原花青素对Aβ25-35介导的tau蛋白过度磷酸化及p38 MAPK信号通路的影响

目的：研究原花青素对β-淀粉样蛋白25-35片段（Aβ_25-35）介导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化及p38 MAPK信号通路的抑制作用。方法：采用1.0 μmol/L的Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞建立体外阿尔茨海默病（AD）模型,并分别设立对照组（只含细胞和培养基）、Aβ_25-35染毒组、Aβ_25-35+不同浓度（0.1、1.0、2.5、5.0 μg/mL）的原花青素处理组以及p38通路阻断剂SB203580组、Aβ_25-35+SB203580组、Aβ_25-35+5.0 μg/mL原花青素干预组。四甲基噻唑蓝（MTT）法检测SH-SY5Y细胞存活率,TBA法检测细胞内MDA含量,WST-1法检测细胞内总SOD水平,Western blot法检测p-tau、tau蛋白的表达及应用p38通路阻断剂后p-tau、tau、p38、p-p38相应的蛋白表达。结果：原花青素对SH-SY5Y细胞无明显毒性作用,不同浓度Aβ_25-35均使SH-SY5Y细胞存活率降低,与对照组比较,1.0 μmol/L Aβ_25-35组SOD水平降低,MDA含量升高（P < 0.05）,p-tau （Ser396）和p-p38蛋白表达亦增加（P < 0.05）;给予不同浓度原花青素干预及p38通路阻断剂后,与1.0 μmol/L Aβ_25-35组比较,原花青素提高SH-SY5Y细胞生存率及细胞内总SOD水平,降低细胞内MDA含量（P均<0.05）,抑制Aβ_25-35介导的p-tau （Ser396）和p-p38蛋白过度表达（P均<0.05）,且Aβ+阻断剂组同样抑制相关蛋白的表达水平（P均<0.05）。结论：原花青素能够抑制Aβ_25-35介导的tau蛋白过度磷酸化,提高细胞生存率,降低氧化应激水平。此外,原花青素可通过抑制p38 MAPK信号传导途径来实现其抑制tau蛋白过度磷酸化的神经保护作用。     

纳米二氧化钛对IEC-6细胞炎症因子表达及JAK2/STAT3蛋白磷酸化的影响

目的：探讨纳米二氧化钛（nano-TiO₂）对肠道上皮IEC-6细胞中炎症因子表达及Janus激酶2/信号传导及转录激活因子3（JAK2/STAT3）蛋白磷酸化的影响。方法：取对数生长期的IEC-6细胞,分别加入浓度为0.0（对照组）、5.0、10.0、15.0、20.0 μg/mL的nano-TiO₂培养24 h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞存活率;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组上清液中白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;Western blot法测定各组细胞内JAK2和_STAT3蛋白表达及其磷酸化（p-JAK2和p-STAT3）水平;Image J软件分析蛋白条带灰度值。结果：nano-TiO₂处理组IEC-6细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,在各个nano-TiO₂处理浓度下,IEC-6细胞IL-6和TNF-α分泌水平均显著升高（P < 0.05）;10.0、15.0、20.0 μg/mL nano-TiO₂浓度处理后,细胞分泌IL-1β显著增加（P < 0.05）。Western blot法检测结果显示,nano-TiO₂处理组IEC-6细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高,且其蛋白磷酸化水平和炎症因子表达水平呈正相关关系（r_JAK2,IL-1β=0.561,P < 0.05;r_JAK2,IL-6=0.711,P < 0.01;r_JAK2,TNF-α=0.675,P < 0.01;r_STAT3,IL-1β=0.782,P < 0.01;r_STAT3,IL-6=0.532,P < 0.05;r_STAT3,TNF-α=0.668,P < 0.01）。与对照组相比,15.0、20.0 μg/mL nano-TiO₂处理组IEC-6细胞中p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3灰度值比值明显升高（P < 0.05）。结论：nano-TiO₂可诱导IEC-6细胞分泌炎症因子和促进JAK2/STAT3蛋白磷酸化。     

原花青素对LPS/ATP诱导的NLRP3炎症小体激活及NF⁃κBp65磷酸化的抑制作用

目的：研究原花青素对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）与腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）联合诱导的小鼠小胶质细胞BV2 NOD样受体蛋白3（nucleotide?binding oligomerization domain?like receptor protein 3,NLRP3）炎症小体激活及核因子（nuclear factor,NF）?κBp65磷酸化的抑制作用。方法：以1.0 μg/mL LPS、2.5 μmol/L ATP诱导BV2细胞炎症损伤模型,用不同浓度原花青素（0.1、1.0、2.5、5.0 μg/mL）干预细胞。采用噻唑蓝（thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞存活率;比色法检测一氧化氮（nitric oxide,NO）释放水平;微量酶标法测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;ELISA法检测白细胞介素（interleukin,IL）?1β、IL?18的分泌水平;Western blot法检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis?associated speck?like protein containing a CARD,ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）?1、pro?caspase?1、p?NF?κBp65、NF?κBp65蛋白表达水平。结果：不同浓度的原花青素对BV2细胞存活率的影响与对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。与对照组相比,LPS/ATP诱导可增加BV2细胞NO、IL?1β、IL?18水平以及LDH活力（P < 0.05）,增加NLRP3、ASC、pro?caspase?1、caspase?1、