基于基线等比增减设计法优选牛膝白芍对帕金森病肝阳上亢证小鼠神经保护作用的最佳配比研究

目的 探讨牛膝白芍配伍对帕金森病肝阳上亢证小鼠发挥神经保护作用的最佳比例。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、牛膝白芍不同配比(牛膝与白芍配伍比例分别为0∶4、1∶4、1∶2、1∶1、2∶1、4∶1、4∶0)组。采用附子汤[3g/(kg·d)]灌胃联合腹腔注射MPTP[30mg/(kg·d)]法制备帕金森病肝阳上亢病证结合小鼠模型,各配比组造模后灌胃给药14天[6.5g/(kg·d)],模型组与对照组给予相应体积蒸馏水。通过激惹实验、转棒实验观察小鼠行为学改变;运用CompuSyn软件计算牛膝与白芍配伍联合指数(combination index,CI)及效应值(effect value,Fa);采用免疫组化及蛋白印迹实验(Western blot)法测定黑质酪氨酸羟化酶(trosine hydroxylase,TH)的阳性表达水平及蛋白相对表达量。结果 除0∶4、4∶1、4∶0组外,牛膝白芍各配比组均能明显降低小鼠的易激惹程度(P<0.05);各配比组均能明显延长小鼠的掉落潜伏期(P<0.05)。CompuSyn软件计算结果表明,牛膝与白芍各配比组的CI值均<1,两药联用具有协同增效作用,以1∶2比例联用时为最佳配伍比例(CI=0.860,Fa=0.235)。免疫组化及Western blot法实验结果表明,各配比组均可不同程度提高小鼠中脑黑质TH阳性表达及蛋白表达量(P<0.05),且均以1∶2组作用显著。结论 牛膝白芍联用抗帕金森病肝阳上亢证的最佳配伍比例为1∶2。     

附子联合MPTP诱导肝阳上亢型PD小鼠亚急性模型与慢性模型的建立及比较

目的 附子联合1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(anendons combined 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导C57BL/6小鼠肝阳上亢PD亚急性模型和肝阳上亢PD慢性模型的建立,通过行为学、病理学及分子生物学方法对模型进行评估。方法 小鼠随机分为正常组、模型组、肝阳上亢PD亚急性组MPTP[25mg/(kg·d)]注射7天、肝阳上亢PD慢性组[25mg/(kg·d)],每3.5天注射1次,注射5周,在注射MPTP前,各模型组附子煎液灌胃4周。爬杆、转棒实验检测小鼠行为学变化;免疫组化检测小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(trosine hydroxylase,TH)的表达,免疫印迹检测各组小鼠蛋白含量变化,实时定量PCR检测TH mRNA表达变化。结果 与正常组比较,肝阳上亢PD慢性组小鼠行为变化明显,模型组及肝阳上亢PD亚急性组小鼠变化较低,在爬杆实验中,肝阳上亢PD慢性组小鼠爬杆时间明显长于模型组及肝阳上亢PD亚急性组(P<0.05),转棒实验中,肝阳上亢PD慢性组小鼠在棒时间明显短于模型组及肝阳上亢PD亚急性组(P<0.05)。中脑黑质区TH阳性细胞表达含量方面,与正常对照组比较,肝阳上亢PD慢性组TH表达量显著下降(P<0.05),模型组及肝阳上亢PD亚急性组表达量高于肝阳上亢PD慢性组;免疫印迹及实时定量PCR检测结果表明,肝阳上亢PD慢性组小鼠在蛋白及mRNA表达量均为最低(P<0.05)。结论 肝阳上亢PD慢性组小鼠与单纯MPTP模型组及肝阳上亢PD亚急性组比较,损伤程度更高,周期更长,更具有与人类PD相似的临床症状,提示该模型有望成为PD发病机制研究潜在的稳定模型。