CDFI 联合 VEGF 测定鉴别甲状腺肿瘤良恶性的可行性研究

目的:分析甲状腺肿瘤彩色多普勒血流显像(CDFI)与血管内皮生长因子(VEGF)测定的相关性,探讨术前应用CDFI联合VEGF检测鉴别甲状腺肿瘤良、恶性的可行性。方法:外科手术治疗的甲状腺肿瘤患者80例,术前用CDFI显示结节内部及周边血流信号,对血流丰富程度进行分级。术后病理标本用免疫组织化学法检测VEGF。对病理诊断为良性和恶性的两组病例分别做CDFI血流分级与VEGF表达的相关性分析,并用CDFI联合VEGF检测的方法,对甲状腺肿瘤的良、恶性进行模拟预测。结果:80例中共有96个甲状腺肿瘤结节,其中57个恶性结节,39个良性结节。良性组的CDFI血流分级明显低于恶性组(P<0.001);良性组的VEGF多呈"+~++"表达,恶性组VEGF多呈"++~+++"表达。VEGF与CDFI具有相关性(P<0.01)。CDFI结合VEGF分级对恶性肿瘤的阳性预测值为98.25%,高于仅凭CDFI诊断甲状腺恶性肿瘤的75.44%。结论:甲状腺肿瘤内部血供丰富程度与VEGF表达具有相关性,恶性组内部的血流丰富程度显著高于良性组,CDFI结合VEGF测定可以明显提高对甲状腺良、恶性病变鉴别的符合率。甲状腺肿瘤的CDFI检查结合VEGF测定,有可能成为术前对甲状腺肿瘤良恶性进行鉴别的一种新的方法。     

探头压力在浅表淋巴结良恶性超声鉴别诊断中的影响

目的:探讨应用超声对浅表淋巴结的良恶性进行鉴别诊断时,探头施加压力的大小对超声常用检测指标结果的影响?方法:对以浅表淋巴结肿大就诊或明确淋巴结转移住院医治的34例患者67枚淋巴结进行超声检查,分别在探头外加压力为0?3 N时对浅表淋巴结超声常用指标进行测量,结果与病理检查对照?结果:淋巴结的L/S比值以2为分界线进行计数比较,加压前后良性和恶性淋巴结计数?皮髓质厚度比例计数无差异;彩色多普勒检测淋巴结内动脉收缩期流速(PSV)?舒张期流速(EDV)差别统计学有意义;血流阻力指数RI以0.7为分界线计数,良性淋巴结计数差别有统计学意义,恶性淋巴结计数差别无统计学意义;良性淋巴结血供类型加压前后无显著差异,恶性淋巴结血供类型加压前后差异显著?结论:探头外加压力对临床浅表淋巴结超声常用指标的测量可产生重要影响,其中淋巴结内血流速度?血流阻力指数?淋巴结内血流分布规律受影响最大,因此在临床检诊中要注意探头外加压力的控制?     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2基因及其与实体瘤关系

SHP2属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员之一,是最早被定义为癌基因的酪氨酸磷酸酶。近年来,SHP2激活突变和高表达在白血病、实体瘤和努南综合征中陆续被发现,与肿瘤的发生、发展和预后密切相关。目前,SHP2基因已被研究用作临床肿瘤治疗的靶分子。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突变型真核表达载体构建及其表达产物磷酸酶活性检测

目的构建pcDNA3.1 SHP-2野生型(WT)及SHP-2D61G突变型(MT)真核表达载体,为研究SHP-2激活突变对肿瘤恶性生物学行为的影响提供基础。方法用RT-PCR及定点突变法从小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G/+真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的准确性;Western blot法检测转染NIH3T3细胞中SHP-2蛋白的表达水平;免疫共沉淀法获得表达在NIH3T3细胞中的SHP-2蛋白,用pNPP法检测其磷酸酶活性。结果构建的pcDNA3.1 SHP-2野生型及SHP-2D61G突变质粒经酶切初步检测后,测序检测发现MT SHP-2在181位核苷酸由WT的G突变为T,转染NIH3T3细胞株能够表达SHP-2蛋白;且转染MT的NIH3T3细胞株内SHP-2磷酸酶活性较WT组升高2倍(P<0.01)。结论成功构建了pcDNA3.1SHP-2野生型及SHP-2D61G突变型真核表达载体,SHP-2D61G突变的蛋白磷酸酶活性升高。     

探头压力对浅表动脉血流超声检测结果的影响

目的:探讨应用彩色多普勒超声检查浅表动脉时,探头施加压力的大小对血流动力学参数检测结果的影响。方法:选取20名健康志愿者(21～30岁),测量中指指掌侧固有动脉40支,在探头外加压力分别为0、200、400 g时测量收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期流速(EDV)、平均血流速度(TAMAX)、血流阻力指数(RI)及搏动指数(PI)。对不同压力组的测量数据进行组间统计学比较。结果:PSV、EDV、TAMAX随着探头压力的增加呈逐渐递减趋势,而PI、RI呈递增趋势。结论:血流动力学参数作为超声评价浅表血管结构与功能的重要指标,在检测时明显受到检查者对探头施加压力大小的影响,在对超声检测结果进行分析时不应忽略这一因素的影响。     

细胞周期相关因子CDCA3基因shRNA表达载体的构建及鉴定

目的设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,构建能有效下调CDCA3蛋白表达的shRNA真核表达载体,研究其对CDCA3表达的影响,以便进一步研究CDCA3的功能。方法根据文献获得CDCA3的siRNA靶序列,依据RNA干扰机制和shRNA靶序列的设计原则,以CDCA3基因为靶基因,合成一对编码shRNA的两条DNA序列,经退火后合成DNA双链,再克隆至shRNA表达载体pSIREN-DNRDsRed质粒中,连接产物转化E.coilJM109感受态细胞,然后挑取克隆提质粒,进行酶切鉴定和DNA序列测定。将构建成功的载体通过脂质体介导转染导入人胚肾HEK293细胞,采用Western blot法和Realtime RT-PCR,检测特异性shRNA对CDCA3蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果。结果成功构建靶向CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体;转染HEK293细胞后,可显著下调CDCA3在细胞内的mRNA水平及蛋白表达水平。结论 CDCA3蛋白的特异shRNA的真核表达载体能显著下调HEK293细胞内的CDCA3蛋白表达。成功构建CDCA3 shRNA表达载体,为进一步研究CDCA3基因的功能提供了实验基础。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突变促进组织白细胞浸润和器官损伤

目的观察SHP-2D61G/+酪氨酸磷酸酶激活突变对组织白细胞浸润、细胞因子分泌及多器官损伤的影响。方法分别以SHP-2D61G/+激活突变敲入的模型小鼠和野生型C57BL/6小鼠为研究对象,ELISA法检测小鼠血清和白细胞培养上清液中IL-2及TNF-α浓度;采用常规组织切片和HE染色观察心、肺、脾等组织病理学改变;放射免疫法检测血清中丙氨酸转氨酶和心肌肌钙蛋白I的水平。结果 SHP-2D61G/+激活突变小鼠脾、肺组织中白细胞浸润较野生型对照小鼠明显增加,心肌肥大,出现明显炎症损伤型组织学变化;与野生型对照相比,突变小鼠血清及白细胞培养上清液中IL-2和TNF-α浓度均显著增加(P<0.01),血清丙氨酸转氨酶及心肌肌钙蛋白I水平亦显著增高(P<0.01)。结论 SHP-2D61G/+激活突变增强白细胞分泌炎症因子的能力,促进组织白细胞严重浸润和脾、肺、心等多器官损伤,进而导致多器官功能障碍。     

pH响应型纳米探针用于超声/光声成像引导下的乳腺癌光热治疗

目的评估负载聚多巴胺（PDA）的pH响应诊疗一体化碳酸钙（CaCO₃）纳米探针的体外超声/光声双模态成像效果及光热治疗疗效。 方法通过一锅气相扩散法及两步法制备聚乙二醇（PEG）修饰的搭载PDA的CaCO₃纳米探针（CaCO₃-PDA-PEG）,观察其宏观及微观形貌、粒径、红外光谱、稳定性等表征;监测该纳米探针体外超声/光声双模态成像效果和pH响应超声造影显像能力,评估纳米探针的光热转换性能和细胞毒性并通过共聚焦显微镜观察其肿瘤细胞靶向能力;最后,通过细胞增殖实验和活死细胞染色评估纳米探针的体外光热杀瘤效率。 结果成功制备CaCO₃-PDA-PEG纳米探针,呈球形,大小均一,平均粒径约为258 nm,表面电位约为-21 mV;该纳米探针可明显增强光声显像效果,光声信号随纳米探针浓度升高而增强;在肿瘤酸性微环境中,CaCO₃-PDA-PEG遇H⁺可产生二氧化碳气泡进而增强超声造影成像;激光共聚焦显微镜下观察,纳米探针可被动靶向4T1细胞;CaCO₃-PDA-PEG（4 mg/ml）与4T1乳腺癌细胞共同孵育,无激光辐照时,细胞存活率高达92.31%;联合808 nm激光辐照后,对肿瘤细胞具有明显的光热杀伤效应,细胞存活率下降至26.61%,同时激光共聚焦显微镜下见大量红色荧光（死细胞）。 结论所制备的CaCO₃-PDA-PEG纳米探针具有良好的pH响应能力,可显著增强体外超声/光声双模态显像效果和光热治疗疗效,为进一步开发可视化肿瘤精准光热治疗方式奠定了基础。     

TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。