以改良方法制作软骨细胞外基质构建高质量组织工程软骨

目的：探讨应用改良方法制作的软骨细胞外基质（extracellular matrix,ECM）能否构建高质量组织工程软骨。方法：应用传统匀浆?脱细胞方法制作软骨ECM粉末,在此基础上通过物理研磨颗粒筛选获得细腻的软骨细胞外基质粉末（fine extracellular matrix,FECM）。将两种粉末通过冷冻干燥法制成ECM支架和FECM支架作为对照组和实验组。以软骨组织工程中成熟应用的聚乳酸聚羟基乙酸聚合物［poly（lactic?co?glycolic acid）,PLGA］支架为阳性对照组。取等量大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）种植于ECM支架和FECM支架,同时将BMSCs诱导分化为软骨细胞后种植于PLGA支架,然后将3种细胞?支架复合物移植入裸鼠皮下,28 d后取出样本并进行相关检测。结果：FECM支架孔径均一,结构规整,其构建的组织工程软骨在大小、色泽、糖胺多糖（sGAG）分泌以及胶原沉积等方面均远优于对照组构建的组织工程软骨,与阳性对照组无明显差异。结论：由改良方法制作的FECM支架在无外源性转化生长因子?β1（transforming growth factor?β1,TGF?β1）情况下可构建出高质量的组织工程软骨,具有潜在的临床应用价值。     

周期性应力条件下整合素过表达对大鼠软骨细胞的影响

目的：探讨周期性应力条件下整合素过表达对大鼠软骨细胞的影响。方法体外分离培养大鼠软骨细胞,随机分为上调组（A组,整合素过表达质粒的慢病毒转染）和对照组（B组,空白质粒的慢病毒转染）。将细胞置于周期性应力场中培养,采用Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶1／2（ERK1／2）蛋白表达和磷酸化水平,实时定量荧光PCR检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原基因表达水平,细胞计数试剂盒（CCK‐8）检测软骨细胞增殖情况。结果 A组整合素表达高于B组（0.824±0.029 vs ．0.419±0.014）（P＜0．05）。与B组相比,在周期性应力作用下,A组ERK1／2磷酸化水平、蛋白聚糖和Ⅱ型胶原基因表达、细胞增殖均增加（P＜0．05）。结论整合素过表达可以促进周期性应力作用下软骨细胞的增殖和基质合成。