体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及凋亡的研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经细胞诱导分化的潜能,及分化后的凋亡情况?方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基对第三代MSCs进行诱导分化,诱导分化的细胞按分化时间3?7?14 d分成A?B?C三组?三组诱导分化细胞分别进行NSE免疫组织化学,MAP2免疫荧光化学以及TUNEL凋亡细胞检测?结果:A?B?C三组细胞在细胞形态上与神经细胞相似,并且表达神经细胞特异性标记抗原NSE?MAP2,但是C组细胞表达强度弱于B组,并且阳性细胞比例少于B组(P < 0.05)?A?B?C三组TUNEL凋亡阳性细胞比例呈逐渐增多趋势(P < 0.05)?结论:含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,随着诱导时间的推移,分化细胞状态下降,凋亡比例增多?     

骨髓间充质干细胞旁分泌作用与脑缺血后的细胞凋亡

背景:骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血的机制之一是骨髓间充质干细胞的旁分泌作用,而目前对于这一机制的研究报道较少.目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对脑缺血后细胞凋亡的抑制作用并探索相关机制.方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠大脑中动脉缺血模型.24只SD大鼠随机数字表法分为4组,每组6只.细胞移植给药组:大鼠纹状体内移植骨髓间充质干细胞后给予ERK1/2抑制剂U0126;非移植给药组:注射等量的PBS后给予U0126;细胞移植对照组:移植骨髓间充质干细胞后给予溶剂对照;非移植对照组:注射等量的PBS后给予溶剂对照.7 d后通过Western blot检测血管内皮细胞生长因子、磷酸化ERK1/2蛋白的表达;TUNEL染色检测梗死区周围及皮质区细胞凋亡情况.结果与结论:细胞移植组较非移植组大鼠纹状体内血管内皮细胞生长因子蛋白的表达明显增高,磷酸化ERK1/2表达增强,细胞凋亡数明显减少;经U0126处理后,血管内皮细胞生长因子的表达没有变化,而随着磷酸化ERK1/2的表达受到抑制,细胞凋亡数明显增高.提示骨髓间充质干细胞在大脑纹状体内可以旁分泌血管内皮细胞生长因子,并通过激活ERK1/2抑制了脑梗死区细胞的凋亡.     

皮肤源性再程序化神经干细胞的制备以及定向分化为神经细胞的体外研究

目的:研究制备皮肤源性再程序化神经干细胞以及诱导其定向分化为神经细胞的可行性.方法:体外培养大鼠皮肤来源前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)并纯化、鉴定,用含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体系统作为基因转染工具.将第3代SKPs分3组:A组为慢病毒载体介导neurogenin2(...     

腰大池持续引流预防去骨瓣减压术后硬膜下积液临床分析

目的探讨早期行腰大池持续引流术预防去骨瓣减压术后硬膜下积液的效果。方法我院300例去骨瓣减压术后患者,分为3组:脑出血组、术中行脑挫伤清除外伤组、术中未行脑挫伤清除外伤组(硬膜外、硬膜下血肿及脑肿胀术中行去骨瓣减压患者)。然后分别再分为对照组、治疗组,两组术后均给予脱水降颅压、抗生素预防感染、止血等常规治疗,治疗组术后同时给予腰大池置管持续引流脑脊液1～2周。结果对照组有24例患者出现硬膜下积液,发生率为16.00%;治疗组有7例患者在拔除置管后出现硬膜下积液,发生率4.67%。结论去骨瓣减压术后早期行腰大池持续引流术对预防硬膜下积液的发生有一定意义,在神经外科临床工作中有进一步研究的价值。     

JAK-STAT3信号通路调节大鼠骨髓间充质干细胞神经定向分化

探索体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（rat mesenchymal stem cells,MSCs）神经诱导分化的内在分子机制。方法：体外贴壁法培养MSCs,纯化培养传至3代后,诱导组采用含有表皮生长因子（EGF）,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,脑源性神经神经生长因子（BDNF）的L-DMEM作为神经诱导培养基,诱导MSCs向神经细胞分化;含AG490组采用含有AG490（JAK-STAT3通路抑制剂）5uM的诱导组神经诱导培养基,同等条件下诱导MSCs神经分化。倒置显微镜下观察细胞形态变化、免疫细胞化学检测神经元特异性烯醇化酶(NSE),微管相关蛋白2（MAP2）,胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性率。Western blot检测JAK-STAT3通路中总STAT3蛋白和酪氨酸(Tyr705) STAT3磷酸化蛋白表达水平。结果：神经诱导培养基可以诱导MSCs向神经元和神经胶质细胞转分化,诱导5天后细胞轴突逐渐变长,呈典型神经细胞样形态,并且细胞轴突间相互接触。Western blot结果表明在神经诱导过程中酪氨酸(Tyr705)STAT3磷酸化逐渐增强,JAK-STAT3信号通路被激活。而JAK-STAT3通路特异性抑制剂AG490处理后,再经神经诱导培养基诱导后,MSCs向神经胶质细胞分化比例明显下降,而MSCs向神经元分化没有受到影响, 从而提高了 MSCs向神经元分化的比例。 结论 JAK2/STAT3信号通路参与了MSCs神经定向分化的调节,抑制此信号通路可以减少向星形胶质细胞分化的比例,提高了MSCs向神经元分化的比例。     

微创引流结合醒脑静对脑出血患者血脑屏障指数及S100蛋白和神经烯醇化酶的影响

目的观察颅内血肿清除术结合醒脑静与保守治疗对高血压脑出血患者血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)及S100蛋白和神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)的影响及临床意义。方法观察脑出血患者常规保守治疗组20例和常规治疗+颅内血肿清除术结合醒脑静组20例,对照分析其BBB指数和S100蛋白、NSE的变化。结果治疗组的BBB指数明显低于常规保守治疗组(P<0.05);颅内血肿清除术结合醒脑静组血清S100蛋白浓度、NSE明显低于对照组(P<0.01)。结论脑出血增加血脑屏障的通透性,使BBB指数和血清中S100蛋白、NSE增高,颅内血肿清除术结合醒脑静治疗可以减轻细胞毒性对血脑屏障的损伤,保护脑细胞,减轻脑水肿。     

尼莫地平抑制缺血再灌注后成年大鼠脑内神经发生

目的：观察尼莫地平（Nimodipine）对大鼠脑缺血再灌注后海马齿状回神经发生的影响并探讨其相关机制。方法：采用四动脉阻断法诱导大鼠全脑缺血,缺血20min前腹腔内注射尼莫地平或脑室内注射细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的抑制剂U0126;免疫组化Brdu标记法检测脑内海马神经发生;Western Blot法检测海马组织ERK、磷酸化ERK（p-ERK）蛋白的表达。结果：尼莫地平抑制脑缺血再灌注后海马部位的神经发生的同时也抑制了脑缺血再灌注后海马齿状回p-ERK的表达;海马部位神经发生在U0126组与U0126＋尼莫地平联合给药组差异无统计学意义。结论：尼莫地平显著抑制脑缺血再灌注后海马齿状回的神经发生,其机制与下调p—ERK表达密切相关。     

骨髓间充质干细胞旁分泌作用与脑缺血后的细胞凋亡*

背景：骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血的机制之一是骨髓间充质干细胞的旁分泌作用,而目前对于这一机制的研究报道较少。 目的：观察骨髓间充质干细胞旁分泌作用对脑缺血后细胞凋亡的抑制作用并探索相关机制。 方法：体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,建立大鼠大脑中动脉缺血模型。24只SD大鼠随机数字表法分为4组,每组6只。细胞移植给药组：大鼠纹状体内移植骨髓间充质干细胞后给予ERK1/2抑制剂U0126;非移植给药组：注射等量的PBS后给予U0126;细胞移植对照组：移植骨髓间充质干细胞后给予溶剂对照;非移植对照组：注射等量的PBS后给予溶剂对照。7 d后通过Western blot检测血管内皮细胞生长因子、磷酸化ERK1/2蛋白的表达;TUNEL染色检测梗死区周围及皮质区细胞凋亡情况。 结果与结论：细胞移植组较非移植组大鼠纹状体内血管内皮细胞生长因子蛋白的表达明显增高,磷酸化ERK1/2表达增强,细胞凋亡数明显减少;经U0126处理后,血管内皮细胞生长因子的表达没有变化,而随着磷酸化ERK1/2的表达受到抑制,细胞凋亡数明显增高。提示骨髓间充质干细胞在大脑纹状体内可以旁分泌血管内皮细胞生长因子,并通过激活ERK1/2抑制了脑梗死区细胞的凋亡。     

JAK2/STAT3信号通路调节骨髓间充质干细胞神经定向分化

骨髓间充质干细胞(MSCs)是来源于中胚层的骨髓非造血干细胞,具有较强的自我更新和跨胚层分化潜能.探索MSCs神经诱导分化的内在调节机制,提高MSCa向神经元分化的比例,降低向神经胶质细胞分化比例,对于干细胞移植治疗中枢神经系统损伤有重要的临床意义.