抗-HBc半定量水平联合早期病毒学应答预测干扰素治疗慢性乙型肝炎的疗效

目的探讨血清抗-HBc半定量水平联合早期病毒学应答在预测干扰素初治的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者48周HBeAg血清学转换中的价值。方法回顾性分析2013年1月至2019年1月在上海市公共卫生临床中心就诊的干扰素初治的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者96例,所有患者均采用聚乙二醇干扰素治疗48周。治疗前及治疗期间每隔12周采用化学发光微粒子免疫分析法检测核心抗体水平。组间比较采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验,应用受试者工作特征(ROC)曲线评估预测效能。结果实现血清学应答的患者基线抗-HBc水平为11.92(10.07～12.80) s/co,未发生血清学应答患者为10.61(9.49～11.47)s/co。单因素logistic回归分析发现,基线抗-HBc水平(OR=1.469,95%CI:1.137～1.898,P0.01)和早期病毒学应答(OR=3.507,95%CI:1.051～11.69,P=0.041)与干扰素治疗血清学应答具有独立相关性,多因素二元logistic回归分析提示,基线抗-HBc水平(OR=1.831,95%CI:1.299～2.582,P0.01)及早期病毒学应答(OR=2.161,95%CI:1.595～7.851,P=0.024)对干扰素治疗的血清学应答有一定的预测价值。当基线抗-HBc水平cut off值为11.6 s/co时,ROC曲线下面积最大(AUROC=0.72,95%CI:0.59～0.86,P=0.004),诊断敏感度和特异度分别为73.42%和64.71%。将基线抗-HBc水平根据预测48周发生HBeAg血清学转换的cut-off值11.6 s/co和是否发生早期病毒学应答进行分层,基线抗-HBc≥11.6 s/co且实现早期病毒学应答时,48周HBeAg血清学转换率最高为42.86%(9/21);仅满足基线抗-HBc≥11.6 s/co或仅满足早期病毒学应答时,HBeAg血清学转换率分别为18.18%(2/11)和12.12%(4/33);当基线抗-HBc11.6 s/co且未实现早期病毒学应答时,HBeAg血清学转换率为0.06%(2/31)。结论基线核心抗体的半定量水平联合早期病毒学应答,可以作为HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者干扰素治疗效果的预测因子。     

肠道病毒71型与脊髓灰质炎病毒抗体交叉反应性研究

通过临床血清样本研究及实验动物验证,探讨肠道病毒71型(EV71)与脊髓灰质炎病毒(PV)之间的抗体交叉反应性。以酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测健康儿童血清中IgG型抗体与EV71及PV的反应性;用原核表达与亲和纯化等方法分别获得EV71和PV的衣壳蛋白VP1及非结构蛋白3C;将PV-VP1、EV71-VP1、EV71灭活疫苗及PV灭活疫苗(IPV)分别经皮下免疫BALB/c小鼠制得免疫血清,以蛋白免疫印迹实验分别研究PV-VP1或EV71-VP1小鼠阳性血清与EV71-VP1和PV-VP1的反应情况,进一步以竞争ELISA试验分别研究EV71-VP1对PV-VP1与其特异性免疫血清特异结合的影响。微量中和试验研究PV阳性抗血清对EV71的体外中和效应。结果:已接种PV疫苗但未曾感染EV71的健康儿童的IgG抗体与EV71有较高的反应性,且针对EV71及PV两种病毒的IgG抗体的相对含量成正相关;蛋白免疫印迹实验显示PV-VP1与EV71-VP1免疫的小鼠抗血清中存在交叉抗体,竞争ELISA试验进一步表明EV71-VP1蛋白能明显抑制PV-VP1与其特异性免疫血清抗体的结合,反之亦然。但中和实验揭示PV阳性血清在体外不能中和EV71病毒。PV之间存在大量交叉反应性抗体,但PV免疫后产生的与EV71交叉反应的抗体是非中和性质抗体。非中和抗体可能通过免疫调理效应在EV71病毒的致病的过程中发挥重要作用。     

高压水动力法建立表面抗原表达缺失的乙型肝炎转染小鼠模型及初步评估

目的探讨HBsAg在小鼠体内模型中对宿主免疫应答调节及病毒感染慢性化中的作用。方法在已有高压水动力法转染pAAV-HBV1.2质粒建立乙肝小鼠模型的基础上,通过点突变技术引入终止密码子至pAAV-HBV1.2质粒上的HBsAg读码框,构建HBsAg无法转录的突变质粒,再利用该质粒构建HBsAg表达缺失的乙肝小鼠模型。通过比较原始质粒建立的乙肝模型小鼠,检测分析外周血中HBV抗原与DNA等病毒感染指标,比较肝脏病变和免疫细胞浸润情况。结果成功构建了HBsAg缺失的乙肝模型小鼠:在乙肝模型小鼠和HBsAg缺失突变的模型小鼠外周血中均能检测到4 COI/mL水平的HBeAg,两组小鼠没有差异,但只有乙肝小鼠体内能检测到102 COI/mL以上的HBsAg和103至106拷贝/mL的HBV DNA,HBsAg缺失的小鼠中无法检测到HBsAg和HBV DNA;动态监测显示HBeAg在乙肝和HBsAg缺失突变的两组小鼠中的阳性率均逐步降低,在HBsAg缺失突变组中降低的更明显,第8周时仅有20%的小鼠为HBeAg阳性,而此时未突变乙肝组的阳性率为60%;免疫组织化学结果显示:在阴性对照小鼠的肝脏结构较完整,未见聚集的浸润免疫细胞,而乙肝和HBsAg缺失的乙肝小鼠肝小叶结构均松散,乙肝小鼠肝脏中有聚集的浸润性免疫细胞,HBsAg缺失的小鼠肝脏缺少免疫细胞的聚集,却存在严重的肝细胞毛玻璃样变性。结论成功构建了HBsAg缺失的乙肝转染小鼠模型;并发现HBsAg在HBV完整病毒颗粒包装和出胞,以及肝脏病变和免疫细胞浸润过程中发挥了重要的作用。