联合抑制Notch2和MEK/ERK通路对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨Notch2和MEK/ERK信号通路在胃癌细胞SGC-7901中是否存在交叉作用。方法采用体外化学合成的特异性针对Notch2的siRNA(Notch2siRNA)和丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的抑制剂PD98059,分别单独和联合处理体外培养的胃癌SGC-7901细胞,以转染阴性对照siRNA(control siRNA)细胞作为siRNA对照组,并设不给予任何转染的空白对照组。免疫印迹(Western Blotting)法检测磷酸化ERK1/2(p-ERK)1/2和Notch2蛋白的表达水平。比色法(MTT)检测癌细胞增殖抑制率。结果Notch2siRNA能降低蛋白Notch2的表达水平,并抑制癌细胞增殖[(38.26±1.82)%],而p-ERK的表达水平则较对照组增加。PD98059能降低p-ERK的表达水平,并抑制癌细胞的增殖[(30.05±3.16)%],Notch2水平则无明显变化,联合应用Notch2siRNA和PD98059能明显降低p-ERK和Notch2蛋白的表达水平,与Notch2siRNA或PD98059单独应用比较,显著抑制癌细胞增殖率,差异有统计学意义[(72.55±5.30)%,P0.01]。结论特异性抑制Notch2信号通路,且抑制MEK/ERK通路可进一步增强抑制Notch2通路的抗肿瘤增殖效果,提示MEK/ERK和Notch2 2条信号通路在胃癌SGC-7901细胞中存在交叉作用。     

circ_0000619通过调控miR-595/GLS轴对食管鳞状细胞癌细胞增殖及谷氨酰胺代谢的影响

目的:探讨circ_0000619/miR-595/GLS轴对人食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭和谷氨酰胺代谢的影响及其可能的机制。方法:采用qPCR法检测KYSE150细胞中circ_0000619、miR-595、谷氨酰胺酶（glutaminase,GLS）mRNA等表达水平,Western blot检测KYSE150细胞中GLS蛋白的表达情况,使用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）试剂盒、Transwell法分别检测KYSE150细胞增殖、迁移及侵袭能力,使用相应的检测试剂盒检测KYSE150细胞谷氨酰胺消耗、谷氨酸产生及ATP产生水平,利用生物信息学分析技术及双荧光素酶报告基因实验分析并检测circ_0000619、miR-595与GLS mRNA之间的相互作用关系。结果:circ_0000619在ESCC细胞系中呈现高表达,其亲本基因DENND4A mRNA在食管癌组织中呈高表达（P<0.01）;敲减circ_0000619显著抑制KYSE150细胞的增殖、侵袭和迁移能力（P<0.01）,并显著抑制KYSE150细胞的谷氨酰胺消耗、谷氨酸及ATP产生水平（P<0.01）;敲减circ_0000619显著上调miR-595表达（P<0.01）,抑制GLS mRNA（P<0.01）及蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验显示在KYSE150细胞中,circ_0000619与miR-595存在靶向结合、miR-595与GLS存在靶向结合（P<0.01）。circ_0000619敲低显著降低了KYSE150细胞谷氨酰胺代谢和细胞增殖,并且这些作用被miR-595抑制或GLS过表达部分逆转。结论:circ_0000619能通过靶向调控miR-595/GLS轴增强ESCC细胞谷氨酰胺代谢及细胞增殖,并可能成为潜在的ESCC治疗靶点。     

肝假性动脉瘤并上消化道大出血

患儿男,11岁.因反复呕血、便血7 d,于2006年3月30日入院.患者于1周前无明显诱因口吐鲜血,在当地医院经止血、抑酸、抗感染及输浓缩红细胞等对症支持治疗后,呕血缓解.但第2天少量进食后,又出现呕血,伴便血,此后间断出现,今为求进一步治疗而入我院.既往史:2005年10月因外伤致肝破裂,行肝修补术.     

Smad4过表达对人胃癌细胞增殖和NF-êB通路的影响

目的:构建pEGFP-C1-Smad4表达载体,观察Smad4过表达对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响,探讨其与NF-êB的相关性.方法:构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与Smad4的融合表达载体, 转染人胃癌SGC7901细胞,荧光显微镜观察转染后细胞EGFP的表达,Western blotting检测SGC7901-Smad4细胞中Smad4和NF-kB的表达,电泳迁移率变异分析(electrophoretic mobility shif assay,EMSA)检测过表达Smad4对胃癌SGC7901细胞NF-kB 活化的影响,MTT法检测过表达Smad4对SGC7901细胞增殖的影响.结果:在转染pEGFP-C1-Smad4的人胃癌SGC7901细胞(SGC7901-Smad4)中观察到EGFP的表达;Western blotting检测显示,SGC7901- Smad4细胞中Smad4过表达,并伴随核转录因子NF-êB p65的表达水平下调;EMSA检测显示Smad4过表达可下调NF-êB活化;MTT法显示过表达Smad4显著抑制SGC7901细胞增殖(P<0.05或P<0.01).结论:Smad4过表达显著抑制人胃癌细胞增殖,其机制可能与下调NF-kB信号通路有关.     

Smad4过表达对人胃癌细胞增殖和NF-κB通路的影响

目的: 构建肝癌细胞特异性小鼠IL1β反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制。方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL1β反义RNA表达载体pafpIRES2antiIL1β1和pafpIRES2antiIL1β2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定。反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL1β1组、H22/antiIL1β2三组,RTPCR检测IL1β的表达水平。以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗 经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL1β反义RNA的表达载体pafpIRES2antiIL1β1和pafpIRES2antiIL1β2,转染H22细胞后细胞中IL1β表达水平明显下降,以pafpIRES2antiIL1β2更为显著。成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比, H22/antiIL1β2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢（P<0.05)。 H22/antiIL1β1、H22/antiIL1β2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论: 成功构建的肝癌细胞特异性IL1β反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长,其机制与靶向阻断IL1β表达、上调NK细胞的杀伤活性有关     

肝假性动脉瘤并上消化道大出血

患儿男,11岁.因反复呕血、便血7 d,于2006年3月30日入院.患者于1周前无明显诱因口吐鲜血,在当地医院经止血、抑酸、抗感染及输浓缩红细胞等对症支持治疗后,呕血缓解.但第2天少量进食后,又出现呕血,伴便血,此后间断出现,今为求进一步治疗而入我院.既往史:2005年10月因外伤致肝破裂,行肝修补术.     

肝假性动脉瘤并上消化道大出血

患儿男,11岁.因反复呕血、便血7 d,于2006年3月30日入院.患者于1周前无明显诱因口吐鲜血,在当地医院经止血、抑酸、抗感染及输浓缩红细胞等对症支持治疗后,呕血缓解.但第2天少量进食后,又出现呕血,伴便血,此后间断出现,今为求进一步治疗而入我院.既往史:2005年10月因外伤致肝破裂,行肝修补术.     

肝假性动脉瘤并上消化道大出血

患儿男,11岁.因反复呕血、便血7 d,于2006年3月30日入院.患者于1周前无明显诱因口吐鲜血,在当地医院经止血、抑酸、抗感染及输浓缩红细胞等对症支持治疗后,呕血缓解.但第2天少量进食后,又出现呕血,伴便血,此后间断出现,今为求进一步治疗而入我院.既往史:2005年10月因外伤致肝破裂,行肝修补术.     

肝假性动脉瘤并上消化道大出血

患儿男,11岁.因反复呕血、便血7 d,于2006年3月30日入院.患者于1周前无明显诱因口吐鲜血,在当地医院经止血、抑酸、抗感染及输浓缩红细胞等对症支持治疗后,呕血缓解.但第2天少量进食后,又出现呕血,伴便血,此后间断出现,今为求进一步治疗而入我院.既往史:2005年10月因外伤致肝破裂,行肝修补术.