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目的:从氧化应激的A549细胞鉴定Alu RNA表达,构建Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,探讨过表达Alu RNA及其突变体对细胞氧化应激的影响。方法:设计Alu RNA特异性引物,H2O2应激A549细胞,RT?PCR扩增目的片段,通过定向克隆、点突变等方法构建pcDNA3.0?Alu(pAlu)重组质粒、右臂缺失突变体pcDNA3.0?Alu?left arm(pAlu?LA)、G25C突变体pcDNA3.0?Alu G25C(pAlu?M);转染A549细胞,DCFH?DA检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生水平。结果:从应激的A549细胞成功扩增了Alu分子,重组的真核表达质粒pAlu、pAlu?LA、pAlu?M经酶切及DNA测序鉴定符合预期;pAlu、pAlu?LA转染显著促进A549细胞ROS产生;与pAlu相比,pAlu?M转染诱导产生的ROS显著降低。结论:成功克隆了氧化应激刺激下A549细胞产生的Alu RNA及其2种功能缺失突变体的真核表达质粒,体外实验显示Alu RNA通过翻译水平调控促进A549细胞ROS产生。 相似文献
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