基因atm与慢性淋巴细胞白血病

共济失调毛细血管扩张突变基因(atm)为肿瘤抑制基因,位于人类染色体的11q22-23,主要参与DNA损伤识别和修复,并在DNA双链断裂诱导的信号级联转导通路中起到枢纽作用。慢性淋巴细胞白血病(CLL)可出现高频率的atm基因杂合性缺失和核苷酸突变,并与其发病及侵袭性病程有关。本文将对atm基因的特点、作用机制及其在慢性淋巴细胞白血病中作用的研究进展作一综述。     

实时定量PCR检测白血病相关miRNA方法的建立

本研究建立实时定量PCR（RQ-PCR）技术检测白血病相关miRNA的方法，探讨此方法在定量检测miRNA中的应用价值。通过提取82例慢性淋巴细胞白血病（CLL）、70例急性白血病（AL）患者骨髓或外周血标本总RNA，以cDNA为模板进行10倍梯度系列稀释，分别作miRNA及内参U6RNA的标准曲线并计算扩增效率；运用ABF7300定量PCR仪进行定量检测；采用SYBRGreen荧光染料法、以U6RNA作为内参照、循环阈值（ct）比较法进行miRNA表达相对定量分析，以检测CLL患者miR-15a、miR-16-1、miR-29b、miR-181b及AL患者miR．128．1、miR-223、let-7b、miR-155、miR-181a的表达。方法学考核参数包括特异性、线性范围、精密度和重复性。结果表明：RQ—PCR检测miRNA仅需10—50ng总RNA样本，检测下限为0．05ng，miRNA及u6的Ct值均在15—30之间，10倍系列稀释法制作的标准曲线呈现良好的线性关系（R^2〉0．980），扩增效率均在0．9以上，溶解曲线均为单峰，PCR产物经琼脂糖电泳均显示较亮的目的条带，批内差和批间差分别小于4．8％和6．3％。结论：RQ-PCR技术检测白血病相关miRNA敏感、快速，高通量，节约成本，定量范围宽，极大的方便了对miRNA的定量研究。     

8例Richter综合征临床及生物学特征分析

为了探讨Richter综合征（RS）临床及生物学特征及其预后因素,回顾性分析8例RS患者。利用血清学检测、多参数流式细胞术（FCM）、常规细胞遗传学（CC）、间期荧光原位杂交（FISH）技术、PCR联合DNA序列测定,分别检测患者血清乳酸脱氢酶（LDH）、β2-微球蛋白（β2-MG）、胸苷激酶1（TK1）、血清铁蛋白（SF）和糖链抗原-125（CA-125）,CD38和ZAP-70,染色体核型,ATM和p53基因缺失、＋12异常,以及免疫球蛋白重链可变区（IgVH）突变。结果显示：8例RS患者中7例转化为弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）,1例转化为霍奇金淋巴瘤（HL）。7例LDH高于正常值,4例β2-MG高于正常值,7例SF高于正常值,4例CA-125高于正常值,1例TK1高于正常值。4例患者ZAP-70阳性,7例CD38阳性,5例IgVH无突变,4例有染色体复杂核型,1例有＋12,1例有p53缺失。按就诊时BinetA＋B期与BinetC期将患者分为两组,BinetA＋B组从诊断至转化的平均时间为98.5个月,BinetC组为38.3个月,两组间有显著性差异（p=0.021）。平均总生存期（OS）在BinetA＋B组及BinetC组之间分别是123.8个月及49.8个月,两组间有显著性差异（p=0.049）,转化后平均生存时间分别是34.5个月及10.3个月。结论：RS患者血清LDH、β2-MG和SF水平高,ZAP-70和CD38高表达、IgVH无突变发生率高,临床分期可能是RS转化的风险及预后因素。     

实时定量逆转录PCR检测慢性淋巴细胞白血病puma基因mRNA的表达及其临床意义

Puma为一种凋亡调控因子。本研究探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者p53上调puma mRNA的表达情况,并探索其在评估CLL预后中的意义。采用基于SYBR GreenI荧光染料法的实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)方法检测100例CLL患者及11名健康对照者外周血标本中puma基因的表达,以β-actin为内参照,用2(-△Ct)方法计算puma的相对定量值,组间分析采用秩和检验。结果显示,qRT-PCR标准曲线的R2均≥0.990,批内差及批间差变异系数(CV)均小于5%,灵敏度可达102copies/μgRNA。100例CLL患者puma基因表达水平中位数为1.038×10-3(4.106×10-4-2.806×10-3);11名健康对照者puma表达水平中位数为1.220×10-3(7.233×10-4-1.405×10-3),二者无显著性差异(U=544.5,p=0.957)。临床分期较早(Binet分期A期)的患者puma表达水平明显高于临床分期较晚(Binet分期B期、C期)的患者(p0.001);具有CD38表达阳性、ZAP-70蛋白表达阳性、血清乳酸脱氢酶水平增高、血清β2-微球蛋白水平增高的患者,其puma基因表达水平均明显低于无以上不良预后因素的患者,差异显著(p值分别为0.002,0.012,0.009和0.046);FISH检测显示存在12号染色体三体和14q32易位的患者puma表达水平明显低于无以上分子遗传学异常者,其差异显著(p值分别为0.003和0.045)。结论:qRT-PCR方法检测puma表达灵敏可靠,puma表达水平与CLL多种预后因素存在相关性,在评估CLL预后中具有重要价值。     

慢性淋巴细胞白血病8号染色体三体异常的研究

论 +8异常在CLL群体中少见,其与预后关系暂不明确.     

磷酸二酯酶7B在套细胞淋巴瘤患者中的表达及临床意义

为了研究磷酸二酯酶(PDE)7B在套细胞淋巴瘤(MCL)患者中的表达及临床意义,应用实时定量PCR(QPCR)技术检测20例初治的有骨髓侵犯MCL患者骨髓和20例正常人外周血单个核细胞中pde7b的表达水平,并分析其与MCL临床预后指标的关系。结果表明:20例MCL患者pde7b表达水平中位数为8.7×10-4(4×10-5-6.9×10-3),明显高于正常人群0.5×10-4(0.18×10-4-1.7×10-4)(p=0.001);pde7b与性别、年龄、白细胞计数、乳酸脱氢酶水平、CD38表达和免疫球蛋白重链基因突变均无明显相关,而与细胞遗传学、β2微球蛋白、ZAP-70表达有明显相关。结论:pde7b基因在MCL中表达明显高于正常人群,并与细胞遗传学关系密切,可能成为MCL新的预后指标,具有重要的临床意义。     

象牙屑促进伤口愈合机理的初步研究

目的 研究象牙屑及其不同组分促伤口愈合的分子机制.方法 象牙屑经脱钙、分级分离得3混合物,命名为MW14、MWS-14和MW5.通过2种动物创伤模型检验象牙屑对伤口愈合的功效;通过氯胺T法、明胶酶谱分析、qRT-PCR、ELISA和Western blotting等研究象牙屑及其不同组分促伤口愈合的机制.结果 象牙屑可促进伤口愈合,其总水提物（WE）和MW5组分能显著激活PI3 K/Akt和JNK/ERK信号通路,促成纤维细胞生长和胶原积累,提高MMP-2/-9活性和MMP-1/-13表达,抑制TIMP-1/-2表达,促进TGF-β、EGF、VEGF、CTGF、bFGF及TNF-α释放.结论 象牙屑有效成分可能包括2部分：MW14和MW5;象牙屑促伤口愈合依赖于PI3K/Akt和JNK/ERK MAPK通路.     

miR-181b在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达及功能研究

目的:探讨miR-181b在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中表达及其功能。方法:选择2010年3月到2012年3月来我院及常州市第二人民医院进行检查和治疗的124例DLBCL患者的淋巴组织样本,作为DLBCL组;另选择64例经检查确定为非淋巴瘤患者的健康淋巴组织,作为对照组。检测两组淋巴样本中miR-181b的表达水平,比较不同临床特征的淋巴瘤患者淋巴组织中miR-181b的表达水平,比较不同组织miR-181b表达水平的淋巴瘤患者的生存情况。结果:DLBCL患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量显著高于健康淋巴组织(P0.05)。Ann Arbor分期越高的患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量越高(P0.05),而IPI评分越高的患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量也越高(P0.05)。miR-181b低表达组患者5年生存率显著高于高表达组患者(P0.05)。结论:miR-181b在不同临床分期和预后的DLBCL患者淋巴组织中表达存在差异,它有可能成为未来对DLBCL诊断和预后监测的有效指标。     

抗凋亡基因XIAP在慢性淋巴细胞白血病中的异常表达及其临床意义

目的: 慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphoctyic leukemia,CLL)存在多种因素导致的细胞凋亡受抑,本文主要探讨抗凋亡基因XIAP在慢性淋巴细胞白血病中的表达,并深入分析其与IgVH突变?CD38等临床重要预后指标的相关性?方法:本研究采用SyberGreen法实时定量PCR(qPCR)技术检测37例CLL患者肿瘤细胞中抗凋亡基因XIAP的mRNA表达水平,同时利用28例年龄匹配的正常人作为阴性对照,分析其临床意义?结果:经过qPCR检测正常对照组XIAP表达中位数为0.04040(95% CI:0.01610~0.06471),CLL组XIAP表达为0.07502(0.04383~0.1062),两者具有显著统计学差异(P=0.0025);亚组分析发现耐药组XIAP表达为0.08295(0.02575~0.1402),药物敏感组为0.07020(0.03042~0.1100),耐药组XIAP表达高于药物敏感组,但是未达到统计学差异(P=0.3978)?进一步分析显示XIAP mRNA表达水平和IgVH突变状态和CD38表达相关:IgVH无突变和CD38高表达的CLL患者XIAP表达显著升高(P值分别为0.0265和0.0388)?结论:利用qPCR技术发现抗凋亡基因XIAP在CLL患者中存在异常高表达,耐药组有高于药物敏感组的趋势,并且与CLL临床预后因素IgVH突变状态和CD38表达密切相关,提示其可能成为预测CLL预后的新指标?