先天性支气管狭窄1例报告

1病例资料 患儿男性,3个月,因咳喘2d入院。2d前因受凉出现咳喘及呼吸急促,小发热,吃奶差,在我院门诊子“头孢硫咪,炎琥宁”输注2d症状不缓解,门诊拟诊“婴幼儿哮喘”,遂收住院。否认家族哮喘病史。患儿系G1P1,足月剖宫产娩出,无窒息,生后即哭。生后40d及2个月龄时因咳喘伴喉中痰鸣拟诊为肺炎在我院治疗。     

原发性胆汁性胆管炎与肝硬化患者临床指标差异分析*

目的 探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)与原发性胆汁性肝硬化患者临床指标的差异。方法 2015年5月～2021年9月我院诊治的PBC患者164例,其中胆管炎组70例,肝硬化组94例。收集临床指标,应用Logistic回归分析影响PBC患者疾病进展的相关危险因素。结果 本组肝硬化患者年龄为(58.6±13.0)岁,显著大于胆管炎组【(53.4±11.1)岁,P＜0.05】;血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素分别为49.7(27.5,80.2) U/L、62.6(44.9,114.7) U/L、156.8(126.5,230.5) U/L和31.5(17.6,88.4) μmol/L,显著高于胆管炎组【分别为39.3(23.9,66.0) U/L、36.4(26.8,63.4) U/L、126.5(94.8,187.3) U/L和14.6(10.0,24.3)μmol/L,P＜0.05】;肝硬化组血清抗核抗体和抗gp210抗体阳性率分别为91.5%和43.6%,显著高于胆管炎组的80.0%和25.7%(P＜0.05);肝硬化组血清IgG、IgA和IgM水平分别为17.0(13.2,20.9) g/L、3.5(2.5,4.8) g/L和2.9(2.0,4.8) g/L,显著高于胆管炎组【分别为14.2(12.7,15.8) g/L、2.6(2.0,3.4) g/L和1.8(1.2,3.3) g/L,P＜0.05】,而补体C3和C4水平分别为0.7(0.5,0.9) g/L和0.1(0.1,0.2) g/L,显著低于胆管炎组【分别为1.2(1.1,1.4) g/L和0.2(0.2,0.3) g/L,P＜0.05】;多因素Logistic回归分析发现IgM增高和补体C4降低是PBC进展至肝硬化的独立危险因素(P＜0.05)。结论 原发性胆汁性胆管炎患者进展至肝硬化阶段有一些显著的临床指标变化,血清IgM水平升高和补体C4水平降低有一定的提示作用。     

人EFTUD2基因靶向小分子化合物筛选细胞模型的建立*

目的 体外建立一个以荧光素酶为报告基因,靶向人EFTUD2基因的化合物筛选细胞模型。方法 应用限制性内切酶双酶切LV6载体,将人EFTUD2pro-0.5kb启动子和荧光素酶报告基因的融合片段重组入LV6慢病毒载体。以重组慢病毒感染HepG2细胞,采用嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得Epro-LUC-HepG2细胞株。利用荧光素酶报告基因系统挑选最佳单克隆细胞株并扩大培养。结果 准确构建了LV6-Epro0.5-LUC慢病毒载体,并成功筛选出可稳定表达荧光素酶的Epro-LUC-HepG2单克隆细胞株。根据荧光素酶报告基因检测结果,挑选了最佳克隆株细胞,被命名为Epro-LUC-HepG2细胞。结论 我们成功构建了以人EFTUD2基因为靶点的Epro-LUC-HepG2细胞化合物筛选模型,有助于后续筛选新型靶向免疫调节药物。     

非酒精性脂肪性肝病儿童血清TIMP-1和TIMP-2检测及临床意义

目的：了解非酒精性脂肪性肝病患儿基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP）-1和TIMP-2的水平及价值。方法根据诊断标准将105例肥胖儿童分为单纯性肥胖（n=44）、单纯性非酒精性脂肪肝（SNAFL,n=25）和非酒精性脂肪肝炎（NASH,n=36）3组,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定血清TIMP-1、TIMP-2,全自动酶法测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和γ-谷氨酸转肽酶(γ-GT)。结果随着单纯性肥胖向SNAFL和NASH发展,TIMP-1和γ-GT水平逐步升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 血清TIMP-1和TIMP-2指标均可不同程度地反映肝脏的纤维化程度,其中以TIMP-1更为可靠、有效。［中国当代儿科杂志,2010,12（6）：455-458］     

慢性乙型肝炎患者肝组织基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达及其意义

目的：分析慢性乙型肝炎患者血清和肝组织基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）表达水平与肝纤维化分期的相关性。方法分别采用免疫组化法和双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者肝组织和血清 TIMP-1表达水平,分析两者相关性;对159例慢性乙型肝炎患者行肝活检病理学检查,以组织学活动指数（HAI）予以分级（G）和分期（S）,分析慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平与 HAI 分级和纤维化分期的相关性。结果慢性乙型肝炎患者肝组织 TIMP-1表达水平与其血清水平呈显著性正相关（r=0.9521,P＜0.01）;不同肝纤维化分期（S1～S4）慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平差异显著（P＜0.05）,且血清 TIMP-1水平与肝纤维化分期呈正相关（r=0.704, P＜0.01）,但不同炎症分级的慢性乙型肝炎患者血清 TIMP-1水平差异无显著性。结论血清 TIMP-1水平可以较好地反应肝脏纤维化程度,且不受肝组织炎症分级的影响,有望被用于肝组织纤维化程度的临床无创评估。     

HGF及其受体c-met在肝衰竭与部分肝切除模型中表达差异性研究

目的研究HGF及其受体c-met在肝衰竭和部分肝切除两种动物模型肝组织的表达差异。方法分别采用D-GalN/LPS腹腔注射和70%肝脏外科切除术建立肝衰竭和部分肝切除模型,同时以健康大鼠作为对照组。采用ELISA法检测血清HGF水平,采用Real-time PCR和Western-blot法分别检测肝组织c-met基因和蛋白的表达水平。结果与对照组比,部分肝切除模型大鼠血清HGF及其受体c-met表达水平均有明显升高（P〈0.01）,而在肝衰竭模型大鼠血清HGF水平虽有升高,但c-met蛋白表达水平却明显降低（P〈0.01）。结论肝细胞c-met表达水平的降低是D-GalN/LPS诱导肝衰竭大鼠肝细胞再生障碍的主要原因。     

c-met慢病毒载体的构建及稳定转染骨髓间充质干细胞

构建肝细胞生长因子受体(c-met)慢病毒载体,并稳定转染骨髓间充质干细胞(BMSCs).将c-met连接到慢病毒载体GV358上,重组获得慢病毒载体GV358-c-met.再将该重组体与病毒辅助质粒共转染293T细胞,包装生产慢病毒并测定其滴度为2×108 TU/ml.将此慢病毒转染BMSCs,经嘌呤霉素筛药后,荧光显微镜下检测荧光阳性率达100%,且Western blot证实该细胞株表达c-met蛋白.成功构建了c-met慢病毒载体,并建立了稳定表达c-met的BMSCs.     

复方甘草酸苷片治疗儿童非酒精性脂肪性肝病疗效观察

目的探讨复方甘草酸苷片治疗儿童非酒精性脂肪性肝病的临床疗效。方法将2014年6月至2016年5月就诊的65例非酒精性脂肪性肝病患儿随机分为复方甘草酸苷片治疗组(n=33)和护肝片对照治疗组(n=32),分别予以口服复方甘草酸苷片和护肝片治疗24周。两组患儿均于治疗前后检测血清丙氨酶氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层黏连蛋白(LN)水平。结果复方甘草酸苷片组和护肝片组治疗总有效率分别为85%和50%,两组比较差异有统计学意义(P0.05);两组患儿血清ALT水平治疗后较治疗前均显著下降(P0.05),但复方甘草酸苷片组较护肝片组下降更明显(P0.01);复方甘草酸苷片组治疗后血清γ-GT水平以及肝纤维化四项指标(HA、PCⅢ、CⅣ、LN)水平较治疗前均得到明显改善(P0.05),而护肝片组上述各指标水平较治疗前均无显著变化(P0.05)。结论复方甘草酸苷片可有效改善非酒精性脂肪性肝病患儿的肝功能,并能降低肝纤维化血清学指标水平;其疗效优于护肝片治疗。     

小鼠肿瘤坏死因子受体1基因的克隆及其与绿色荧光蛋白的融合表达

目的：构建小鼠肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）和绿色荧光蛋白（GFP）的融合基因真核表达质粒，然后在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达，为TNFR1的基因干预研究提供简便的判定手段。方法：从小鼠肝组织提取总RNA，RT-PCR扩增出TNFR1基因的cDNA片段，将目的片段克隆至pMD18-T载体。酶切和测序鉴定，然后将目的片段酶切回收后插到GFP表达载体pEGFP-N2中GFP基因序列的上游，构建TNFR1-EGFP融合基因真核表达载体pEGFP-TNFR1，将该重组质粒转染到CHO细胞后24—48h，用免疫组化技术检测TNFR1的表达情况。同时荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果：扩增出了长约1360bp的基因片段，并将其克隆至pMD18-T载体，酶切和测序鉴定无误；将pMD-TNFR1中TNFR1基因亚克隆至pEGFP-N2载体，酶切鉴定无误；重组质粒pEGFP-TNFR1转染CHO细胞后，免疫组化染色可见细胞有阳性棕染，同时荧光显微镜下也可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论：成功构建了小鼠TNFR1-EGFP融合基因真核表达质粒；重组质粒可在CHO细胞中表达出TNFR1-EGFP融合蛋白，为进一步的TNFR1基因干扰研究奠定了基础。