高压氧对Aβ25-35诱导大鼠认知和记忆障碍及其海马神经元凋亡的影响

目的探讨高压氧(HBO)治疗对β-淀粉样蛋白（Aβ）25-35所致拟阿尔茨海默病（AD）模型大鼠认知和记忆功能的改变及其海马神经元凋亡情况的影响。 方法选取健康成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只,按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和HBO治疗组,每组12只。正常对照组不做任何处理。其余各组大鼠给予10％水合氯醛(4ml)腹腔注射麻醉,假手术组大鼠每侧海马注射5μl生理盐水;造模大鼠（模型组和HBO治疗组）每侧海马注射5μl的Aβ25-35制备拟AD大鼠痴呆模型。造模成功后,模型组大鼠不做任何治疗处理;HBO治疗组大鼠造模2周后,常规HBO治疗,每日1次,10d为1个疗程,中间休息3d,共2个疗程。采用Morris水迷宫法观察各组大鼠空间记忆能力的改变,TUNEL染色观察大鼠海马神经元凋亡情况的改变,同时检测海马组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA、蛋白表达的改变。 结果水迷宫实验中,第5天和第6天HBO治疗组大鼠的逃避潜伏期与模型组比较显著缩短［（33.4±4.5）s比（48.1±2.7）s,（20.8±1.7）s比（40.5±1.9）s,P<0.05］,空间探索实验中HBO治疗组大鼠在原平台所在象限的时间及穿过原平台的次数较模型组显著增加［（35.8±5.6）%比（21.1±3.8）%,（4.8±1.1）次比（3.1±1.2）次,P<0.05］。TUNEL染色中,模型组海马神经元中胞核呈现棕色凋亡形态的较多,而HBO治疗组则见少数凋亡的海马神经元。海马组织凋亡基因检测中,HBO治疗组Bcl-2 mRNA和蛋白的表达显著高于模型组（P<0.05）,其Bax mRNA和蛋白的表达则相应地降低。 结论HBO可能通过抑制Aβ25-35诱导的海马神经元凋亡而改善AD大鼠模型的认知和记忆能力。     

miRNA-497抑制卵巢癌细胞中FASN的表达

目的:研究miRNA-497在上皮性卵巢癌组织/细胞中的表达情况,miRNA-497对脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)表达水平的影响,探讨miRNA-497与FASN之间的关系,为临床卵巢癌诊治以及选择性靶向药物应用提供新的实验研究依据?方法:qRT-PCR分析10例上皮性卵巢癌组织及10例正常上皮性卵巢组织中miRNA-497?FASN的表达水平,Person相关性分析二者表达水平有无相关性?从卵巢癌细胞株SKOV3?A2780中筛选出miRNA-497表达量较低的SKOV3细胞株,转染miRNA-497 mimics?miRNA-497 inhibitor至卵巢癌细胞株SKOV3中,转染miRNA-497 mimics control,miRNA-497 inhibitor control作为阴性对照,未转染组为空白对照,qRT-PCR检测不同组中FASN的mRNA的表达情况,Western blot分析各组细胞中FASN蛋白表达改变情况?结果:①miRNA-497在上皮性卵巢癌组织中的表达较正常卵巢组织明显降低,而FASN基因却存在异常高表达;Pearson相关性分析表明,卵巢癌组织和正常卵巢组织中miR-497与FASN mRNA表达存在负相关(r=-0.458 84,P < 0.01);②miRNA-497可以调控FASN的表达?与对照组相比,增加miRNA-497的表达后FASN的蛋白及mRNA表达水平明显降低;抑制miNRA-497的表达可增加FASN蛋白及mRNA的表达?结论:miRNA-497在上皮性卵巢癌组织中的表达较正常卵巢组织明显降低,而FASN基因却存在异常高表达,二者表达水平存在负相关;miRNA-497能够抑制卵巢癌SKOV3细胞中FASN的表达,FASN可能是miRNA-497的靶基因?     

基于光子悬浮列阵多元检测肿瘤标志物的初步研究

目的:探讨基于二氧化硅胶体晶体微球(SCCBs)微列阵多元检测技术在多元检测肿瘤标志物中的价值.方法:以SCCBs为载体,应用免疫双抗夹心法同时检测人胶质瘤细胞蛋白提取物中Bcl-2、p21蛋白的水平,并与传统ELISA方法相比较.结果:用基于SCCBs微列阵多元检测技术同时检测并用3倍信噪比计算Bcl-2、p21蛋白的线性范围分别是9 ～180 ng·ml-1和0.05 ～1 ng·ml-1,最低检测限分别是1 ng和0.049 ng.样品检测结果与ELISA方法检测结果无明显差异,提示此方法检测微量蛋白较传统方法具有高通量、高灵敏度等特点.结论:基于SCCBs的多元检测方法具有潜在的临床应用价值.     

3种结肠癌细胞株中DLC-1基因的表达及其启动子区的甲基化状态研究

目的:研究候选抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨结肠癌细胞株DLC-1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性.方法:采用RT-PCR技术分别检测DLC-1基因在人结肠癌细胞株CaCo-2、HT-29和LoVo中的表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)方法和亚硫酸氢盐修饰DNA测序检测启动子区域甲基化状态;分别用0、5、10 μmol·L-1浓度的去甲基化药物5氮杂胞苷处理DLC-1基因启动子区域高甲基化状态细胞后,再检测DLC-1基因mRNA表达水平.结果:人结肠癌细胞株CaCo-2和LoVo中DLC-1 mRNA呈阳性表达,HT-29中的表达呈阴性表达;CaCo-2和LoVo细胞DLC-1基因启动子区域未发生甲基化,而HT-29出现启动子区高甲基化状态;经5氮杂胞苷药物干预后,HT-29结肠癌细胞的DLC-1基因表达明显增强.结论:结肠癌细胞株HT-29中DLC-1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关.     

Midkine mRNA在食管鳞癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的：探讨靶基因中期因子（MK）在食管鳞癌患者外周血中的表达及其与食管鳞癌生物学行为的关系。方法：采用巢式RT-PCR方法检测54例食管鳞癌患者外周血的MK mRNA。10例正常健康志愿者外周血为阴性对照,11例食管鳞癌肿瘤组织为阳性对照。结果：54例食管鳞癌患者外周血MK mRNA阳性率为61.11%（33/54）,并与食管鳞癌患者淋巴结转移有显著相关性（P〈0.05）,而健康成人外周血则无一例出现阳性。结论：应用巢式RT-PCR方法检测食管癌患者外周血中的MKmRNA具有较高的敏感性和特异性,它有望成为判断食管鳞癌恶性程度、转移、复发和监测疗效的客观指标。     

高压氧对小鼠结肠癌移植瘤血管内皮细胞生长因子表达及微血管密度的影响

目的 探讨高压氧(HBO)对小鼠结肠癌移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达和肿瘤微血管密度(MVD)的影响.方法 建立小鼠结肠腺癌细胞CT26移植瘤模型16只,按数字表法随机分为对照组(8只)和HBO组(8只).HBO组每天HBO暴露1次,每次60 min,共15次.HBO处理结束后检测肿瘤生长情况,计算抑瘤率,并采用免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF表达和肿瘤MVD的改变.结果 与对照组[(2.692±0.391)cm3]比较,HBO组[(1.729±0.402)cm3]肿瘤的增长速率减慢(P＜0.05),且HBO组VEGF的表达(1.82±0.43)及MVD计数(23.43±4.05)与模型对照组VEGE(2.37±0.16)和MVD(31.57±6.32)比较均显著性降低(P＜0.05).结论 HBO可能通过抑制VEGF的表达、降低肿瘤血管生成进而抑制肿瘤的生长.     

高压氧对结肠癌细胞缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的 初步探讨高压氧(HBO)对结肠癌细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响.方法 将结肠癌细胞SW480分为正常对照组、高压氧不同压力(0.15 Mpa、0.20 Mpa、0.25 Mpa)组和高压氧不同暴露时间(12 h、24 h、36 h)组,各组分别处理后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同压力及时间HBO暴露后结肠癌SW480细胞的HIF-1α和VEGF mRNA表达水平改变.结果 SW480细胞在0.25 Mpa HBO暴露后12 h HIF-1αmRNA表达水平较0.15 Mpa和0.20 Mpa HBO暴露后12 h为低(P＜0.01),0.25 Mpa HBO暴露后24 h HIF-1α mRNA表达缺失;0.25 Mpa HBO暴露后36 hVEGF mRNA表达较0.15 Mpa、0.20 Mpa HBO暴露后12 h和24 h为低(P＜0.05).结论 HBO可能通过下调HIF-1α mRNA、VEGF mRNA来抑制肿瘤组织的血管形成.

Abstract：

Objective To investigate the effects of hyperbaric oxygen (HBO) on the expression of hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) mRNA and vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA in colon adenocarcinoma cells. Methods SW480 colon cancer cells were divided into a control group and an HBO group, which was in turn divided into various subgroups according to the various HBO pressures (0.15 MPa, O. 20 MPa, 0.25 MPa) and exposure times (12, 24 and 36 h) tested. The expression of HIF-1α and VEGF mRNA was evaluated with RT-PCR after the various treatments. Results The expression of HIF-1α mRNA was lower in the SW480 cells than in the controls after exposure to 0.25 MPa HBO for 12 h. No expression of HIF-1α mRNA was detected after exposure to 0.25 MPa HBO for 24 h. The expression of VEGF mRNA was lower after exposure to 0.25 MPa HBO for 36 h than in the controls. Conclusion Absence of HIF-1α mRNA expression and decreased expression of VEGF mRNA in SW480 can be observed after exposure to 0.25 MPa HBO for 24 h, suggesting that HBO may inhibit the formation of tumor blood vessels through down-regulating the expression of these mRNAs.     

海马区注射Aβ_(25-35)对大鼠学习记忆能力的影响

目的:对大鼠大脑海马区注射凝聚态的Aβ25-35,观察Aβ25-35对大鼠空间学习、记忆能力的影响以及大鼠脑组织的病理学改变。方法:SD大鼠36只,雌雄各半,将大鼠分为正常组、生理盐水组(双侧海马区各注射5μl生理盐水)、模型组(双侧海马区各注射5μl Aβ25-35),注射后1周进行水迷宫实验,连续7 d,2次.d-1,检测大鼠空间学习、记忆能力的改变状况。模型制作30 d后对各组大鼠脑组织进行苏木素-伊红(HE)染色,在光学显微镜下观察各组脑组织的形态学变化。结果:行为学实验结果显示实验第5、6天模型组的潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少,与生理盐水组和正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理学实验显示正常组海马神经元排列整齐、着色均匀,而模型组的海马神经元排列紊乱、细胞核固缩、不规则、胞浆浓缩。结论:大鼠双侧海马区注射Aβ25-35能够制作拟阿尔茨海默病模型。     

高压氧联合细胞周期特异性药物对结肠腺癌Lovo细胞的杀伤作用

目的探讨高压氧(HBO)联合细胞周期特异性药物氟尿嘧啶对结肠腺癌Lovo细胞的杀伤作用。 方法0.20 MPa HBO暴露后联合应用不同浓度氟尿嘧啶处理结肠腺癌Lovo细胞。流式细胞仪检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察其对结肠腺癌细胞增殖的抑制作用。 结果①HBO暴露后Lovo细胞S期细胞积聚较对照组明显增多（P<0.01）,HBO暴露后24 h组Lovo细胞S期积聚明显高于HBO暴露后12 h组和48 h组（P<0.01）;②0.20 MPa HBO暴露后24 h联合应用低浓度氟尿嘧啶（≤8 μM）作用Lovo细胞12 h后,HBO联合氟尿嘧啶组癌细胞增殖的抑制程度与氟尿嘧啶组比较,差异有统计学意义(P<0.05);药物作用48 h后,HBO联合氟尿嘧啶组与氟尿嘧啶组比较,差异有统计学意义 (P<0.01);③中浓度和高浓度（16、32和64 μM）的氟尿嘧啶作用于Lovo细胞12 h,HBO联合氟尿嘧啶组与氟尿嘧啶组之间差异无统计学意义 (P&rt;0.05);药物作用48 h后,HBO联合氟尿嘧啶组与氟尿嘧啶组比较差异有统计学意义 (P<0.05)。 结论0.20 MPa HBO暴露可提高细胞周期特异性药物氟尿嘧啶对Lovo细胞的杀伤作用,尤其增强低浓度氟尿嘧啶对结肠腺癌细胞的杀伤作用。     

锌-α2-糖蛋白对结直肠癌细胞株LoVo生物学行为的影响

目的:初步探讨锌-α2-糖蛋白(ZAG)对结直肠癌细胞LoVo的生物学行为的影响。方法:构建和应用ZAG过表达质粒pGCMV/EGFP/Neo/ZAG转染结直肠癌细胞LoVo,免疫组化检测ZAG的表达变化,MTT法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞的克隆形成能力和侵袭力的改变。结果:过表达质粒pGCMV/EGFP/Neo/ZAG可成功诱导结直肠癌细胞LoVo表达ZAG,同时其细胞增殖力受到抑制、克隆形成率降低以及细胞的侵袭能力明显降低。结论:结直肠癌细胞LoVo的生物学行为的改变可能与ZAG的过表达相关,其在结直肠癌的发生发展过程发挥抑癌的生物学效应。