纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析

检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域，阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒（NBV）的致病机制。     

轮状病毒NSP5克隆、鉴定、表达及其条件优化

目的 为制备NSP5多克隆抗体及进一步研究NSP5的功能和在轮状病毒复制中的作用奠定基础。方法 利用分子克隆的技术构建出原核表达蛋白质粒NSP5-pGEX-6P-1和真核表达质粒NSP5-pFLAG-CMV-3,其中NSP5-pFLAG-CMV-3转染细胞后通过Western Blot和间接免疫荧光法观测NSP5在293T细胞里的表达和定位;NSP5-pGEX-6P-1经转化E.coli BL21(DE3)后从IPTG浓度、温度及历经时间3个方面摸索出最优化的诱导蛋白表达条件,并经GST琼脂糖树脂纯化蛋白且用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定。结果 构建了真核表达载体NSP5-pFLAG-CMV-3和原核表达载体NSP5-pGEX-6P-1。经NSP5-pFLAG-CMV-3转染后的293T细胞通过Western Blot验证NSP5蛋白在细胞中成功表达,间接免疫荧光观察到重组蛋白在细胞质中富集。37 ℃、8 h、0.4 mmol/L IPTG诱导是NSP5-pGEX-6P-1蛋白表达的最适条件,且以包涵体形式汇聚在沉淀中进行表达。SDS-PAGE和Western Blot表明重组蛋白纯化成功。结论 成功构建NSP5重组表达系统,成功优化了NSP5蛋白诱导表达的条件并纯化蛋白。     

呼肠孤病毒空斑检测方法建立

目的 建立呼肠孤病毒空斑检测方法,为进一步研究该病毒奠定基础。方法 通过Western Blot、免疫荧光检测纳尔逊海湾正呼肠孤病毒Miyazaki病毒株感染L929细胞和BSR细胞情况,病毒RNA水平凝胶电泳验证Miyazaki病毒株核酸成分。建立呼肠孤病毒空斑检测方法,计算病毒滴度。结果 Miyazaki病毒株能成功感染L929细胞和BSR细胞,水平凝胶电泳验证病毒株核酸成分正确,病毒株感染的L929细胞出现空斑,计算得出病毒滴度结果为2.2×10⁸ PFU/mL。结论 呼肠孤病毒空斑检测方法成功建立,该方法可以形成清晰可见的空斑,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究呼肠孤病毒提供帮助。     

ICD植入术后颈内、锁骨下、腋静脉血栓形成并治疗成功1例

ICD植入术后,起搏电极植入血管发生深静脉血栓(deep venous thrombosis,DVT)的报道罕见.本文报道1例穿刺血管血栓形成并经抗凝治疗成功患者. 1 病例报道 患者男性,19岁,因原发性室颤在我院行单腔ICD植入术,ICD电极通过穿刺左侧腋静脉植入右室心尖部,手术后一周拆线并顺利出院.但出院20天后患者逐渐出现左上肢酸涨、沉重感,伴左侧头部胀痛而重新入住我科.