喹诺酮抗性决定区域位点突变诱导解脲脲原体耐喹诺酮类药物的系统评价

目的系统性评价解脲脲原体(Uu)对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制。方法信息检索Pub Med、Web of Science、万方数据库和中国知网等数据库,检索时限均从2000年至2014年5月,查找研究Uu对喹诺酮类耐药机制的文献,按照纳入与排除标准筛选文献后,进行系统评价。结果共纳入14篇文献,合计176株耐喹诺酮类Uu。统计分析结果显示,Gyr A、Gyr B、Par C和Par E基因的突变率分别为65.3%、0.0%、62.8%和9.0%,共报道23种氨基酸改变。结论 Uu对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制以Gyr A、Par C基因或Gyr A/Par C双基因突变导致相应氨基酸改变为主,Par E介导的耐药较为少见,Gyr B基因突变尚未发现。     

氯沙坦合成工艺改造

以2-正丁基-4-氯-1H咪唑-5-甲酰基和对溴苄溴为原料,合成氯沙坦。其间经过烷基化,得到重要中间体2-正丁基-4-氯-1-[4-溴-苯甲基]-1H咪唑-5-甲酰基,再经取代的硼酸偶联、脱保护、硼氢化钠还原得到氯沙坦。此合成路线较为简便。     

GE Signa3.0T MRI故障分析

故障现象：间歇性自动预扫描失败,扫描停止。查看viewlog发现报错如下：Auto Prescan failed,possible data acquisitionerror.Try again or use manual prescan。故障分析：根据故障现象,采取了以下步骤。当磁体室屏蔽门打开时,自动预扫描时而失败,时而正常。     

Sirtuin-衰老与寿命的调控因子

哺乳动物sirtuin家族由7个成员组成，自SIRT1～SIRT7，其中SIRT1蛋白在高度保守核心结构域上与酵母Sir2蛋白有最高的序列相似性。Sir2及其同源类似物在模式生物中已经成为调控衰老和寿命的重要因子，Sir2还参与热量限制引起的抗衰老和延寿效应。目前哺乳动物sirtuin的研究主要集中在SIRT1蛋白分子上。哺乳动物sirtuin参与调控多种生物学效应，这些效应在衰老过程中发挥着重要的作用，为我们提供了一个全新的分子框架，利用这些结果可以开发针对衰老相关疾病的防治药物和方法，例如肥胖、糖尿病、心血管疾病及神经退行性疾病。     

分泌性HIV-1 Nef-EGFP融合蛋白表达载体的构建与鉴定

目的:构建含有人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)负性调节因子(nega-tive regulation factor,Nef)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的重组融合蛋白分泌性表达载体,并检测该融合蛋白在真核细胞中的表达及其在培养上清中分泌情况,为进一步研究Nef功能奠定基础。方法:利用PCR扩增出HIV-1 Nef和EGFP基因,插入到分泌性表达载体pSecTag2B中。构建的pSecTag2B-Nef-EGFP融合蛋白表达质粒,转染293T细胞,荧光显微镜下观测细胞中Nef-EGFP融合蛋白的表达。收集细胞及上清液,蛋白质印迹和ELISA法分别检测Nef-EGFP融合蛋白的表达及其分泌。结果:限制性内切酶酶切鉴定和核酸序列测定证实,成功构建了含有Nef-EGFP基因的分泌性表达载体,该质粒转染293T细胞后,蛋白质印迹法能够检测到Nef-EGFP融合蛋白的表达条带,ELISA法检测上清液中目的蛋白分泌量为1.7 ng/ml。结论:成功构建含有Nef-EGFP的融合蛋白表达质粒,融合蛋白Nef-EGFP在293T细胞中获得表达,并能分泌到胞外。     

KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备由卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)编码的病毒FLICE抑制蛋白(viral FLICE inhibitory protein,vFLIP)的多克隆抗体,通过vFLIP重组蛋白对该抗体特异性进行鉴定,并将此抗体初步应用于天然病毒vFLIP蛋白表达的检测。方法:对vFLIP蛋白抗原表位进行预测分析,设计并合成3条多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗vFLIP的多抗;以pCDH-vFLIP质粒为模板扩增vFLIP片段,插入到真核表达载体pEF-MCS-Flag-IRES/Puro中,构建pEF-vFLIP表达载体,利用脂质体将其转染HEK293T细胞,并在其中表达vFLIP。采用ELISA、蛋白质印迹法鉴定vFLIP多克隆抗体的效价及特异性,将该抗体用于天然病毒vFLIP的检测。结果:经限制性内切酶鉴定和核酸序列测定证实成功构建了重组质粒pEF-vFLIP,Flag抗体可以特异性识别该质粒在HEK293T和EA.hy926细胞内表达的vFLIP-flag融合蛋白。进一步的ELISA结果显示,制备的兔抗vFLIP多克隆抗体效价为1∶11 000以上。该抗体不但与HEK293T和EA.hy926细胞内表达的重组vFLIP-flag融合蛋白反应,而且能够特异性识别PEL细胞中天然的病毒vFLIP蛋白。结论:构建了含vFLIP基因的重组真核表达载体;采用人工合成肽作为半抗原制备的抗KSHV vFLIP多抗,可以成功地检测重组vFLIP蛋白和天然病毒蛋白。     

股前外侧皮瓣在断肢再植术中的应用

目的 探讨股前外侧皮瓣在合并软组织及血管缺损断肢再植术中的疗效.方法 应用股前外侧皮瓣游离移植急诊修复各种外伤原因所致肢体离断伤伴血管及皮肤软组织大面积缺损10例.结果 临床应用10例,除3例皮瓣远端小部分表皮坏死,经二期植皮愈合外,其余皮瓣及再植肢体均完全成活,术后经2～10个月随访,效果满意.结论 股前外侧皮瓣血管解剖位置稳定,血管口径较粗,可游离移植修复皮肤缺损及桥接吻合离断肢体缺损的血管,在伴有血管及皮肤软组织缺损断肢再植术中,具有较好的疗效.     

南京及周边地区糖化血红蛋白诊断糖尿病的截点值

目的研究南京及其周边地区糖化血红蛋白(HbA1c)应用于糖尿病及糖调节受损(IGR)筛查与诊断的可行性,并预测其最佳的诊断截点值。方法将该院就诊的糖尿病患者及糖尿病高危人群共2 767例作为研究对象,行葡萄糖耐量试验,用空腹血糖及糖耐量试验2h血糖进行分组,检测HbA1c,并利用受试者工作特征曲线寻找诊断最佳截点值。结果南京及其周边地区健康、糖尿病及IGR人群的HbA1c比较,差异均有统计学意义(P0.05),且随着病情的严重程度,HbA1c结果呈上升趋势。HbA1c诊断糖尿病的最佳截点值为6.45%,而诊断IGR的最佳截点值为6.05%。结论南京及其周边地区可以尝试采用6.05%与6.45%分别作为HbA1c诊断IGR与糖尿病的截点值。     

500例腰椎间盘突出症发病因素分析

腰椎间盘突出症（以下简称腰突症）是引起腰腿痛的常见原因之一，是骨伤科临床常见疾病。本文通过总结500例腰突症发病情况，探讨引起腰突症的主要因素。     

IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:研究IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响,为进一步研究IL-16功能奠定基础。方法:IL-16腺病毒载体转染MT2细胞后,不同时间收获细胞,通过MTT、流式细胞术(FCM)、测定线粒体膜电位和单细胞凝胶电泳等方法,证实MT2细胞增殖抑制和凋亡。结果:用MTT法绘制生长曲线,观察到IL-16腺病毒载体转染的MT2细胞增殖受到明显抑制;DNA片段分析在转染6h后出现凋亡片段;进一步用FCM检测细胞周期停滞于G1期,并且出现细胞凋亡;单细胞凝胶电泳发现细胞12h后有明显凋亡DNA拖尾形成;IL-16对细胞线粒体膜电位的影响24h内逐渐增强,预示细胞凋亡;免疫荧光发现12h自噬相关蛋白LC3,即可在细胞膜上表达,自噬已经开始出现。结论:重组人IL-16腺病毒载体转染MT2细胞,24h内即可诱导MT2细胞发生细胞增殖抑制并且出现凋亡,为进一步研究IL-16的功能奠定了基础。