高转移肺癌细胞株95 D中特异表达的C3orf1基因分析

目的 进一步了解肺癌转移的分子机制,筛选高转移肺癌中差异表达的基因。方法 利用荧光差异显示技术（DD—PCR）获得差异片段,对这些片段进行克隆和序列分析。通过在GenBank中同源性检索,查找差异片段相对应的同源基因。利用定量PCR检测验证该基因表达的差异性,并对该基因的结构进行预测。结果 通过DD—PCR得到9个差异片段,其中一个片段对应于C3orf1基因。定量PCR验证的结果表明,C3orf1基因在高转移肺癌中的表达量显著高于其他被测试的5种肿瘤细胞。该基因的读码框长858bp,编码285个氨基酸,分子量约32200。蛋白质结构预测分析发现,该基因含有7个类似表皮生长信号区,N端有一含有24个氨基酸的信号肽,并且还可能有3个2S-2Fe铁氧化还原蛋白铁硫结合信号区,2个维持自身静态平衡的VWFC信号区和2个硫解酶活性区。结论 C3orf1基因在高转移肺癌中异常表达,可能是分泌型的生长因子类蛋白,刺激细胞的生长。     

肺癌细胞株中发现一种细胞周期素A2的异常剪接体

目的检测细胞周期素(cyclinA1和cyclinA2)在4种肿瘤细胞中的表达,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用RT PCR和DNA测序技术观察cyclinA1和cyclinA2的基因表达并进行序列分析。结果cyclinA1在4种肿瘤细胞中均未检测到表达,而cyclinA2在4种肿瘤细胞中均有表达;在肺癌细胞株(LTEP a2)细胞中,发现一种cyclinA2异常的剪接体,其保留了第四内含子,而缺失了第五外显子,其序列编码蛋白质也发生了突变,只保留了5′端194氨基酸。结论细胞周期素表达与肿瘤发生有一定相关性,LTEP a2细胞中存在细胞周期素A2异常表达,其机制与作用有待进一步的研究。     

丹参素治疗肝纤维化及其作用机制研究

目的 研究丹参素对大鼠免疫性肝纤维化的治疗作用及其怍用机制。 方法 用猪血清制作大鼠肝纤维化动物模型,自第8周起给予丹参素组大鼠腹腔注射丹参素300 mg·kg-1·d-1,同时给予模型对照组和正常对照组相同体积的双蒸水腹腔注射。第12周动物实验结束时,除留取一只模型组大鼠用原位循环灌流法提取肝星状细胞(HSC)外,其余大鼠全部处死提取血清检测透明质酸(HA)以及取肝脏标本切片做HE、VG染色。以MTT法观察不同浓度丹参素对HSC的增殖抑制作用,用流式细胞仪分析丹参素作用后HSC所处周期。 结果 丹参素干预组HA为(231.4±41.1)ng/ml,模型组(398.7±54.5)ng/ml,F=154.796,P<0.05。HE及VG染色示丹参素干预组肝纤维化程度明显轻于模型组;细胞试验表明50、100、200 mg/L丹参素对HSC作用后的MTT值(A值)分别为1.60×102±8.17×10-4、1.10×10-2±1.41×10-3和6.75×10-3±3.30×10-3,细胞对照组A值为7.18×10-2±1.71×10-3,F=1154.221,P<0.05。 结论丹参素对大鼠免疫性肝纤维化有明显的防治怍用。其主要机制为丹参素对HSC明显的增殖抑制作用。     

幽门螺杆菌上皮接触诱导基因iceA1的克隆及序列特征

目的:克隆和分析镇江地区来源于不同疾病的(胃癌、溃疡和胃炎)幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的表皮接触诱导基因iceA1.方法:从胃十二指肠疾病患者胃黏膜组织中分离培养获得H.pylori,PCR扩增检测iceA1基因,并克隆至pMD18-T载体上,进行测序和序列分析.结果:克隆和测序了镇江地区来源于不同疾病的(胃癌、溃疡和胃炎)共12株H.pylori的i c e A1基因片段,并与标准菌株60190比对,结果显示镇江地区的H.pylori的iceA1基因中存在着3处框内缺失突变热点(780del6、809del5、914del7),这些缺失突变在溃疡和胃炎中均存在,但是胃癌株只存在809del5.对缺失片段周围的序列进行分析,这些缺失序列的两端基本都与同向重复序列相连,这可能与复制过程中滑动错配的小片段缺失模型有关.结论:iceA1序列的变异性有可能作为分析H.pylori群体遗传学的有用工具.     

镇江地区H pylori的cagA基因及其3′可变区结构的变化

目的:评估镇江地区H pylori临床株的cagA基因阳性率、了解菌株CagA蛋白的可能分型、其羧端可变区EPIYA的数目以及与临床结果之间有无关联.方法:培养分离来自临床胃十二指肠疾病患者的H pvlori,提取基因组DNA,通过PCR方法检测H pylori cagA基因的状况.随机选择不同病种的cagA基因阳性(cagA~ )的PCR产物.通过转化质粒,进行cagA~ PCR产物测序,通过ExPASY-Tranlation软件获得cagA基因相应的CagA蛋白的氨基酸序列.国际标准株NCTC11637的cagA基因以及CagA蛋白序列通过搜索NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)数据库获得.结果:60株H pylori临床株中,56例为cagA~ ,阳性率达93.3%.20例测序的结果表明,CagA蛋白结构可分为2种类型,19株东亚型和1株西方型.所有19株东亚型均为Yamaoka分型的A型,所有20例菌株的EPIYA的数目均为3个,与临床结果无关联.结论:cagA基因阳性率在不同病种之间无差异.镇江地区H pylori临床株的CagA蛋白的一级结构,与日本、韩国菌株一样,主要为东亚型,其CagA蛋白羧端可变区EPIYA数目均为3个,与临床结果无关联.     

“一元钱看病”模式的制度设计与启示——广州市花都区医疗卫生改革分析

从2008年开始试点,广州市花都区开展村卫生站免费为农民治病工作,农民在村卫生站看病只需交一元钱。十年来,为保障“一元钱看病”模式的正常运行,花都区边实践边完善,建立了较为成熟的筹资渠道、支付标准、人事管理、基本药物制度、信息系统、绩效考核等配套措施,拓展了村卫生站的服务内容。花都区的做法筑牢了农村三级医疗服务网的网底,促进了分级诊疗秩序的建立,有效地缓解了农民看病难看病贵的问题,为我国农村地区建立基本医疗卫生制度提供了有益借鉴。     

戊型肝炎病毒结构蛋白p166在家蚕细胞及蛹体中的表达

目的探讨戊型肝炎病毒结构蛋白基因片段p166(HEVp166)在家蚕／BmNPV表达载体系统中的表达水平。方法应用PCR、基因克隆及共转染等技术将p166插入到家蚕杆状病毒多角体启动子的下游，构建重组病毒；并在家蚕细胞及家蚕蛹中表达p166。用间接免疫荧光试验检测感染36h后家蚕培养细胞中p166蛋白的表达情况。收集感染后144h的蛹样品进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecylsulphate-Polyacrylamide gel eleetrophoreses，SDS-PAGE)及Western blotting分析。结果获得含有HEVp166基因片段的重组杆状病毒表达载体Bm-HEV166。Bm-HEV166能在家蚕细胞中表达p166蛋白，感染后的培养细胞中出现绿色球状体；感染Bm-HEV166的家蚕蛹血淋巴能高效表达p166蛋白，蛹血淋巴能与抗p166单克隆抗体发生特异性反应，在Mr为19000大小的位置出现一条明显的杂交条带。结论HEVp166基因片段在家蚕蛹中能获得高效表达，为进一步研制HEV口服疫苗奠定基础。     

溃疡性结肠炎109例临床诊断与治疗分析

目的：探讨溃疡性结肠炎最佳的临床诊治方法。方法：分别采用结肠镜 钡剂灌肠摄片检查和结肠镜和病理组织检查对109例患者进行诊断；同时分别采用单纯柳氮磺鞍吡啶口服。柳氮磺鞍吡啶口服 锡类散灌肠治疗，柳氮磺鞍吡啶口服 锡类散灌肠 免疫调节剂治疗。结果：结肠镜 钡剂灌肠诊断UC准确率为98％，结肠镜 病理组织检查诊断UC准确率为99．6％，柳氮磺鞍吡啶单独口服治疗率36．2％，柳氮磺鞍吡啶口服 锡类散灌肠治疗有效率79％，柳氮磺鞍吡啶口服 锡类散灌肠 免疫调节剂治疗有效率90．5％。结论：结肠镜 病理组织检查对诊断UC确率较其它高，对临床确诊UC有重要意义；治疗方案中单用SASP对轻型UC较好，SASP加锡类散对左半结肠的UC较好，SASP加锡类散加免疫调节剂对重型UC较好。     

高脂血症性急性胰腺炎临床特征分析

目的 探讨急性胰腺炎的发生、发展及预后与高脂血症,尤其是高甘油三酯血症相关性.方法 通过收治的352例急性胰腺炎患者的完整资料进行回顾性分析.A组甘油三酯水平正常;B组,甘油三酯水平≥参考值5倍;C组甘油三酯水平≤参考值5倍,但高于参考值.结果 A、C两组患者血尿淀粉酶在发病后检查均高于参考值范围;B组患者血尿淀粉酶在发病后检查均在参考值范围.结论 甘油三酯水平升高参与急性胰腺炎的发生,发展,其水平的变化影响急性胰腺炎预后;同时,过高的甘油三酯水平(≥参考值5倍)对血尿淀粉酶升高有明显的影响.     

信号传导与激活因子2基因在食管癌中的表达

目的:筛选食管癌中特异表达的基因,进一步了解食管癌发生的分子机制。方法:利用荧光差异显示技术(DD-PCR)获得差异表达的片段,对这些片段进行克隆和序列分析。通过在基因库中同源性检索,查找差异片段相对应的同源基因。利用实时荧光定量PCR技术在食管癌临床标本中进行验证。结果:通过DD-PCR获得的差异片段中有一个片段对应于信号传导与激活因子2(stat2)基因,该基因的读码框长2556 bp,编码852个氨基酸,编码蛋白分子量约97.9 kD。应用实时荧光定量PCR方法进一步验证发现该基因在食管癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织(P<0.05,n=16)。结论:stat2基因在食管癌组织中呈高表达,推测其可能在食管癌的发生发展中起一定的作用。