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目的 为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法。方法 利用SOURCEl5Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链。并测定回收率。结果 SOURCE15Q柱在紫外检测波长为260hm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液 2.0mol/LNaCl,线性浓度梯度洗脱的分离条件下,能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离;对24mer单链样品进行回收率测试,回收率为92.46%。结论 利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高,适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备。 相似文献
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目的探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3(H1/GFP&Puro)载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低(P<0.01),Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比(SER)分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G2/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G2/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。 相似文献
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肿瘤血清标志物的核酸适配体是利用指数富集的系统进化技术(SELEX),从体外筛选获得的一种能与肿瘤血清标志物高特异性、高亲和性结合的寡核苷酸分子。利用核酸适配体的优势,探寻对肿瘤更具诊断价值的新的肿瘤标志物。目前在肝癌、胃癌等肿瘤的研究中已经取得了一定成果。本文综述了当前核酸适配体及其在肿瘤血清标志物筛选中的相关研究,讨论了肿瘤血清标志物的核酸适配体在肿瘤诊断中的价值以及目前的研究所存在的问题。期望通过本文的综合描述,有助于人们更好地了解肿瘤血清标志物核酸适配体的筛选,并为新的肿瘤血清标志物的发现提供帮助。 相似文献
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羽裂蟹甲草花挥发性成分的分析研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用水蒸气蒸馏法提取,同时用毛细管气相色谱一质谱联用法,对羽裂蟹甲草花所含的挥发性化学成分进行了分析研究,经毛细管色谱分离出60个峰,并且确认了所含的几乎全部化合物。同时用气相色谱面积归一法测定了各成分的相对百分含量,其主要化学成分为:大根香叶烯(19.29%),子丁香烯(16.51%),1H-苯并环庚烯(13.70%),(B)-1.2-(二氧亚甲基)-4-丙烯基-苯(9.49%),4-蒈烯(7.61%),( )-(z)-长叶松烷(7.25%),2-水芹烯(5.01%),[1s-(1α,2β,4β)基-1-乙烯基]-2.4-二(1-甲基-乙烯基)-环己烷(4.05%),3.7-二甲基-1.3.7-辛三烯(4.00%)等,鉴出率占全油的87.91%,为进一步开发利用提供了科学依据。 相似文献
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细胞受到外界刺激导致DNA损伤时,DNA修复蛋白被激活并发挥功能,受损DNA得到修复。近年来研究表明,转录因子特异性蛋白1(specificity protein 1,Sp1)在DNA损伤修复中起重要作用,是参与调控DNA损伤应答与修复的重要蛋白之一。Sp1在多种肿瘤中高表达,通过调节细胞增殖、迁移和侵袭促进肿瘤的发生和发展,不利于肿瘤治疗。本文首先介绍Sp1特有的结构及其生理功能,由此引入Sp1通过转录依赖方式调控DNA损伤应答,其次介绍Sp1通过非转录依赖方式参与DSB修复,以及Sp1在肿瘤治疗中的研究进展,最后展望研究Sp1的意义及可能具有的应用前景。 相似文献
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目的:以羧基化琼脂磁珠为筛选介质,利用RT-PCR和靶标替换消减SELEX技术从胃癌血清中筛选得到高特异性?强亲和力的适配体?方法:以离心超滤(50 000超滤管)法处理后的胃癌血清作为靶分子,羧基化琼脂磁珠为载体,先将寡核苷酸文库与反筛磁珠(结合正常血清)结合,取上清再与筛选磁珠(结合胃癌血清)结合,洗去未结合的寡核苷酸分子,对结合在磁珠上的寡核苷酸分子进行分离和扩增,λ酶切法制备ssDNA次级库,进行10轮筛选,将第10轮的文库扩增得到dsDNA,利用胶回收试剂盒回收纯化目的片段的dsDNA,并与pMDTM18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆,测序获得适配体序列,同时用流式细胞术测定胃癌血清适配体的Kd值?结果:经过10轮筛选后,得到20条与胃癌血清结合的适配体?结论:特异性检测表明,筛选得到的胃癌血清适配体与胃癌血清的结合解离常数均在纳摩尔级水平,其中5?7?16?17?18号适配体能高特异性?强亲和力结合胃癌血清,与正常人血清不结合?该研究为胃癌的早期诊断提供了实验基础? 相似文献