高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物

目的 为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法。方法 利用SOURCEl5Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链。并测定回收率。结果 SOURCE15Q柱在紫外检测波长为260hm，流速为1ml／min，流动相为pH9．0时，以20mmol／L Tris-HCl缓冲液 2．0mol／LNaCl，线性浓度梯度洗脱的分离条件下，能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离；对24mer单链样品进行回收率测试，回收率为92．46％。结论 利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高，适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备。     

干细胞niche与肿瘤的发生和转移

干细胞niche是干细胞生存的微环境,通过与干细胞之间的直接和/或间接作用影响干细胞的命运,在维持干细胞自我更新和分化过程中起着极为关键的作用。niche功能异常使得正常干细胞转变成肿瘤干细胞,从而涉及肿瘤的发生发展。在肿瘤转移的过程中niche承担着重要的作用。     

shRNA沉默Sp1对胶质瘤细胞放射敏感性的影响北大核心CSCD

目的探讨下调Sp1基因表达对胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法设计并合成编码shRNA的寡核苷酸序列,克隆入LV3(H1/GFP&Puro)载体中构建重组体。然后重组慢病毒分别感染U251和U87细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株。荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中Sp1 mRNA和蛋白表达水平;克隆存活法检测细胞存活;流式法检测细胞周期;免疫荧光法检测DNA损伤程度。结果两株胶质瘤细胞在感染72 h后荧光显微镜观察Sp1慢病毒载体均高表达,RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示转染后shRNA-U87和shRNA-U251细胞Sp1 mRMA和蛋白表达量均明显降低(P<0.01),Sp1敲除率达90%以上。shRNA-U251和shRNA-U87细胞在10%细胞存活水平下的放射增敏比(SER)分别为1.39和1.18;两株Sp1敲除组细胞经辐照后G2/M期比率及γ-H2AX foci数目与对照组相比均极显著增大。结论shRNA沉默Sp1增大了X线诱导的G2/M期阻滞,加重了DNA双链断裂程度,提高了胶质瘤细胞的放射敏感性。     

酶分子定向进化的最新研究进展及应用

酶分子定向进化又称为酶分子体外进化,属于蛋白质的非理性设计,是蛋白质工程的新策略,是在试管中模拟达尔文进化的过程,利用分子生物学手段在分子水平创造分子的多样性,结合灵敏的筛选技术,迅速得到理想的突变体。与传统的理性设计相比,它不需事先了解蛋白质的空间结构、活性位点、催化机制^[1]等因素,而是人为地创造特殊的进化条件,模拟自然进化机制（随机突变、基因重组和自然选择）,在体外改造酶基因,产生基因多样性,并结合定向筛选（或选择）技术,获得具有某些预期特征的改构酶^[2]。     

羽裂蟹甲草花挥发性成分的分析研究

采用水蒸气蒸馏法提取，同时用毛细管气相色谱一质谱联用法，对羽裂蟹甲草花所含的挥发性化学成分进行了分析研究，经毛细管色谱分离出60个峰，并且确认了所含的几乎全部化合物。同时用气相色谱面积归一法测定了各成分的相对百分含量，其主要化学成分为：大根香叶烯(19．29％)，子丁香烯(16．51％)，1H-苯并环庚烯(13．70％)，(B)-1．2-(二氧亚甲基)-4-丙烯基-苯(9．49％)，4-蒈烯(7．61％)，( )-(z)-长叶松烷(7．25％)，2-水芹烯(5．01％)，[1s-(1α，2β，4β)基-1-乙烯基]-2．4-二(1-甲基-乙烯基)-环己烷(4．05％)，3．7-二甲基-1．3．7-辛三烯(4．00％)等，鉴出率占全油的87．91％，为进一步开发利用提供了科学依据。     

生物酶的定向进化及其应用

生物酶在现代合成工业中具有重要作用，主要表现在其高效的催化性能方面。近10年来，在实验室中运用各种基因工具模拟自然进化所设计的生物酶多数已应用于工业生产中，定向进化成为人们改造生物酶的重要工具之一。近年来的主要进展包括改造获得的具有新型功能的酶和一些新的更加有效的定向进化的方法。在蛋白质工程方面，定向进化与理性的设计加速了生物催化在制药业、化工业和食品工业中的应用。     

核酸适配体在肿瘤血清标志物筛选中的应用研究

肿瘤血清标志物的核酸适配体是利用指数富集的系统进化技术(SELEX),从体外筛选获得的一种能与肿瘤血清标志物高特异性、高亲和性结合的寡核苷酸分子。利用核酸适配体的优势,探寻对肿瘤更具诊断价值的新的肿瘤标志物。目前在肝癌、胃癌等肿瘤的研究中已经取得了一定成果。本文综述了当前核酸适配体及其在肿瘤血清标志物筛选中的相关研究,讨论了肿瘤血清标志物的核酸适配体在肿瘤诊断中的价值以及目前的研究所存在的问题。期望通过本文的综合描述,有助于人们更好地了解肿瘤血清标志物核酸适配体的筛选,并为新的肿瘤血清标志物的发现提供帮助。     

胃癌血清适配体的筛选及其鉴定

目的:以羧基化琼脂磁珠为筛选介质,利用RT-PCR和靶标替换消减SELEX技术从胃癌血清中筛选得到高特异性?强亲和力的适配体?方法:以离心超滤(50 000超滤管)法处理后的胃癌血清作为靶分子,羧基化琼脂磁珠为载体,先将寡核苷酸文库与反筛磁珠(结合正常血清)结合,取上清再与筛选磁珠(结合胃癌血清)结合,洗去未结合的寡核苷酸分子,对结合在磁珠上的寡核苷酸分子进行分离和扩增,λ酶切法制备ssDNA次级库,进行10轮筛选,将第10轮的文库扩增得到dsDNA,利用胶回收试剂盒回收纯化目的片段的dsDNA,并与pMDTM18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆,测序获得适配体序列,同时用流式细胞术测定胃癌血清适配体的Kd值?结果:经过10轮筛选后,得到20条与胃癌血清结合的适配体?结论:特异性检测表明,筛选得到的胃癌血清适配体与胃癌血清的结合解离常数均在纳摩尔级水平,其中5?7?16?17?18号适配体能高特异性?强亲和力结合胃癌血清,与正常人血清不结合?该研究为胃癌的早期诊断提供了实验基础?     

生物抗菌肽的研究进展

抗菌肽（antibacterial peptides）广义上是指广泛存在于生物体内具有抵御外来人侵病原体侵害、清除体内突变细胞的一类小分子多肽。人们已相继从细菌、真菌、两栖类、高等植物、哺乳动物乃至人类中发现并分离获得具有类似性质的活性多肽。随着研究的深人发现某些抗菌肽不仅对部分真菌、原虫和病毒具有明显杀伤作用,而且还可以促进伤口愈合,对癌细胞和癌实体瘤有攻击作用而不破坏正常细胞^[1],因此许多学者倾向于称之为多肽抗生素。近年来,在临床治疗中出于抗生素的滥用,抗药菌群迅猛发展,