硼替佐米通过下调Smurf1拮抗大鼠慢性移植肾间质纤维化

目的：通过观察硼替佐米（bortezomib）对于smad泛素化调节因子1（Smurf1）的表达及肾小管上皮细胞?间充质转分化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）的影响,探讨硼替佐米抗移植肾纤维化的分子机制。方法：构建大鼠移植肾间质纤维化模型,并用硼替佐米进行干预。通过马松三色（Masson）染色观察硼替佐米对各组大鼠移植肾纤维化程度的影响。通过免疫组化检测硼替佐米对于肿瘤坏死因子?α（TNF?α）、Smurf1、上皮细胞钙黏蛋白（E?cadherin）及α?平滑肌蛋白（α?SMA）表达的影响。以肾小管上皮细胞（HK?2）为对象,以TNF?α作为刺激因子,通过Western blot检测Smurf1、E?cadherin和α?SMA的表达变化。通过慢病毒转染的方式敲低Smurf1在HK?2细胞中的表达,通过Western blot检测TNF?α刺激后E?cadherin和α?SMA的表达变化。将细胞分为对照组、TNF?α组、硼替佐米组及实验组,Western blot检测Smurf1、E?cadherin和α?SMA的表达变化。结果：硼替佐米治疗组大鼠移植肾间质纤维化明显且α?SMA与Smurf1的表达显著低于生理盐水治疗组（P < 0.05）,同时E?cadherin的表达显著高于生理盐水治疗组（P < 0.05）。50 ng/mL TNF?α刺激HK?2细胞24 h后Smurf1和α?SMA的表达明显高于0 h组（P < 0.05）,E?cadherin的表达则明显低于0 h组（P < 0.05）。 敲低Smurf1的表达后,sh?Smurf1组细胞在TNF?α刺激后的E?cadherin表达明显高于sh?con组细胞（P < 0.05）,而α?SMA则明显降低（P < 0.05）。硼替佐米干预后,实验组细胞的E?cadherin的表达明显高于TNF?α组（P < 0.05）,α?SMA的表达则明显低于TNF?α组（P < 0.05）。结论：硼替佐米可以通过抑制Smurf1的表达从而抑制TNF?α诱导的肾小管上皮细胞EMT现象,进而抑制移植肾间质纤维化。     

优克龙对肾脏草酸钙晶体形成的影响及机制

目的：探讨优克龙对肾脏草酸钙结石形成的影响及机制。方法：采用乙二醇、氯化铵以及葡萄糖酸钙联合诱导大鼠,构建大鼠肾脏草酸钙结石模型。优克龙干预上述模型4周,收集尿液、肾脏组织行HE染色,尿液中生化成分检测,肾脏组织中自噬与凋亡关键蛋白的水平检测。采用草酸钙结晶与肾小管上皮细胞联合培养,构建草酸钙结石细胞模型。α?硫辛酸干预上述细胞模型,探讨草酸钙结晶诱导肾小管上皮细胞发生氧化应激的机制;采用优克龙干预上述细胞模型,探究优克龙保护肾小管上皮细胞的作用及分子机制。结果：动物实验中,与对照组相比,模型组草酸钙结石数量显著升高,而优克龙可显著抑制草酸钙结石的形成,这一效应可能与降低氧化应激水平、自噬与细胞凋亡水平有关。在细胞模型中,α?硫辛酸可显著抑制由草酸钙结晶诱导的肾小管上皮细胞氧化应激过程,细胞自噬与凋亡水平均显著下降,提示细胞发生氧化应激后激活了细胞自噬与凋亡水平;优克龙也可抑制氧化应激过程,细胞中MAPK通路激活水平显著下降,细胞自噬与凋亡水平均明显抑制。结论：优克龙可显著抑制肾脏草酸钙结石的形成,并可抑制由草酸钙结晶诱导的细胞氧化应激过程,通过MAPK通路明显降低细胞的自噬与凋亡水平。