亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的机制研究

目的探究亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的分子机制。方法利用5μmol/L亚砷酸钠处理HEK293ET细胞,收集细胞样品,利用实时定量PCR(Q-PCR)检测p66Shc转录水平,Western Blot检测Sirt1的蛋白表达;利用Sirt1siRNA和对照siRNA分别转染细胞,随后5μmol/L亚砷酸钠处理细胞,收集细胞样品,Western Blot检测亚砷酸钠对Sirt1和p66Shc蛋白表达的影响。结果与对照组相比,5μmol/L亚砷酸钠处理组p66Shc转录水平显著升高(P0.001),Sirt1蛋白水平显著降低(P0.001)。Sirt1siRNA转染能够抑制细胞Sirt1的表达。亚砷酸钠处理后,Sirt1siRNA转染组Sirt1的表达与对照siRNA转染组相比显著降低(P0.001),p66Shc的表达显著升高(P0.001)。结论亚砷酸钠可能通过抑制Sirt1的表达上调p66Shc的表达。     

海马组织蛋白质双向电泳条件实验研究

目的优化大鼠海马组织蛋白质双向凝胶电泳分离(2-DE)的实验条件。方法分离并比较不同大鼠海马组织总蛋白的制备方法,pH 3～10非线性胶条(NL)、pH 4～7的2种不同pH梯度预制胶条,300、700μg不同质量蛋白上样量,保存2个月及保存1年的标本对2-DE效果的影响。结果本研究采用裂解液及样本制备方法所得蛋白适于2-DE,海马组织总蛋白等电点(PI)主要在4～8;与300μg相比,700μg蛋白上样量对于信噪比控制效果更理想;新鲜标本中影响聚焦的物质较少,凝胶横纹少。结论新鲜海马组织匀浆经多次低温重复离心制备的蛋白,采用pH 4～7预制胶条(24 cm)及700μg上样量获得的2-DE图谱更理想。     

锰铅镉复合暴露对人神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的探索重金属复合暴露对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞的毒性效应。方法将SK-N-SH细胞分别暴露于空白培养基(对照)和氯化锰(125、250、500、750、1 000、1 500、2 000、4 000、6 000μmol/L),乙酸铅(500、750、1 000、1 500、2 000、2 500、3 000μmol/L),氯化镉(5、10、15、20、30、40、60、80μmol/L)单一及二元、三元复合溶液24、48、96 h后,检测细胞存活率,计算锰、铅、镉的药物抑制浓度(IC)。其中,二元、三元复合溶液的浓度均为相应金属IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)的等毒效应比混合,分别用毒性单位法、混合毒性指数法对毒性效应进行评价。结果与对照组相比,不同浓度锰、铅、镉单独染毒不同时间SK-N-SH细胞的存活率均较低,除500μmol/L铅染毒24、96 h组和5μmol/L镉染毒24、48 h组外,差异均有统计学意义(P0.05);随着锰、铅、镉单独染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SK-N-SH细胞的存活率均呈下降趋势。三种金属对SK-N-SH的细胞急性毒性依次为镉(IC_(50):38.728μmol/L)锰(IC_(50):442.739μmol/L)铅(IC_(50):1 624.850μmol/L)。同一金属不同染毒时间的IC_(50)排序均为96 h48 h24 h。锰和镉复合暴露对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h均表现为拮抗作用,在48 h均表现为协同作用;96 h在毒效应为IC_(10)、IC_(20)时均表现为部分相加作用,在IC_(30)、IC_(50)时均表现为协同作用。镉和铅对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h毒效应为IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)时均表现为拮抗作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用;在48 h毒效应为IC_(10)时表现为拮抗作用,在IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)时均表现为部分相加作用;在96 h时均表现为部分相加作用。铅和锰对SK-N-SH细胞的联合毒性在24、96 h毒效应为IC_(50)时分别表现为简单相加、协同作用,其余均表现为部分相加作用。锰、铅、镉对SK-N-SH细胞的联合作用在24、96 h时均表现为部分相加作用;48 h时在IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)均表现为协同作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用。结论三种金属对SK-N-SH细胞的毒性均表现为随暴露时间的延长而增强的趋势。金属复合暴露呈现复杂的毒性效应,毒性效应与特定的金属组合、暴露时间、暴露浓度密切相关。     

散发性夜发额叶癫痫遗传学病因分析

目的研究中国夜发性额叶癫痫（nocturnal frontal lobe epilepsy,NFLE）散发患者遗传学病因,探讨烟碱乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptor,nAChR）相关基因在NFLE发病机制中的作用。方法经临床资料、家族史及辅助检查综合诊断,收集77例中国非家族性NFLE患者,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增nAChR相关基因CHRNA4、CHRNB2及CHRNA2部分区域,确认是否存在突变。如存在突变,则进一步分析突变对蛋白质疏水性和二级结构造成的影响。结果发现1例6岁患儿存在1种CHRNA4的新型杂合错义突变,导致nAChR-α4亚单位第3、4跨膜区间胞内环405位的丝氨酸突变为苯丙氨酸（S405F）。在200例中国人群健康对照筛查中未见同样突变。突变对蛋白质疏水性及二级结构均有一定影响。结论中国人群散发NFLE病例中存在CHRNA4基因的S405F突变,可能是NFLE新型遗传学病因。     

新烟碱类杀虫剂吡虫啉对大鼠卵巢功能的影响

目的 探讨新烟碱类杀虫剂吡虫啉(IMI)对大鼠卵巢功能的影响。方法 将30只21日龄的雌性SD大鼠随机分为3组,每组10只,根据IMI暴露的浓度分为低浓度组(19 mg·kg^-1·d^-1)和高浓度组(38 mg·kg^-1·d^-1),对照组则给予同等体积的生理盐水。连续灌胃30 d,对动物状态进行记录;采用电化学发光法测定大鼠血清中孕酮和雌二醇(E₂)的含量,Western Blot法检测大鼠卵巢中胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和芳香化酶(Aromatase)的表达量,行卵巢组织切片苏木精-伊红(HE)染色以观察卵泡形态、统计各级卵泡数量,同时进行抗苗勒管激素(AMH)免疫组化染色观察其表达量的变化。结果 各组大鼠灌胃期间毛发、进食情况、活动情况均无明显异常。随IMI暴露剂量增加,大鼠血清孕酮和E₂水平也逐渐增加;与对照组相比,低浓度组和高浓度组孕酮水平略增高,但均无显著性差异(P>0.05);与对照组相比,高浓度组血清中E₂...     

牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡

目的观察牛磺酸对锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡的拮抗作用。方法体外皮层神经细胞至最佳生长状态时进行实验。细胞随机分7组,即对照组、染锰组(低、中、高剂量0.2,0.6,1.0mmol/L)、干预组(染低、中、高浓度锰同时分别给予1.5mmol/L牛磺酸干预)。各组处理24h后终止培养,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞术(FCM)定性、定量检测神经细胞凋亡的变化。结果1.TUNEL显示染锰后神经细胞呈现典型的凋亡形态学变化,牛磺酸对中浓度锰有一定的拮抗作用;2.FCM结果表明牛磺酸能拮抗锰诱导的神经细胞凋亡。结论牛磺酸对锰所致体外培养的皮层神经细胞的凋亡有保护作用。     

杜仲叶中氯原酸的提取分离研究

研究了杜仲叶中氯原酸的提取分离条件。结果表明：以水为溶剂，将杜仲叶粉末于40℃下以1：6的料液比浸提4次，每次30min，氯原酸的浸出率为（94．11±0．53）％（n=3）。水提液经浓缩及分离纯化得氯原酸提取物，得率为（4．11±0．11）％（n=3），纯度为（23．73±0．55）％。     

氢醌抑制HL-60细胞分化上调过氧化物酶2-Cys过氧化物氧还蛋白表达

目的研究氢醌(HQ)对HL-60细胞向单核系、粒系分化的影响。方法 HQ 1,5和50μmo·lL-1分别与豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)20 nmol·L-1或1.25%DMSO共同处理细胞,分别于48和96 h收集细胞。通过观察细胞形态、硝基四氮唑蓝还原反应鉴定细胞分化;CCK-8检测细胞增殖,荧光定量PCR检测2-Cys过氧化物氧还蛋白(Prxs)基因表达的变化;Western印迹检测2-Cys Prxs蛋白表达的变化。结果在HQ1~50μmol·L-1作用下,HL-60细胞向单核系分化受到抑制;HQ1和5μmol·L-1对DMSO诱导的粒系分化无影响,但HQ50μmol·L-1可抑制细胞向粒系分化。HQ5和50μmol·L-1与诱导剂的共同作用可以抑制HL-60细胞增殖。与正常对照组比较,PMA和DMSO组2-Cys Prxs基因表达水平均有降低的趋势,HQ1,5和50μmol.L-1+PMA20 nmol·L-1组PrxⅠ,PrxⅢ和PrxⅣ各个基因表达水平与PMA组比较均有增高的趋势;DMSO诱导分化组中仅HQ 50μmol·L-1+1.25%DMSO组PrxⅠ和PrxⅢ基因表达水平与单独DMSO组比较显著增高(P<0.05)。结论 HQ1和5μmol.L-1可以抑制HL-60细胞向单核系分化,HQ50μmol·L-1可抑制细胞向粒系分化,并上调PrxⅠ和PrxⅢ基因的表达。     

延续护理应用于压疮患者的研究进展

延续护理是指专门的医护人员在患者出院后给予其转移性的、延伸性的护理服务。建立社区-医院-社区的双向服务模式,利用高速发展的信息技术,可解决病人出院后的护理延续问题。确立医院与社区卫生服务中心的关联,通过建立信息沟通交流平台,将压疮患者及压疮高危患者的信息发送至社区,畅通患者的信息交接渠道,实现患者信息和医疗护理服务的延续,对提高压疮患者及家属遵医行为、预防压疮发生、缩短压疮的愈合时间具有积极意义。     

牛磺酸改善染锰大鼠学习记忆能力的海马蛋白质组学研究

目的通过双向电泳实验(2-dimensional gel electrophoresis,2-DE)研究牛磺酸减轻急性染锰诱导大鼠学习记忆损伤的分子机制。方法 60只SPF雄性SD大鼠随机分3组:生理盐水(NS)对照组,连续腹膜内注射(ip)0.9%NS;染锰组,每日ip MnCl2.4H2O(15mg/kg.d);牛磺酸预防组,染锰的同时ip牛磺酸(200 mg/kg.d),各组大鼠连续注射4w。最后一次干预结束后进行水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力变化,分离大鼠海马组织并制备总蛋白,2-DE分离差异蛋白质并经辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析和Mascot数据库检索鉴定差异蛋白。结果水迷宫实验显示:平均逃避潜伏时间(s)染锰组大鼠39.8±2.3,较对照组29.5±2.5及牛磺酸预防组29.4±2.3显著延长(P<0.05),平台搜索次数各组间无显著差异,染锰组与对照组、预防组比对共有10个差异表达的蛋白质斑点,鉴定出4个表达下调的蛋白质,分别是NADH dehydrogenase(ubiquinone)Fe-S protein 1、Galactokinase I、whaq protein、beta-centractin。结论牛磺酸对急性染锰诱导的大鼠空间学习能力损伤有明显改善作用,蛋白质组学研究初步鉴定出4个在三组中共存的表达下调蛋白质点。[营养学报,2012,34(6):553-557]