风疹病毒复合多表位肽的构建、表达、纯化及其诊断效能的初步评价

目的采用基因工程技术构建风疹病毒复合多表位肽,探讨其对风疹病毒感染的血清学诊断价值。方法根据风疹病毒主要抗原分子E1、E2,设计并构建风疹病毒复合多表位肽的重组表达载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达,并用Ni2+螯合柱亲和纯化获得复合多表位肽;经western blot鉴定其对风疹病毒感染后的Ig M阳性血清的免疫反应性;建立基于风疹病毒复合多表位肽的Ig M-ELISA检测方法,用于风疹病毒感染患者中血清Ig M抗体的检测。结果成功构建风疹病毒复合多表位肽,在大肠埃希菌Rosetta中获得了高效表达;纯化后的风疹病毒复合多表位肽经western blot分析显示,复合多表位肽对风疹病毒Ig M阳性血清具有较好的免疫反应性;Ig M-ELISA法检测结果表明,重组的复合多表位肽能够检测出风疹病毒感染后Ig M阳性血清,与Ig M阴性血清不发生反应。结论制备的风疹病毒复合多表位肽具有良好的抗原性,可用于风疹病毒感染患者Ig M抗体的检测,提高风疹病毒感染的诊断效能。     

基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法的建立

目的建立一种基于荧光素酶报告基因的细菌外膜囊泡标记方法。方法利用细菌外膜囊泡表面携带高丰度细菌外膜蛋白A(OmpA)的特点,构建OmpA-NanoLuc荧光素酶融合蛋白,根据荧光素酶活性评估样品中的细菌外膜囊泡数量。结果成功构建OmpA-NanoLuc融合蛋白表达载体,受试菌株在表达该融合蛋白后所分泌的外膜囊泡具有稳定的荧光素酶活性。可通过检测荧光素酶活性的方式对细菌外膜囊泡进行半定量检测。结论建立了一种基于荧光素酶标记的细菌外膜囊泡半定量检测方法,可用于评估特定菌株的细胞外膜囊泡分泌水平。     

基于PCR-化学发光的HBV/HCV/HIV并行核酸检测试剂盒的评价

目的：评价一种基于PCR与化学发光技术并行检测血液中HBV/HCV/HIV的试剂盒。方法：使用自制的磁珠及试剂提取病毒核酸,利用多重PCR、特异性探针及化学发光法检测目标病毒核酸的信息,评价试剂盒的灵敏度、特异性及稳定性等。结果：本试剂盒灵敏度高,特异性和稳定性好,能够同时检测出HBV、HCV和HIV的极限值分别为2.0、3.7和166.6 U/mL,对于可能产生干扰的10种病毒和2种细菌的病原体无交叉反应,有效期约12个月。在健康献血者10 422例酶免疫分析法合格标本中,筛查出HBV DNA核酸阳性标本12例和HCV RNA核酸阳性标本2例,与国家批准的血液筛查核酸试剂平行检测结果一致。结论：该试剂盒快速、准确、高灵敏、低成本,适用于基因诊断及流行病学调查。