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斑马鱼促性腺激素释放激素基因的克隆与表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的克隆斑马鱼促性腺激素释放激素(GnRH)基因,构建重组质粒pQE30-GnRH并获得表达蛋白。方珐从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT~PCR方法获得斑马鱼GnRHcD—NA。将该cDNA插入质粒pQE30中,并使其在大肠杆菌RB791中表达。经IPTG诱导后SDS—PAGE电泳检测蛋白的表达情况。结果斑马鱼GnRHcDNA长为207bp,编码的GnRH前体为69个氨基酸残基。与鲤鱼、鲫鱼、拟鲤、黑头软口鲦等淡水鲤科鱼类的氨基酸序列同源性比较,分别为74.4%,69.8%,73.3%和73.3%。电泳结果显示一新的分子量约为14.4kDa的特异蛋白带。结论本研究所克隆的斑马鱼GnRH基因属于GnRH-Ⅱ。构建斑马鱼GnRH原核表达质粒不仅获得大量的GnRH蛋白,还可对该蛋白做进一步分离纯化以及生物活性方面的研究。  相似文献   
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【摘要】 目的 克隆黄河裸裂尻鱼肥胖基因(obese gene, ob),分析编码蛋白leptin的序列特征,检测ob mRNA的组织特异性表达和不同环境温度下肝胰脏和白肌ob mRNA的相对表达水平,为探究黄河裸裂尻鱼在青藏高原季节性寒冷环境下的生态适应机制提供科学数据。方法 利用RT-PCT、5′-RACE和3''-RACE法获得ob基因全长cDNA序列。通过已知cDNA序列设计半定量RT-PCR和Real-time PCR引物,进行表达研究。结果 黄河裸裂尻鱼ob基因序列全长为1337bp,其中开放阅读框(ORF)长513bp,编码170个氨基酸。黄河裸裂尻鱼ob mRNA在心脏、肾脏、脂肪、肠、精巢、肝胰脏、鳃、脑和肌肉9个被检组织中均有表达,其中在心脏中表达最强,肌肉组织中表达最弱。栖息水域环境温度下降,将显著抑制黄河裸裂尻鱼肝胰脏和白肌ob mRNA的表达。结论 黄河裸裂尻鱼ob基因特殊的组织表达特征可能与其特定组织的能量代谢及其特殊的生物学功能有关。Leptin在黄河裸裂尻鱼能量代谢调节和季节性环境适应方面发挥着重要作用。  相似文献   
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