SFTSV糖蛋白Gn重组质粒的构建及其体液免疫原性研究

目的:研究严重发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)糖蛋白Gn的体液免疫原性?方法:将PCR方法扩增的SFTSV糖蛋白Gn基因和密码子优化后Gn基因克隆入载体pJW4303,构建Gn野生型和双优化重组质粒;经酶切和测序鉴定确认为目的质粒后,分别转染HEK293T细胞,Western blot检测糖蛋白Gn的表达;用Gn重组表达质粒及空载体分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体?结果:成功构建Gn重组野生型质粒pJW4303-WSP-Gn和双优化质粒pJW4303-tPA-Gn-opt;Western blot证实pJW4303-WSP-Gn编码Gn可在HEK293T细胞内表达,pJW4303-tPA-Gn-opt编码Gn在HEK293T细胞内表达并分泌到细胞外;ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体证实各重组质粒均能诱导特异性IgG抗体产生,双优化质粒较野生型质粒诱导产生的IgG时间更早?滴度更高?结论:SFTSV的糖蛋白Gn具有良好的免疫原性;和野生型质粒相比,双优化质粒更有利于糖蛋白Gn的表达和分泌,并且具有更好的体液免疫原性?     

SFTS病毒非结构蛋白重组质粒的构建及其体液免疫原性研究CSCD

目的 研究SFTS病毒（SFTS virus,SFTSV）的非结构蛋白（Nonstructural proteins,NSs）重组质粒的体液免疫原性.方法 利用聚合酶链反应法（Polymerase chain reaction,PCR）构建真核表达质粒pJW4303-NSs、pJW4303-NSs-opt、pJW4303-NSs-Flag;引入Nhe Ⅰ酶切位点及tPA（Tissue plasminogen activator,tPA）信号肽,构建质粒pJW4303-tPA-NSs-opt.将质粒转染至HEK 293T细胞,蛋白质印迹法（Western blot,WB）验证NSs表达.NSs相关质粒免疫BALB/c小鼠,采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测SFTSV NSs特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组NSs质粒,WB验证了NSs可在HEK293T细胞内表达.pJW4303-NSs、pJW4303-NSs-opt、pJW4303-tPA-NSs-opt重组质粒均可诱导小鼠体内产生特异性IgG,其中单优化型质粒pJW4303-NSs-opt的免疫原性较好,在第6、8周的IgG水平显著高于野生型NSs质粒,差异具有统计学意义.结论 本研究构建的SFTSV的NSs重组优化型质粒具有良好体液免疫原性,其中单优化型效果最佳.