miR-145抑制人肝内胆管细胞癌细胞增殖

目的研究miR-145调节人肝内胆管细胞癌(ICC)细胞增殖的机制。方法收集标本ICC癌组织和癌旁胆管组织,共38对; 2种ICC细胞系:Hu CCT-1和RBE;对其进行miR-145及NUAK1的表达调控。通过RT-qPCR检测miR-145和新式激酶家族1(NUAK1)的表达及两者相关性;检测细胞周期观察细胞增殖变化;荧光素酶报告基因实验确认miR-145的靶基因; Western blot观察AKT通路蛋白水平变化。结果 miR-145在癌组织的表达明显低于癌旁组织(P0. 05),NUAK1在癌组织的表达明显高于癌旁组织(P0. 05),两者具有相关性(P0. 05)。miR-145过表达组和NUAK1干扰组细胞计数均明显少于对照组(P0. 05); Hu CCT-1细胞系转染miR-145 mimics后,G1期的细胞数明显增加(P0. 05);野生型的荧光信号明显被抑制(P0. 05);过表达miR-145或抑制NUAK1后,p AKT和p FOXO1表达明显下降(P0. 05)。结论 miR-145可能通过抑制NUAK1及其下游通路抑制ICC细胞增殖,它有可能为ICC临床诊治提供新的靶点和思路。     

PKM2基因对胆管细胞癌迁移､侵袭及增殖的影响

目的:检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)组织中的表达情况,探讨PKM2下调对胆管癌细胞迁移?侵袭及增殖的影响?方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色分别检测胆管癌及对应癌旁组织标本中PKM2的mRNA和蛋白表达水平?利用慢病毒表达载体系统在胆管癌细胞株HuCCT-1?HCCC-9810中下调PKM2,分别用划痕实验?Transwell细胞侵袭实验和CCK-8比色法检测细胞迁移?侵袭及增殖能力?结果:胆管癌组织中PKM2的mRNA和蛋白表达水平明显高于对应癌旁组织?经qRT-PCR和Western blot方法证实稳定转染PKM2 shRNA的胆管癌细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P < 0.05),与空载对照组(PKM2-NC)和正常对照组(PKM2)相比,实验组细胞(PKM2-shRNA)的迁移?侵袭及增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2 shRNA能有效地降低胆管癌细胞中PKM2基因的表达,PKM2基因沉默可以抑制HuCCT-1?HCCC-9810细胞的迁移?侵袭及增殖?