iTRAQ技术鉴定小鼠睾丸发育差异表达蛋白的研究

目的 用同量异位素标记的相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术结合液相色谱质谱技术构建3周龄小鼠与成年小鼠睾丸蛋白差异表达谱系。 方法 分别抽提3周龄小鼠与成年小鼠睾丸总蛋白质,iTRAQ标记,液相色谱（LC）分离蛋白质,LTQ Orbitrap^{TM质谱仪进行蛋白质鉴定。 结果 鉴定出20个差异表达蛋白质,其中18个为3周龄小鼠睾丸高表达蛋白质,2个为成年睾丸高表达蛋白质。差异表达蛋白质主要参与细胞的有丝分裂、减数分裂、细胞增殖、分化、凋亡及精子发生等重要细胞事件。 结论 用目前最新的定量蛋白质组技术,构建的3周龄小鼠睾丸与成年睾丸差异表达蛋白谱系对研究睾丸功能、精子发生有一定理论价值,为定量蛋白组学技术在雄性生殖领域的应用奠定了基础。}     

人精子抗原基因表达产物HSG2Ag的纯化和鉴定

本研究运用离子交换层析法分离纯化人精子抗原基因表达克隆ＨＳＧ２的溶原蛋白，并用ＥＬＩＳＡ法鉴定其中的表达产物（ＨＳＧ２Ａｇ）。结果提示，用上述方法分离和纯化的ＨＳＧ２Ａｇ纯化度高，特异性高，适用应用于抗精子抗体检测试剂盒的制备，并为进一步研制精子抗原免疫避孕疫苗提供候选成分。     

利用cDNA微阵列技术筛选成年期与胚胎期睾丸差异表达基因——钙联接蛋白基因

目的 :用cDNA微阵列技术克隆和筛选成年期与胚胎期睾丸差异表达基因 ,以进行睾丸发育及精子发生的调控研究。　方法 :构建人睾丸cDNA芯片 ,分别用正常成人及胚胎睾丸的mRNA探针进行杂交 ,对成人和胚胎睾丸中差异表达的基因进行高流量的比较。　结果 :发现 1条成人睾丸高表达、胚胎低表达的基因———钙联接蛋白 (CLGN)基因。　结论 :运用cDNA微阵列方法可筛选到成年期与胚胎期睾丸差异表达基因     

运用改良一步法纯化小鼠附睾和卵巢组织中RNA

运用改良一步法纯化小鼠附睾和卵巢组织中ＲＮＡ组织胚胎教研室林敏，王黎熔，胡志刚，周作民，沙家豪关键词ｍＲＮＡ；纯化；小鼠中图号Ｒ－３３２成功构建ｃＤＮＡ文库的前提是获得高浓度的ｍＲＮＡ［１］，其中纯化ＲＮＡ常用异硫氰酸胍－酚－氯仿一步法完成［２］，该...     

半定量PCR比较正常小鼠和Tfm小鼠Leydig细胞17α-羟化酶mRNA的水平

半定量ＰＣＲ比较正常小鼠和Ｔｆｍ小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞１７α－羟化酶ｍＲＮＡ的水平沙家豪周作民王黎熔，等生殖与避孕１９９６，１６（４）∶３００运用反转录合成ｃＤＮＡ和半定量ＰＣＲ的方法，测定了正常小鼠和Ｔｆｍ小鼠Ｌｅｙｄｉｇ细胞中１７α－羟化酶ｍＲＮＡ...     

精子发生中Alu序列的返座作用

目的 :克隆人类精原细胞和初级精母细胞特异表达的基因。　方法 :应用改良的mRNA表达图谱分析技术 ,对正常男性、唯支持细胞综合征和生精阻滞在初级精母细胞病人的睾丸进行mRNA表达图谱分析的差异显示 ,选择唯支持细胞综合征缺失的表达基因并克隆测序。　结果 :正常男性、唯支持细胞综合征和生精阻滞在初级精母细胞症病人的睾丸组织表达图谱存在显著的表达差异 ,目前已获得唯支持细胞综合征缺失的片段 88个。在已分析的 6个片段中 ,1个与人类的Alu序列家族 (Alufamily) 98%同源。　 结论 :Alu序列在生精细胞中通过返座作用形成新Alu序列 ,使其不断扩散     

无标记定量方法在小鼠精子发生相关蛋白质组学研究中的应用

目的: 利用无标记定量蛋白质组学技术筛选在3周龄及成年小鼠睾丸中差异表达的蛋白质?方法:分别抽提3周龄及成年小鼠睾丸蛋白,酶解后所得肽段经纳升液相色谱分离,并经LTQ Obitrap质谱鉴定,在获得蛋白鉴定信息的同时根据相应肽段离子质谱峰强度对蛋白进行相对定量?结果:在3周龄及成年小鼠睾丸中共鉴定到非冗余蛋白319种,其中30种蛋白在两者之间存在显著的表达差异,这些蛋白主要参与形态发生?收缩?胞吞?受精等细胞事件,与精子变形过程及精子功能相关?结论:无标记定量蛋白质组学技术,具有方法简便?通量大?成本低廉等优点,利用其寻找睾丸发育,精子发生/功能相关蛋白具有广阔的前景?     

假两性畸型小鼠睾丸胆固醇侧链裂解酶mRNA的异常表达

为了解假两性畸型（Ｔｆｍ）小鼠睾丸胆固醇侧链裂解酶（Ｐ４５０ｓｃｃ）ｍＲＮＡ的水平及影响其转录的机理，用反转录－多聚酶链反应比较了５ｄ、２０ｄ、２５ｄ和３０ｄ正常小鼠、Ｔｆｍ小鼠及３０ｄ手术隐睾小鼠睾丸Ｐ４５０ｓｃｃ的ｍＲＮＡ水平，正常小鼠在５～２０ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平较低，从２５ｄ起明显增高，至３０ｄ时ｍＲＮＡ水平是５ｄ时的７５倍；Ｔｆｍ小鼠在５ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平稍高于正常小鼠，但随后直至３０ｄ其水平未见明显增高，在３０ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ总量低于正常小鼠１／１０；３０ｄ手术隐睾小鼠的Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平低于正常３０ｄ小鼠１／２，高于Ｔｆｍ小鼠５倍。结果提示，２５ｄ的Ｌｅｙｄｉｇ细胞功能的形成需要受体介导的雄激素作用，而Ｔｆｍ小鼠由于编码雄激素受体基因突变，间接导致青春期Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ的低水平。     

荧光PCR在男性不育相关DAZ基因检测中的运用

以带有荧光标记的ＳｐｅｃｔｒｕｍＯｒａｎｇｅ－ｄＵＴＰ作为材料，应用荧光ＰＣＲ技术诊断男性精子发生障碍患者外周血ＤＮＡ中的ＤＡＺ基因，证实ＤＡＺ基因Ｓｙ２５４片段的缺失与无精症和少精症存在联系，为运用分子技术诊断ＤＡＺ基因异常等男性不育疾病提供了一种新的方法。该方法可用于临床检测，稳定可靠，对实验人员更为安全。     

用hCG、ATP刺激Leydig细胞时细胞外液Ca2+浓度的变化对钙离子通道反应的影响

目的：探讨绒毛膜促性腺激素(hCG)、三磷酸腺苷(ATP)刺激睾丸间质细胞(Leyding细胞)分泌睾酮时细胞外液Ca^2 浓度的变化对钙通道的影响。方法：采用激光共聚焦显微镜测定比hCG,ATP刺激Leydig细胞时Ca^2 的变化。结果：人Leydig细胞具有对hCG、ATP敏感的钙通道，当细胞外液含有Ca^2 时，Leydig细胞对hCG的刺激反应敏感，而当细胞外液无Ca^2 时无反应。细胞外液无论有无Ca^2 ，Leydig细胞对ATP的刺激均有敏感反应。结论：细胞外液Ca^2 浓度的变化可能在hCG、ATP对Leyding细胞代谢调控中起作用。