紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL/6 小鼠皮肤早期免疫应答动态变化的研究

目的观察紫外线辐照致弱日本血吸虫尾蚴经耳廓免疫C57BL/6小鼠后,小鼠皮肤组织早期免疫应答的动态变化.方法 98只小鼠测定双侧耳廓厚度后,14只作为0 d组不感染/免疫,其余平均分为2组.一组经双侧耳廓分别感染正常尾蚴150 条/耳, 另一组经双侧耳廓分别免疫紫外线辐照致弱尾蚴150条/耳.感染/免疫后第1、2、4、7、14、21天分别剖杀2组小鼠各7只,测定耳廓厚度.取感染处的耳廓组织,左侧进行培养,收集上清检测相应细胞因子.右侧纵切为二,一半进行HE染色观察炎症反应;另一半应用免疫组化技术观察皮肤组织中IL-12和CD11c分子的表达.结果正常尾蚴感染的小鼠皮肤炎症反应在第7天达到高峰后逐渐下降,第21天基本恢复;而辐照尾蚴免疫小鼠耳廓皮肤在第14天炎症反应才达高峰,第21天反应仍然十分强烈.尾蚴穿皮后第4天,组织中有较高水平的CD11c及IL-12分子表达.皮片培养细胞因子定量检测也显示：与Th1细胞应答相关的IL-12、IFN-γ及Th2型因子IL-10早期在正常、辐照尾蚴差异无显著性.结论和正常尾蚴相比,辐照致弱尾蚴诱导的皮肤免疫应答持续时间长、强度高,但两者诱导Th细胞向不同方向极化并不发生于免疫应答启动阶段.     

可载药的磁性聚己内酯/明胶微球支架的制备及其体外成骨性能的研究

目的 制备出可载药的磁性颗粒支架,并研究其体外成骨性能.方法 使用复乳法制备聚己内酯(polycaprolactone,PCL)/明胶微球(PCL/gel microsphere,PGM)支架,通过相差显微镜、场发射电子显微镜(field emission scanning electron micro?scope,F...     

联合应用纳米金和磷酸钙骨水泥支架促进牙髓干细胞的增殖和成骨分化

目的：磷酸钙骨水泥（calcium phosphate cement,CPC）支架以其良好的生物相容性和骨引导活性而广泛应用于组织工程骨缺损的修复中,但是其骨引导活性有限。因此考虑联合应用纳米金（gold nanoparticles,AuNPs）以促进牙髓干细胞的增殖和成骨分化。方法：以CPC支架作为基底接种牙髓干细胞,在培养基中添加5 μg/mL AuNPs进行干细胞培养,以常规培养基组为对照。用透射电镜检测AuNPs的形貌。以荧光显微镜检测细胞接种4 h后的黏附状态,以CCK?8检测细胞增殖情况,检测细胞碱性磷酸酶的活性,并进行茜素红染色以说明矿化物形成情况。结果：AuNPs为均匀的球形,直径20 nm左右。细胞接种后4 h,实验组和对照组的细胞黏附状态没有显著差异。CPC上AuNPs培养基中的细胞14 d时数量多于对照组（P < 0.05）;且AuNPs培养基中细胞的碱性磷酸酶活性显著增高（P < 0.05）,矿化物的形成也显著增多（P < 0.05）。结论：CPC支架联合AuNPs可显著促进牙髓干细胞的增殖和成骨分化。     

系统康复干预对精神分裂症康复期患者治疗依从性的影响

目的:探讨康复治疗干预对精神分裂症康复期患者治疗依从性的影响。方法:将2007年12月～2008年12月住院精神分裂症康复期患者240例,随机分为对照组120例和研究组120例。对照组采用常规的健康教育,研究组患者除进行常规治疗和护理外,在康复期过程中有专职人员利用小组形式再进行系统康复治疗干预,每小组患者不超过10例,每周2次,每次30min,共8周。各组在干预前后分别进行服药依从性、锥体外系副反应量表、自知力与治疗态度问卷、社会功能缺陷筛选量表评定。结果:干预后研究组锥体外系副反应量表评分、社会功能缺陷量表评分低于对照组(P0.05),自知力与治疗态度问卷评分高于对照组(P0.05),服药依从性高于对照组(P0.05)。结论:系统康复治疗干预不但能帮助患者树立信心,改善其认知态度,调动患者的主动性,增加家庭和社会责任感,而且还能提高患者的治疗依从性。     

一种间接ELISA检测结果标准化的新方法及其验证

目的建立并验证一种间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测结果标准化的方法-改良 ODST法(I-ODST)。方法根据ELISA反应原理推导I-ODST法的公式ODST=αA/1-bA,验证时采用血吸虫抗体检测试剂盒,检测样品中特异性抗体的A值,对A值的倒数与相对浓度C的倒数作线性回归分析,并与常用的A-C、A-logC法进行比较。结果 I-ODST法线性检验回归系数的平方值 (R2)均>0．99,假设检验的P值<0．05,A-C、A-logC法大部分的R2<0．99,且I-ODST法的线性拟合趋势最佳。结论建立了一种比常用数据转换方法线性拟合更好的ELISA检测结果标准化的新方法。     

小鼠品系差异及可的松处理对原发性多房棘球绦虫囊泡形成和发展的影响

多房棘球绦虫的中绦期可感染多种啮齿类中间宿主和少数非啮齿类中间宿主(包括人)。以往的研究提示：AKR、DBA品系的小鼠比DD、C57BL／6、CF1、B、CFW、A、BALB／c、C3H／He品系的小鼠更为易感，且前者泡球蚴囊泡的数量和面积大于后者。在感染巨颈绦虫(Taenia taeniaeformis)的小鼠模型     

负载γ-Fe2O3的壳聚糖多孔海绵对大鼠骨髓间质干细胞增殖和成骨分化的影响

目的：研究负载γ-Fe₂O₃的壳聚糖多孔海绵对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cell,r BMSC)增殖和成骨分化的影响。方法：使用冻干-交联法制备负载γ-Fe₂O₃浓度分别为1%、5%、10%和20%的壳聚糖海绵,并制备空白对照组。将rBMSC培养于海绵上,通过扫描电镜和共聚焦显微镜观察细胞黏附及增殖情况,通过CCK-8法检测细胞第1、3、5、7天的增殖情况,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatases,ALP)染色及活性检测和荧光定量PCR检测第7、14天ALP活性和成骨指标ALP、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein 2,Bmp2)、胶原蛋白(collagenⅠ,Col1)和Runt相关转录因子2(core binding factor alphal 1,Runx2)的表达;使用茜素红定量法评估第21、28天细胞外基质矿化情况。结果：CCK-8结果显示rBMSC均能在材料上持续增殖,添加γ-...     

青蒿琥酯治疗小鼠日本血吸虫病的血清学研究

目的观察青蒿琥酯对日本血吸虫感染小鼠的治疗作用及血清IgG的动态变化，探讨血清抗体与体外杀童虫效果的相关性。方法用日本血吸虫感染C57／BL6小鼠，在感染后8、15、22和29d分别一次性灌服300mg／kg青蒿琥酯，对照组小鼠灌服1％羧甲基纤维素钠。最后一次给药后7d剖杀小鼠，计算成虫数和虫卵数，以ELISA法检测小鼠血清中日本血吸虫特异性IgG抗体的水平，观察接受青蒿琥酯治疗的小鼠血清与巨噬细胞体外协同杀伤日本血吸虫童虫的效应。结果青蒿琥酯治疗组小鼠未检获成虫和虫卵；血清中日本血吸虫尾蚴抗原特异的IgG抗体水平在感染后21d达高峰，此后下降；成虫抗原特异的IgG抗体水平呈上升态势，二者与对照组比较差异均无显著性；青蒿琥酯治疗小鼠血清中虫卵抗原特异的IgG抗体呈低水平状态，显著低于对照组。青蒿琥酯治疗组小鼠血清和对照组小鼠血清均具有较强的体外杀童虫效果。结论青蒿琥酯对日本血吸虫感染的小鼠具有显著的治疗效果，其血清与巨噬细胞在体外具有协同杀伤童虫的作用。     

胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及鉴定

目的:构建及鉴定胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgGFc嵌合蛋白的真核表达载体pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc。方法:实验于2004-09/2005-07在南京医科大学病原生物学系完成。①采用反转录-聚合酶链反应方法从ICR小鼠的脑组织和脾脏中分别扩增胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区(mIA-2i)和IgGFc段(mIgGFc),并引入相应的酶切位点(XhoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRI)。②分别将扩增后的片段克隆入pUCm-T质粒,通过XhoⅠ/BamHⅠ双酶切和连接后,获得pUCm-T/mIA-2i-mIgGFc重组质粒。③经过XhoⅠ/EcoRI双酶切后,将融合基因mIA-2i-mIgGFc克隆入真核表达载体pEGFP-N2。通过酶切、聚合酶链反应及插入片段序列测定对重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc进行鉴定。结果:①从ICR鼠的脑组织和脾脏中反转录-聚合酶链反应获得胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区和IgGFc段。②通过基因工程操作,获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i和pUCm-T/mIgGFc,并经酶切鉴定克隆成功。③获得重组克隆质粒pUCm-T/mIA-2i-mIgGFc,经聚合酶链反应和双位点酶切鉴定重组成功。④获得重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc和pEGFP-N2/mIA-2i,经聚合酶链反应、酶切及测序鉴定证实特异性片断插入真核表达载体成功。结论:pEGFP-N2/mIA-2i-mIgGFc真核表达载体的构建,为利用胰岛细胞瘤相关蛋白2基因疫苗预防非肥胖性糖尿病小鼠发生自身免疫性糖尿病的研究奠定了基础。     

胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区与IgG Fc段融合基因疫苗的构建及鉴定

目的：构建及鉴定胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区（mIA-2i）和IgG Fc嵌合蛋白的真核表达载体pEGFP-N2／mIA-2i-mIgGFc。 方法：实验于2004-09／2005-07在南京医科大学病原生物学系完成。①采用反转录一聚合酶链反应方法从ICR小鼠的脑组织和脾脏中分别扩增胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区（mIA-2i）和IgG Fc段（mIgG Fc），并引入相应的酶切位点（XhoⅠ／BamH Ⅰ和BmH Ⅰ／EcoRⅠ）。②分别将扩增后的片段克隆入pUCm-T质粒，通过XhoⅠ／BamHⅠ双酶切和连接后，获得pUCm-T／mIA-2i-mIgG Fc重组质粒。③经过XhoⅠ／EcoRⅠ双酶切后，将融合基因mIA-2i-mIgG Fc克隆入真核表达载体pEGFP-N2。通过酶切、聚合酶链反应及插入片段序列测定对重组质粒pEGFP-N2／mIA-2i-mIgG Fc进行鉴定。 结果：①从ICR鼠的脑组织和脾脏中反转录-聚合酶链反应获得胰岛细胞瘤相关蛋白2胞内区和IgG Fc段。②通过基因工程操作，获得重组克隆质粒pUCm-T／mIA-2i和pUCm-T／mIgG Fc，并经酶切鉴定克隆成功。③获得重组克隆质粒pUCm-T／mIA-2i-mIgG Fc，经聚合酶链反应和双位点酶切鉴定重组成功。④获得重组质粒pEGFP-N2/mIA-2i-mIgG Fc和pEGFP-N2/mIA-2i，经聚合酶链反应、酶切及测序鉴定证实特异性片断插入真核表达载体成功。 结论：pEGFP-N2／mIA-2i-mIgG Fc真核表达载体的构建．为利用胰岛细胞瘤相关蛋白2基因疫苗预防非肥胖性糖尿病小鼠发生自身免疫性糖尿病的研究奠定了基础。