聚γ-谷氨酸高产突变株的选育及摇瓶发酵条件

对地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)进行亚硝基胍和60Co诱变,获得一株γ PGA的高产菌株C9.γ PGA质量浓度由9.44g/L提高到19.76g/L,提高了109%.突变株传代10次,质量浓度保持基本稳定.通过正交试验和单因素试验对发酵培养基及发酵条件进行了优化.当发酵培养基中含柠檬酸12g/L、甘油80g/L、L 谷氨酸23g/L、氯化铵7g/L,pH7.0,装液量为50mL/250mL三角瓶,接种体积分数为5%时,37℃摇瓶发酵72h,γ PGA达到23.32g/L.     

谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticilliummobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥,制得粗酶粉的酶活约为1033U/g.对粗酶研究发现,该酶的最适反应温度为52℃,最适pH为6.0;粗酶的pH稳定范围在4～8,温度稳定范围在20～40℃,离子强度对该酶的活性稍有影响.粗酶经CM 纤维素层析和SephadexG 75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度,得到较弱的单一区带.其中,CM 纤维素层析的纯化倍数为4.5,收率质量分数约为78.8%;凝胶过滤层析纯化倍数为1.11,收率质量分数为50%;用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092.     

高左旋多巴合成活性的重组大肠杆菌培养条件优化

对重组大肠杆菌进行培养条件的研究,得到细胞合成L-DOPA最佳培养条件为L-tyrosine0.2%、KH     

双抗体夹心ELISA定量检测IL-2-HSA融合蛋白

以抗人IL-2多克隆抗体为包被抗体,以IL-2-HSA融合蛋白为夹心抗原,以辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定完整的IL-2-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度分别为为2 μg/mL和0.5 μg/mL,方法的线性检测范围39.06~1250 ng/mL,标准曲线回归方程为y=0.442 9 x-1.143 3,r=0.996 6,灵敏度可达10.25 ng/mL,批内、批间变异系数分别为6.40%和7.81%,发酵上清液中回收率为98.13%~102.94 %,与IL-2、HSA基本无交叉反应,健全性分析表明发酵液及小鼠血清组分及稀释倍数对该方法无影响。该方法可用于该融合蛋白的发酵过程优化、分离纯化工艺、后期药动学、临床研究等的定量检测。     

黄孢原毛平革菌合成锰过氧化物酶的工艺

研究了多种营养条件及培养条件对黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium )WX2 13合成锰过氧化物酶的影响 .当培养基中葡萄糖质量浓度为 10 g/L ,酒石酸铵质量浓度为0 .2 g/L,吐温 80质量浓度为 1g/L ,MnSO4 ·H2 O为 0 .14g/L ,采用苯二甲酸缓冲液 ,最终pH 4 .5 ,2 5 0mL的三角瓶装液量 90mL ,接种量为 1.2× 10 6mL- 1时所获酶活较高 .经条件优化后锰过氧化物酶的活力达到 5 5 9U/L ,比未优化前提高了 36% .加入染料培养 ,发现该酶对所选用的偶氮染料、三苯甲烷类染料、杂环类染料均有较好的脱色效果     

在大肠杆菌中融合表达重组羧肽酶抑制剂

利用PCR技术扩增得到编码土豆羧肽酶抑制剂（carboxypeptidase inhibitor from potato，CPI）活性多肽基因，克隆于表达载体pGEX-4T-1的多克隆位点中，得到重组质粒pGCPI，测序后将重组质粒转化到受体菌Escherichia coli BL21中。重组菌经IPTG诱导表迭，超声波破菌后，通过谷胱甘肽sepheroseFF亲和层析柱一步纯化得到融合蛋白，纯度大于979，6。融合蛋白经凝血酶切割并分离除去谷胱甘肽-S-转移酶后得到纯度大于98％的重组CPI，ELISA鉴定产物具有免疫原性，体外检测表明其促进纤溶的生物功能与天然CPI无明显差异。     

人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达

目的：构建编码人白介素-2／人清白蛋白的重组表达质粒pPIH，在毕赤酵母（Pichia pastria）中进行表达，获得具有白介素-2（IL-2）活性的融合蛋白。方法：通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA，再通过重叠PCR方法，将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来，克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19／IH。用Eco RI和NotI双酶切pMD19／IH和pPIC9K两种质粒，通过琼脂糖凝胶电泳分离，试剂盒纯化，将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒，利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH；CTLL-2／MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果：成功构建了人白介素-2，人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH，融合蛋白得到了较理想的表达；重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U／mL的生物学活性。结论：成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2，血清白蛋白融合蛋白，该研究结果未见文献报道。     

护理本科人文素质教育的现状及对策

随着我国社会经济发展及人口年龄、知识结构的变化,人们的健康观念及对健康的需求也发生了根本的改变.尤其是近年来护理模式的转变,促使护理教育必须与其同步发展,对服务对象实施生理、心理、社会、文化、环境等方面的整体护理已成为新世纪护理发展的必然要求.     

护理本科人文素质教育的现状及对策

随着我国社会经济发展及人口年龄、知识结构的变化，人们的健康观念及对健康的需求也发生了根本的改变。尤其是近年来护理模式的转变，促使护理教育必须与其同步发展，对服务对象实施生理、心理、社会、文化、环境等方面的整体护理已成为新世纪护理发展的必然要求。现代护理教育理念认为现代护理学人才必须兼备精通的专业知识和广博的人文社科知识。针对这一要求，笔者分析了护理本科专业人文素质教育的现状，并针对现状提出了强化人文素质教育的对策，现报道如下。     

EDTA对木质素过氧化物酶在染料脱色中的影响

在反应液中含 2mmol/LEDTA时 ,2 4h后染料甲基橙的脱色率比未加EDTA的下降约70 % .添加 2mmol/LEDTA明显地抑制了木质素过氧化物酶 (LiP)对多种染料的脱色 .酶动力学研究表明 :EDTA对LiP的抑制属非竞争性抑制 .添加比EDTA稍大量的Zn2 + 能解除EDTA对LiP的抑制 ,其他多种金属离子也能减轻EDTA的抑制作用 .