姜黄素与氟尿嘧啶抗人结肠癌细胞株HT-29增殖的协调作用研究

目的:检测姜黄素能否增强氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)抗结肠癌细胞的增殖作用,并探讨其与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的关系。方法:应用中位效应原理和联合作用指数法来定量姜黄素与FU的联合作用。应用Westernblot分析联合应用两种药物之后对于COX-2蛋白表达的影响。结果:姜黄素和FU的半数生长抑制率(IC50)分别为15.9±1.96和17.3±1.85μmol/L。当姜黄素与FU联合应用时,在较高的作用水平可以定量地观察到对HT-29细胞的协同抑制作用。并且这种协同作用随COX-2蛋白表达水平下调。结论:姜黄素可以增强FU的化学治疗效果,在结肠癌的临床治疗方面联合应用这两种药物可能具有实际意义。     

基于GEO数据库筛选阿尔茨海默病的关键基因

目的 应用生物信息学方法筛选阿尔茨海默病的关键基因。方法 从GEO数据库下载GSE5281和GSE138260数据集，用R语言对数据集进行去批次效应；WGCNA分析构建共表达网络，筛选与疾病相关基因模块并绘制基因聚类图和相关性图；以WGCNA筛选出的模块基因为对象进行差异表达基因分析，绘制火山图及热图；对差异表达基因进行Lasso回归分析，筛选关键基因；对差异表达基因进行京都基因和基因组数据库(KEGG)和基因本体(GO)富集分析，绘制气泡图。结果 通过WGCNA分析获得包含704个基因的brown模块与疾病高度相关；brown模块差异表达分析得到39个差异表达基因，其中10个下调基因，29个上调基因；进一步Lasso回归后筛选出9个关键基因。GO和KEGG富集分析表明，差异表达基因在矿物质元素的吸收、氧化还原驱动的活性跨膜转运蛋白等方面富集。结论 GEO数据库初步筛选出潜在的阿尔茨海默病关键基因，但还需进一步实验验证。     

鲑鱼鱼白DNA对老龄小鼠胸腺淋巴细胞构成的影响

目的：探讨外源性核酸对自然衰老小鼠CD3^ 、CD3^ CD4^ 和CD3^ CD8^ 胸腺淋巴细胞构成的影响。方法：10月龄雌性Balb/c小鼠按体质量随机分为高剂量组、低剂量组和对照组。5周后，测定胸腺脏器指数；胸腺组织切片后以Image-pro Plus专业图像分析系统（4.0版）计数胸腺细胞；采用直接免疫荧光流式细胞术检测老龄小鼠胸腺细胞CD3^ 、CD3^ CD4^ 和CD3^ CD8^ 的表达情况。结果：鲑鱼鱼白DNA提取物对小鼠的体质量、胸腺质量和胸腺指数均没有影响，但可增加小鼠的胸腺皮质和髓质细胞数量，并提高CD3^ 、CD3^ CD4^ 和CD3^ CD8^ 淋巴细胞的比例，而对CD3^ CD4^ 和CD3^ CD8^ 淋巴细胞的比值没有影响。结论：补充鲑鱼鱼白DNA可能改变自然衰老Balb/c小鼠胸腺细胞的构成，使胸腺有效细胞数量增加，从而可能延缓胸腺的退化萎缩。     

姜黄素与5-氟尿嘧啶联用对人结肠癌HT-29细胞凋亡及环氧合酶-2表达的影响

目的:探讨姜黄素是否能增强5-氟尿嘧啶(5-FU)的抗癌作用,并探讨其与细胞凋亡及COX-2蛋白表达的关系。方法:采用MTT法观察不同浓度姜黄素、5-FU单独或联合应用对HT-29细胞的生长抑制作用;流式细胞仪和荧光显微镜检测对HT-29细胞凋亡的影响;并且应用Western blotting分析联合应用后对于COX-2蛋白表达的影响。结果:姜黄素和5-FU可明显抑制HT-29细胞的生长,并呈剂量依赖性,半数生长抑制率(IC50)分别为(15.9±1.96)μmol/L和(17.3±1.85)μmol/L;当二者联合应用时,在较高的作用水平可以定量地观察到对HT-29细胞的协同抑制作用。流式细胞仪结果表明,单独应用姜黄素以及联合应用姜黄素与5-FU均能使HT-29细胞在加药后24和48 h出现凋亡峰,但联合用药所诱导的细胞凋亡比例较单独应用姜黄素低;荧光显微镜观察的结果与流式细胞仪的结果相同;免疫印迹实验结果显示两种药物联合作用可以使COX-2的表达降低约75%。结论:姜黄素与5-FU联合应用可协同抑制大肠癌细胞的增殖并协同抑制HT-29细胞内COX-2的表达。     

鲑鱼鱼白DNA对老龄BALB/c小鼠胸腺的形态学影响

〔目的〕探讨外源核酸对老龄小鼠胸腺的形态学影响。〔方法〕10月龄雌性BALB/c小鼠按体重随机分成3组,在普通饲料饲喂的基础上,各组分别每日灌胃0.1mol/L的柠檬酸钠缓冲液（缓冲液对照组）和166.67mg·kg～（-1）·b·w·d～（-1）、333.3mg·kg～（-1）·b·w·d～（-1）的鲑鱼鱼白DNA低、高剂量核酸补充组）。饲喂5周后常规处死实验动物。每只动物常规取胸腺,测量胸腺脏器指数;每个胸腺单独用蜡块包埋,均选择最大切面切片,每张切片随机观察10个视野。将镜下观察的图像输人Image-pro　Plus专业图像分析系统（4.0版）进行细胞计数和皮质厚度测量,SAS统计软件分析所得数据。〔结果〕不同剂量鲑鱼鱼白DNA充组小鼠的体重、胸腺重量和胸腺指数与对照组相比无差异显著性,P>0.05;高剂量鲑鱼鱼白DNA补充组小鼠的胸腺皮质细胞数量与对照组相比显著增多,P<001,髓质细胞数与对照组相比也明显增多,P<0.05;低剂量鲑鱼鱼白DNA补充组的胸腺皮、髓质细胞数量与对照组相比差异不显著,P>0.05;不同剂量鲑鱼鱼白DNA补充组的胸腺皮质平均厚度均显著高于对照组,高剂量组的差异更为显著（P<0.01）。〔结论〕鲑鱼鱼白DNA有可能缓解老龄小鼠胸腺的退化萎缩。     

过表达ERCC1蛋白细胞系的建立

[目的]建立过表达ERCC1蛋白的细胞系，为遗传毒性化合物的研究提供模型细胞系，并有可能为具有DNA加合作用化合物提供新的毒理学筛选方法。[方法]应用PCR和DNA重组技术将核苷酸切除修复交叉互补组1(Excision repair cross complementation groupl，ERCCl)基因与pT7Blue载体相连接，然后构建真核细胞重组表达质粒pcDNA3．1／Zeo( )-ERCC1，并导入293细胞。经Zeocin抗性筛选后获得转染ERCC1基因的细胞克隆。细胞增殖后以Western-blot检测目的蛋白的表达。[结果]获得稳定转染ERCC1基因的细胞系，并在细胞中检测出有ERCC1蛋白的过表达．[结论]用基因转染法成功建立了过袁达ERCC1蛋白的ERCC1-293细胞系。     

姜黄素诱导人结肠癌细胞凋亡作用

目的探讨姜黄素对人的结肠癌细胞系(HT-29)体外增殖及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定姜黄素在不同浓度对HT-29细胞的抑制作用;利用流式分光光度技术、荧光显微镜技术和电镜技术,观察姜黄素对HT-29细胞诱发凋亡及细胞周期的变化。结果姜黄素可明显抑制HT-29细胞的生长,其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系,半数抑制浓度为(15.9±1.96)μmol/L。流式细胞分析仪结果表明,姜黄素能使HT-29在加药后24h出现凋亡峰;荧光显微镜下可见姜黄素处理组织细胞核呈现深染、致密的颗粒块状荧光。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡,出现核边集及染色质浓缩成块状。结论姜黄素可抑制大肠癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

非蛋白巯基对顺铂在HEK293细胞内累积量的影响

谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰-半胱氨酸(NAC)等非蛋白巯基(NPSH)化合物因含巯基(-SH)而具有亲核和还原特性，有参与解毒或保护上皮细胞免受氧化剂和其他活性亲电物的损伤。肝脏是血浆GSH的主要来源，肾小管上皮细胞主要从血浆摄取现成的GSH，也可通过摄取半胱氨酸或NAC自行合成GSH。肾毒物被摄取进入细胞内或在细胞外(即血浆)均可与NPSH相遇，或被解毒，或形成加合物而影响肾毒物的吸收。