Alu RNA及其突变体真核表达质粒构建以及对A549细胞活性氧簇产生的影响

目的：从氧化应激的A549细胞鉴定Alu RNA表达,构建Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,探讨过表达Alu RNA及其突变体对细胞氧化应激的影响。方法：设计Alu RNA特异性引物,H2O2应激A549细胞,RT?PCR扩增目的片段,通过定向克隆、点突变等方法构建pcDNA3.0?Alu（pAlu）重组质粒、右臂缺失突变体pcDNA3.0?Alu?left arm（pAlu?LA）、G25C突变体pcDNA3.0?Alu G25C（pAlu?M）;转染A549细胞,DCFH?DA检测活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）产生水平。结果：从应激的A549细胞成功扩增了Alu分子,重组的真核表达质粒pAlu、pAlu?LA、pAlu?M经酶切及DNA测序鉴定符合预期;pAlu、pAlu?LA转染显著促进A549细胞ROS产生;与pAlu相比,pAlu?M转染诱导产生的ROS显著降低。结论：成功克隆了氧化应激刺激下A549细胞产生的Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,体外实验显示Alu RNA通过翻译水平调控促进A549细胞ROS产生。     

茶与咖啡源性水溶性多酚的HUVEC细胞内抗氧化活性实验

目的 探讨茶叶和咖啡在常饮方式下水溶性多酚对细胞氧化损伤可能的保护和修护作用。 方法 建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、胃粘膜GES-1和胃癌SGC7901细胞的H₂O₂损伤细胞氧化应激模型，二氯荧光素二乙酸酯探针（DCFH-DA）实验检测细胞内活性氧簇（ROS）的水平，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞活力，每种细胞设阴性对照组和三种茶叶两种咖啡水溶性多酚的三个浓度梯度组，评价多酚提取物对细胞氧化损伤的保护和修护作用。 结果 测试的三种茶叶和两种咖啡均具有HUVEC细胞内的抗ROS生成与抗细胞氧化损伤能力，活性随着浓度的增加而增强（P<0.01）。绿茶的抗氧化性能最强，其次是两种咖啡，最后是红茶与黑茶。此种细胞内抗氧化活性在GES-1和SGC7901细胞中得到重复；5种多酚类饮料均不具备修复氧化损伤细胞的能力。 结论 茶和咖啡的水溶性抗氧化成分可以有效进入血管内皮和胃粘膜上皮细胞，发挥清除ROS和抗细胞氧化的能力，但对于已经氧化损伤的细胞不具备修复能力。