诺美孕酮促进大鼠子宫内膜异位症细胞凋亡及其作用机制

目的探讨诺美孕酮促进实验性大鼠子宫内膜异位症模型细胞凋亡及其作用机制。方法外科手术法建立大鼠子宫内膜异位症模型;HE染色观察异位内膜病理组织学改变;ELISA测定血清中抗子宫内膜抗体(EMAb)水平;West-ern blot检测异位内膜组织中Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达情况。结果诺美孕酮(0.5、1.5、15 mg.kg-1)异位内膜萎缩,间质疏松,腺体数目明显减少,腺腔萎缩;诺美孕酮呈剂量依赖性地降低异位内膜厚度和EMAb的浓度;诺美孕酮(0.5、1.5、15 mg.kg-1)异位内膜组织中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低。结论诺美孕酮(0.5、1.5、15 mg.kg-1)可促进大鼠子宫异位内膜细胞凋亡,其作用机制可能与降低EMAb水平、上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达、激活细胞凋亡的内源性途径启动因子Caspase-9蛋白、激活执行因子Caspase-3蛋白表达有关。     

国产天然孕酮阴道环的抗生育作用药效学和动物体内血药浓度变化研究

目的:研究和观察天然孕酮阴道环的长效避孕效果,及其在山羊体内的血药浓度和持续释放时间。方法:①将24只具有生育能力的新西兰雌兔随机分为4组,分别阴道置入空白环、天然孕酮阴道环低剂量(210 mg/环)、中剂量(420 mg/环)和高剂量(840 mg/环)。手术15 d后进行交配,观察天然孕酮阴道环对家兔的长效避孕效果。②将12只去卵巢山羊随机分为2组,分别给予国产和智利产天然孕酮阴道环,并于置入阴道环前、后不同时间点颈静脉采血,用磁性分离酶联免疫法测定血清中天然孕酮的浓度。结果:①阴道环对动物的一般状况均无明显影响,高剂量组和中剂量组避孕效果较好,能维持3个月,而低剂量组避孕效果较差。②国产和智利产阴道环血药浓度除20 d、27 d、90 d外无显著性差异(P>0.05)。结论:天然孕酮阴道环高、中剂量组均有长效避孕作用;与智利孕酮阴道环相比,国产天然孕酮阴道环放置在山羊阴道后的血药浓度变化无明显差异,其维持释放剂量和时间相当。     

宁泌泰胶囊对间质性膀胱炎大鼠炎性因子表达和激素水平的影响

目的:观察宁泌泰胶囊对雌性大鼠间质性膀胱炎的改善作用,结合组织炎性因子表达和血清激素水平的变化,探讨宁泌泰治疗间质性膀胱炎的作用和可能的机制。方法:将40只成年雌性SD大鼠,随机分为空白对照组、模型组、宁泌泰低剂量组和宁泌泰高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余3组大鼠均采用硫酸鱼精蛋白膀胱灌注的方法进行间质性膀胱炎造模,于造模第16天起,宁泌泰低剂量组和高剂量组分别给予0.4 g·kg~(-1)·d~(-1)和1.0 g·kg~(-1)·d~(-1)宁泌泰悬液,模型组给予等量溶媒灌胃,连续14 d。对空白对照组不作干预。干预结束后观察各组大鼠膀胱壁形态学和炎性变化;电镜超微结构观察肥大细胞数量及脱颗粒变化;ELISA方法检测血清雌二醇(E_2)和孕酮(P)水平和局部膀胱组织IL-1α、IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠膀胱壁增厚粗糙、不均一,血管变粗,并有少许炎性液体渗出,颜色变暗;宁泌泰高剂量和低剂量组较模型组膀胱壁均有不同程度恢复,且呈剂量依赖性。组织学和超微结构显示,宁泌泰高剂量和低剂量组较模型组炎性和肥大细胞数量减少,同时肥大细胞脱颗粒化亦相应减弱;宁泌泰高剂量组较模型组血清E_2水平明显下降(P0.05)。与空白对照组相比,模型组膀胱组织的IL-6和TNF-α水平均明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,宁泌泰高剂量组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均明显下降(P0.05,P0.01),宁泌泰低剂量组TNF-α水平显著降低(P0.05)。结论:宁泌泰胶囊对雌性大鼠间质性膀胱炎有明显改善作用,其作用机制可能与下调膀胱组织炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和血清E_2水平有关。     

度他雄胺对大鼠附睾Claudin1和β-catenin表达的影响

目的:通过度他雄胺对大鼠附睾上皮连接关键蛋白Claudin1和β-catenin表达影响的研究,探讨度他雄胺抑制生育的可能分子机制,为男性不育治疗和男性避孕提供附睾靶点。方法:16只SD雄性大鼠(3月龄,250~300 g),设度他雄胺40 mg/kg实验组和阴性对照组,每组8只,灌胃给药,1次/d,连续2周。给药结束后计算机辅助精子分析雄鼠精子活力及形态,计算交配雌鼠受孕率,ELISA法测定大鼠血清睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)浓度,透射电镜分析附睾细胞紧密连接变化,RT-PCR分析实验组和对照组附睾上皮连接蛋白Claudin1和β-catenin基因表达变化;免疫组化和免疫印迹分析其蛋白表达变化。结果:度他雄胺可以显著抑制大鼠血清DHT浓度、精子活力和生育力,超微结构显示实验组附睾上皮细胞紧密连接出现空隙,附睾腔液体积增多。RT-PCR、免疫组化和免疫印迹显示度他雄胺可以显著下调Claudin1和β-catenin的表达。结论:度他雄胺可以显著抑制雄性大鼠生育,这可能与其降低大鼠血清DHT水平,进而抑制附睾上皮连接关键基因Claudin1和β-catenin表达和破坏附睾上皮紧密连接有关。     

人参皂苷Rh2抑制实验性大鼠子宫异位内膜增殖及其作用机制探讨

目的探讨人参皂苷Rh2对实验性SD大鼠子宫内膜异位症模型的抑制作用及其机制。方法外科手术法建立SD大鼠子宫内膜异位症模型,在第2次开腹后按模型异位内膜大小随机分成5组,分别是模型对照组(0.5%羧甲基纤维素钠,0.5%CMC-Na),孕三烯酮组(1.5 mg.kg-1)和Rh2低、中、高剂量组(5、10、40 mg.kg-1);连续灌胃给药21 d后,在末次给药24 h内麻醉解剖大鼠、采血及保存异位内膜组织。HE染色观察异位内膜病理组织学改变;Elisa测定血清中雌激素(Estrogen,E2)、孕激素(Progesterone,P)和抗子宫内膜抗体(Endometrial antibody,EMAb)水平;Western blot检测异位内膜组织中Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达情况。结果 Rh2(40 mg.kg-1)异位内膜组织明显萎缩,腺体数目明显减少,腺腔萎缩,腔内积液体积减少;Rh2(5、10、40 mg.kg-1)降低E2、P和EMAb的水平;Rh2(5、10、40 mg.kg-1)异位内膜组织中Bax/Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达明显升高。结论 Rh2(40 mg.kg-1)可明显抑制实验性SD大鼠异位内膜生长,其作用机制可能与降低E2、P和EMAb水平、上调Bax/Bcl-2蛋白表达、激活细胞凋亡的内源性途径启动因子Caspase-9蛋白、激活执行因子Caspase-3蛋白表达有关。     

新型左炔诺孕酮/炔雌醇复方避孕贴剂的家兔药代动力学研究

目的:探讨新型左炔诺孕酮(levonorgestrel,LNG)和炔雌醇(ethynylestradiol,EE)在家兔体内的药物动力学特征,评价多次给药后是否出现药物蓄积情况。方法:家兔在单次和多次给药及停止给药后不同时间点耳缘静脉采血,选择放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)法测定各时间点各组家兔雌/孕激素的血药浓度,使用药物动力学软件计算各药物动力学参数并对其进行统计分析。结果:单次给药后受试贴剂低(10cm2)、中(20 cm2)和高剂量(40 cm2)组血清LNG峰浓度(Cmax)分别为1.04±0.12 ng/ml、2.42±0.60 ng/ml和4.90±1.39 ng/ml,3组间有显著差异(P<0.05)。血药浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为49.93±9.79h.ng/ml、115.14±34.25 h.ng/ml和251.22±80.55 h.ng/ml,3组间有显著差异(P<0.01);血清EE峰浓度(Cmax)分别为112.00±45.50 pg/ml、139.23±28.23 pg/ml和290.26±66.62 pg/ml,中、高剂量组间有显著差异(P<0.05),而中、低剂量组间无统计学差异(P>0.05)。EE血药浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为4.70±1.34 h.ng/ml、6.59±1.23h.ng/ml和16.59±2.33 h.ng/ml,中、高剂量组之间有显著差异(P<0.01)。Evra参比避孕贴剂组血清LNG浓度的Cmax为3.16±1.00 ng/ml,AUC为155.29±46.14 h.ng/ml,与LNG/EE避孕贴剂中剂量组(拟采用的临床试验剂量)相比,两者无显著差异(P>0.05)。中剂量组血清EE浓度与Evra避孕贴剂的相比显著降低(P<0.05)。多次给药后LNG/EE避孕贴剂10 cm2组和20 cm2组在重复给药10次的过程中未出现LNG和EE血药浓度蓄积现象,Evra贴剂组在重复给药4次的过程中未出现LNG和EE血药浓度蓄积现象。结论:中剂量的LNG/EE避孕贴剂具有良好的避孕效果,同时其副作用可能小于Evra。     

双酚A对大鼠雌性子代卵巢发育和血管内皮生长因子蛋白表达的影响

目的:探讨大鼠妊娠期接触双酚A(BPA)对雌性子代卵巢发育和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法:实验组于SD母鼠妊娠第7~20日分别灌胃给予0.005 mg/kg、0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg BPA,阴性对照组给予0.5 mg/kg溶剂,阳性对照组给予0.05 mg/kg己烯雌酚,每组8~10只。观察雌性仔鼠的阴道开口时间,分别于出生后30 d、60 d(分别相当于人青春期前和成年期)处死仔鼠,称重卵巢,光学显微镜观察卵巢组织学变化,ELISA检测血清雌、孕激素水平,Western blotting检测卵巢VEGF蛋白的表达。结果:BPA 0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg组仔鼠阴道开口时间明显缩短,2.5 mg/kg组青春期前仔鼠卵巢脏器系数明显升高,BPA 0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg组卵巢出现多囊样病变,BPA 0.5 mg/kg、2.5 mg/kg组青春期前仔鼠血清雌、孕激素水平明显升高,BPA 2.5 mg/kg可导致青春期前仔鼠卵巢VEGF蛋白表达明显升高。结论:母体妊娠期接触BPA可导致青春期前雌性仔鼠卵巢出现多囊样病变,但对成年雌性仔鼠卵巢无明显影响。     

怀牛膝HPLC指纹图谱研究

目的:建立怀牛膝药材的HPLC指纹图谱。方法:采用HPLC法测定10个不同产地的怀牛膝药材,制定指纹图谱。色谱柱为C18,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为250nm,进样量为20μL,柱温为30℃。结果:得到分离度、重现性均较好的怀牛膝药材HPLC/UV指纹图谱,得到15个共有峰。结论:该方法简便、可靠、重现性好,可用于怀牛膝的质量控制。     

左炔诺孕酮口崩片的人体药代动力学及相对生物利用度研究

目的:比较左炔诺孕酮口崩片和市售口服片的人体药代动力学及相对生物利用度。方法:20名健康女性志愿者随机双交叉单剂量服用左炔诺孕酮口崩片和市售口服片,剂量均为0.75 mg,分别于服药前和服药后72 h内不同时间点抽取静脉血,清洗期为2周,以放射免疫分析(radioimmuno-assay,RIA)法测定血清中左炔诺孕酮的浓度,并利用SAS软件计算口崩片与市售口服片的药代动力学和相对生物利用度。结果:采用RIA测定左炔诺孕酮的最低检测限为10 pg/ml,低、中、高(300 pg/ml、2 000 pg/ml、6 000 pg/ml)3种浓度左炔诺孕酮标准质控血清的日内精密度分别为12.4%、9.3%、3.1%(n=5),日间精密度分别为4.3%、11.7%、5.7%(n=5)。口崩片和市售口服片的主要药代动力学参数分别为:tmax1.6±0.2 h、tmax1.7±0.3 h;Cmax6.2±0.8 ng/ml、Cmax6.5±1.0 ng/ml;AUC0～72 h 85.5±24.4 h.ng/ml、AUC0～72 h 90.8±27.1 h.ng/ml;AUC0-inf96.8±27.9 h.ng/ml、AUC0-inf 101.2±30.8 h.ng/ml;t1/2 25.3±3.5 h、t1/224.2±3.1 h。口崩片的AUC0～72 h、AUC0-inf和Cmax的90%置信区间分别为市售口服片相应参数的87.72%～101.87%、89.01%～103.73%和89.80%～101.75%。口崩片tmax与市售口服片相比无显著差异(P>0.05)。口崩片的相对生物利用度为96.1±18.3%。结论:建立的分析方法准确灵敏,可用于左炔诺孕酮血药浓度的测定;左炔诺孕酮口崩片与市售口服片的生物利用度无显著性差异,2种制剂具有生物等效性。