从巴斯德革命性科学“微小生命体理论”的提出,到“细菌致病理论”的建立,到由此诞生的N个控制传染病的“灵丹妙药”发现和发明,进行了比较全面的文献梳理和阐述。旨在让读者在“身临其境”的COVID-19传染病大流行期间,能够重温一下在抗击“瘟疫”的历史长河中诞生的革命性的科学和伟大的科学家,并致敬各行各业为抗击疫情而努力的人们。  相似文献   
3.
内含肽是一种能够介导蛋白质分子从前体分子中自我切除,同时将其双侧的外显肽蛋白通过肽键连接起来的功能性蛋白质,其中断裂型内含肽在抗体连接领域有着广泛应用。但由于天然断裂型内含肽C端可特异性识别外显肽的前3位氨基酸序列——半胱氨酸、苯丙氨酸和天冬酰胺(CFN),因此在蛋白剪接反应后不可避免的会引入外源氨基酸。由于本课题组前期开发出的断裂内含肽介导的双特异性抗体药物装配平台也存在该缺陷,因此本研究尝试采用抗体铰链区的半胱氨酸、天冬氨酸和赖氨酸(CDK)取代“CFN”作为内含肽的识别位点,并构建突变型断裂内含肽Npu*GEP DnaE。结果表明,突变体可以识别“CDK”并成功发生了内含肽剪接反应。进而对影响该内含肽剪接反应平台的各因素如NaCl浓度、DTT浓度、pH和温度等进行了考察,结果表明在所考察的范围内断裂内含肽的剪接反应均可很好的进行。该内含肽剪接反应平台的建立将有助于减少外源氨基酸的引入,进一步拓展了内含肽底物宽泛性,为内含肽应用于抗体药物特别是双特异性抗体药物的装配提供了技术支持。  相似文献   
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为实现免疫毒素在大肠杆菌内的可溶性表达,避免包涵体的形成带来的繁琐操作,本实验选用抗间皮素单克隆抗体SS1,以及其与毒素PE38KDEL连接的产物SS1P为实验对象;采用促溶标签结合低温诱导方式实现重组蛋白在大肠埃希菌(SHuffle T7)胞质内可溶性表达,其中促溶标签连接在NpuCD118G突变体的N端,SS1/SS1P连接在NpuCD118G突变体的C端;采用Dextrin Beads 6FF柱亲和色谱和镍柱亲和色谱方法实现目的蛋白纯化;采用分别表达纯化后混合的方法实现断裂内含肽Npu DnaE的自我断裂;采用镍柱亲和色谱除去未剪切的前体和断裂后促溶标签,其中,SS1进一步用Capto L捕获富集;采用Fortebio检测蛋白亲和力。本实验通过内含肽与促溶标签和纯化标签连用,实现了免疫毒素在大肠埃希菌中的可溶性表达,简化了纯化方式。该方法为开发基于大肠埃希菌表达系统的可溶性表达、纯化免疫毒素类药用重组蛋白方法提供了理论参考。  相似文献   
5.
断裂内含肽Npu DnaE介导的蛋白质剪接、剪切反应,可以应用于蛋白质工程领域诸多方面,但其C段重组蛋白在表达纯化过程中发生的降解,降低了重组蛋白的产率和纯度。为提高NpuC段稳定性,本研究构建了N端融合NpuN2片段的NpuC延长变体N2C。将N2C在BL21(DE3)中进行表达、用亲和色谱进行纯化,用ImageJ扫描计算表达纯化中降解情况,进而对影响内含肽C端剪切反应的各因素如温度、DTT浓度、N/C比例等进行了考察。结果表明,延长变体N2C使降解产物占比降低至2.7%~7.2%,在1 mmol/L DTT催化,N/C比例为5∶1,37 ℃反应条件下,30 min产物生成率达90%。N2C在提升Npu DnaE内含肽C段在大肠埃希菌表达系统中表达、纯化过程的稳定性的同时,保留了其C端剪切反应的活性,对其在蛋白纯化领域应用有重要意义。  相似文献   
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陈俊升  景兰  邵雷 《药学进展》2009,33(8):337-343
介绍组合生物合成技术在药物发现中的应用情况及研究进展。近年来迅速发展的组合生物合成技术为微生物活性代谢产物的结构修饰提供了新的方法,利用该技术,通过基因水平的改造,可获得结构新颖的化合物,为药物筛选拓宽了来源。  相似文献   
7.
为了得到具有糖基转移酶活性的重组蛋白,从万古霉素产生菌总DNA中克隆万古霉素糖基转移酶基因gtfE,连入pET-37b构建表达质粒并转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,体外测定纯化后的重组蛋白糖基转移酶活性,用HPLC和ESI-MS检测反应产物。结果表明,重组蛋白具有预期活性,可以催化尿苷二磷酸葡萄糖与万古霉素苷元的糖基化反应。本研究为获得糖基多样性的万古霉素奠定理论基础。  相似文献   
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目的:从临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中克隆氨基糖苷类抗生素磷酸化酶基因并异源表达,建立其磷酸化反应的体外测活方法。方法:考察临床分离MRSA对氨基糖苷类抗生素的敏感性,从中克隆磷酸化酶基因,并连入pET28a构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化;使用ESI-MS以及抗菌活性实验测定其磷酸化酶活性。结果:药敏实验表明临床分离的6株MRSA均对氨基糖苷类抗生素不敏感,重组表达克隆到的磷酸化酶,表达产物纯化后的纯度大于90%,体外催化试验表明,重组磷酸化酶2 h内可以催化反应体系内的卡那霉素B完全磷酸化。结论:异源表达的氨基糖苷类抗生素磷酸化酶具有很好的活性,体外测活方法可靠快捷,为建立氨基糖苷类抗生素磷酸化酶抑制剂筛选模型打下基础。  相似文献   
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