人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

目的 构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定.方法 采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv).连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物.ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力.采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性.结果 测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因.原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50％.复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD =0.93×10-7 mol/L,1L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白.27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强.27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合.结论 成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础.     

HSA—sTRAIL融合蛋白的表达质粒pPICZαA—HSA—sTRAIL的构建

目的:构建pPICZαA-HSA-sTRAIL真核表达质粒。方法:用PCR方法扩增sTRAIL基因,然后克隆入pPICZαA载体,构建pPICZαA-sTRAIL质粒,然后将HSA基因克隆入pPICZαA-sTRAIL质粒,构建pPICZαA-HSA-sTRAIL真核表达质粒。重组子均进行酶切鉴定和PCR鉴定,最后进行DNA测序验证。结果:PCR方法克隆出目的基因,并成功构建了pPICZαA-HSA-sTRAIL质粒。酶切鉴定、PCR鉴定和DNA测序均证明构建的表达质粒完全与预期一致。结论:成功构建了pPICZαA-HSA-sTRAIL真核表达质粒。     

辛基酚影响MCF-7细胞凋亡及bcl_2、caspase3表达

目的观察辛基酚（0P）对乳腺癌MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响。方法以流式细胞分析、DNA断端末端标记（TUNEL）试验、DNA片断率分析、流式细胞仪免疫荧光和荧光定量PCK等方法观察OP对MCF-7细胞凋亡、bcl2、bax、caspase3表达的影响。结果8、16μmol／LOP作用MCF-7细胞，TUNEL细胞阳性率和DNA片断百分率增加，48h时的凋亡率分别为（6．6±1．32），（16，3±3.48）『对照（43±1．18）]；bcl2荧光量分别为（63．5±5．84），（30．3±2．49）[对照（57．2±4．07）]。4μmol／LOP明显上调MCF-7细胞中bcl2 mRNA表达；16μmol／L OP则明显降低细胞中bcl2 mRNA表达，且bax、caspase3 mRNA表达明显增加。结论8、16μmol／L OP能明显诱导MCF-7乳腺癌细胞的凋亡，增加DNA片断百分率，其机制可能是通过下调细胞中bcl2的表达、上调bax、caspase3的表达来实现。     

组合乙肝标志物联合ALT对判断肝损害和HBV-DNA复制状态789例调查分析

目的调查789例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性人群的肝损伤及外周血中乙型肝炎病毒复制情况。方法用统计学方法分析HBsAg阳性者789例,同时进行的乙肝标志物五项、ALT和HBV-DNA检验结果分布。结果HBsAg阳性者中ALT异常率为27.8%,而HBV-DNA复制率为49.3%。乙肝标志物组合间的ALT异常率和HBV-DNA复制率存在差异。HBeAg阳性且ALT异常时,HBV-DNA复制率达到93.1%。结论组合乙肝标志物配合ALT可较好地了解肝损伤和HBV-DNA复制情况,有助于判断病情。     

组合乙肝标志物联合ALT对判断肝损害和HBV-DNA复制状态789例调查分析

目的调查789例乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性人群的肝损伤及外周血中乙型肝炎病毒复制情况。方法用统计学方法分析HBsAg阳性者789例,同时进行的乙肝标志物五项、ALT和HBV-DNA检验结果分布。结果HBsAg阳性者中ALT异常率为27．8％,而HBV-DNA复制率为49．3％。乙肝标志物组合间的ALT异常率剐HBV-DNA复制率存在差异。HBeAg阳性且ALT异常时。HBV-DNA复制率达到93．1％。结论组合乙肝标志物配合ALT可较好地了解肝损伤和HBV-DNA复制情况,有助于判断病情。     

乙型肝炎病毒复制阳性417例的ALT、乙肝标志物和HBV DNA临床分析

目的调查417例乙型肝炎病毒复制阳性患者的肝损伤、乙肝标志物(HBV Markers,HBVM)和外周血HBV DNA水平及抗病毒治疗适应证符合情况。方法对乙型肝炎病毒复制阳性的417例患者的ALT、乙肝标志物(5项)和HBV DNA进行定量分析。结果HBVDNA阳性者中,性别间ALT各组例数比例不同,但在ALT≥2ULN组,性别间ALT例数相同,而HBV DNA拷贝数差异有统计学意义。ALT各组的HBeAg阴、阳性分布无差异,ALT各组HBV DNA拷贝数随ALT升高而升高。乙肝标志物组的13、145、15组的抗病毒治疗适应证符合率是一致的,135组高于其他三组,且13、135组HBVDNA拷贝数无差异,高于其他两组。结论监测ALT、乙肝标志物和HBVDNA,有助于了解本地区HBV感染情况,节约医疗资源,及时治疗,延缓病程。     

β-连环蛋白在人毛囊发育形成中的表达

目的：研究β-连环蛋白(β—catenin)在人毛囊从胚胎到成熟发育过程中的表达及意义。方法：采用SP免疫组化技术(IHC)对不同胚胎龄及成年期的正常人头皮标本进行染色，分析比较不同时期毛囊β-catenin表达及其差异。结果：β—catenin蛋白的表达与毛囊发育的不同阶段具有相关性，早期形成的毛芽中未见β-catenin表达，而胚胎毛囊发育后期的外根鞘及膨突区中出现β-catenin表达，在成人发育成熟的毛囊中，β—catenin表达明显增强，阳性细胞集中于毛囊外根鞘内侧。结论：β—catenin在毛囊不同发育阶段表达与分布的差异，提示β-catenin可能在毛囊从发生到成熟过程中发挥重要作用。     

辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响

目的观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞周期及周期蛋白表达的影响。方法以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖、细胞周期相和细胞凋亡、CDK2和CDK4 mRNA表达、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达的影响。结果4、8、16μmol/LOP作用MCF-7乳腺癌细胞72h时,细胞增殖率分别为107.31%、168.06%、62.00%,G0/G1期细胞分别为(52.46±6.67)%、(50.19±7.39)%、(67.31±5.47)%,对照组(55.27±7.53)%,细胞凋亡率分别为(4.84±1.12)%、(6.48±1.36)%、(19.26±3.57)%,对照组(5.56±1.125)%,16μmol/LOP减少了细胞中CDK2、CDK4、Cyclin D1 mRNA及Cyclin D1的表达。结论4、8μmol/LOP促进MCF-7乳腺癌细胞增殖,16μmol/LOP则抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,这可能与OP影响细胞中CDK2、CDK4、Cyc-lin D1 mRNA及Cyclin D1表达有关。     

HIF-1α和VEGF表达对术后结肠癌复发的影响

探讨结肠癌根治术后缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)联合检测水平变化对患者复发的影响。选取兵器工业五二一医院普外科接受结肠癌根治术的96例患者,根据2年内术后随诊情况分为复发组和无复发组,采用酶联免疫吸附法检测HIF-1α和VEGF的水平。对复发转移相关危险因素进行Cox单因素与多因素回归分析,对术后复发转移情况对比。无复发组与复发组的肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴细胞转移指标对比,差异有统计学意义(P<0.05);无复发组的HIF-1α、VEGF的指标均显著低于复发组(P<0.05);单因素分析显示,结肠癌术后患者的肿瘤分化程度、TNM分期、肿瘤分型、淋巴结转移、HIF-1α表达、VEGF表达与术后复发有关(P<0.05);多因素分析显示,肿瘤分化程度、淋巴结转移、HIF-1α表达、VEGF表达是术后复发的独立危险因素(P<0.05)。术后结肠癌组织HIF-1α表达、VEGF表达均上调且与结肠癌的发生关系密切;两者在结肠癌浸润转移过程中发挥重要作用;HIF-1α可能是肿瘤血管生成和提供能量的关键因素。