CYP2C9新变异体A149V的发现及药物代谢活性研究

目的 研究中国汉族人群中发现的CYP2C9新变异体A149V的药物代谢活性。方法 随机采集2018年北京医院心内科住院患者血样并采用磁珠法抽提基因组DNA,PCR扩增CYP2C9基因启动子区及9个外显子区用于基因分型。体外构建双表达杆状病毒载体pFastBac-OR-CYP2C9,转染DH10Bac大肠杆菌获得杆粒,使用昆虫系统表达CYP2C9及CYPOR,并进行Western blot法验证。采用差速离心法制备CYP2C9微粒体,使用3种探针药物进行体外酶活性研究。结果 513例样本中检测到一种新的CYP2C9突变446C>T,可导致CYP2C9第149位氨基酸由丙氨酸被缬氨酸替换(A149V)。利用昆虫表达系统成功获得了新变异体A149V及典型CYP2C9变异体的微粒体,Western blot法检测结果显示,A149V的氨基酸替换并不会影响CYP2C9酶的表达水平。体外药物代谢活性数据显示,新变异体A149V对3种探针药物甲苯磺丁脲、双氯芬酸和氯沙坦的清除率分别是野生型的17.90%、24.73%和5.54%。结论 中国汉族人群中发现的CYP2C9新变异体A149V为慢代谢类型。     

2005年至2008年全国HLA低分辨基因分型检测室间质量评价结果分析

Objective National external quality assessment (EQA) results from 2005 to 2008 for HLA class Ⅰ (A, B) and class Ⅱ (DRB1) low-resolution DNA typing were summarized with the goal of exploring strategies to assure and improve HLA DNA typing performance in clinical testing. Methods HLA allele results from the four consecutive years EQA events were analysed. Different kinds of errors were described and classified, and the possible causes were discussed. Results Participant laboratories were increasing in the four consecutive years with the number of 22, 28, 47 and 61 in 2005, 2006, 2007 and 2008,respectively. 2 844 HLA DNA typings were returned from the participants during the 4 years EQA surveys, and overall 30 errors (1.05%) were identified. These 30 errors were classified into two major types of errors including 25 technical genotyping errors and 5 human errors. The proportion of laboratory participants which made mistakes was 13. 6%, 10. 7%, 10. 6% and 16.4% in 2005, 2006, 2007 and 2008, respectively. Conclusions Above 10% of participant laboratories exhibited errors in the four consecutive years HLA molecular typing EQA surveys. Relevant important attentions should be greatly paid to clinical HLA molecular typing test.     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨单体型频率初步分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB15位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用Arle-quin3.1软件以最大似然法分析单体型频率。结果双座位连锁不平衡分析显示,HLA-C与HLA-B、HLA-DRB1与HLA-DQB1呈现较为显著的连锁不平衡;多位点单体型频率分析结果显示,最常见的2、3、4、5位点单体型分别为:A*0207-B*4601(7.34%)、Cw*0102-B*4601(8.71%)、B*1302-DRB1*0701(6.19%)、DRB1*0901-DQB1*0303(14.27%)、A*3001-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、A*0207-B*4601-Cw*0102(7.06%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(6.12%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(5.29%)。结论本研究提供了中华骨髓库718名捐献者HLA5位点高分辨单体型频率遗传学数据,将为临床寻找HLA匹配的无关供者、法医学鉴定、HLA与疾病相关研究等提供分子遗传学参考。     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因频率分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1 5位点在高分辨基因分型水平上的等位基因频率特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用直接计数法计算各位点基因频率。结果在718名捐献志愿者中,共检出28个HLA-A等位基因、61个HLA-B等位基因、30个HLA-C等位基因、40个HLA-DRB1等位基因、18个HLA-DQB1等位基因;其中HLA-A位点最常见等位基因为A*1101(21.66%)、A*2402(16.37%)、A*0201(13.79%);HLA-B位点最常见等位基因为B*4001(11.49%)、B*4601(9.54%);HLA-C位点最常见等位基因为Cw*0702(15.74%)、Cw*0102(15.32%)、Cw*0304(11.56%);HLA-DRB1位点最常见等位基因为DRB1*0901(14.69%)、DRB1*1501(12.40%)、DRB1*0701(9.89%);HLA-DQB1位点最常见等位基因为DQB1*0301(20.54%)、DQB1*0303(15.81%)、DQB1*0601(10.79%)。结论本研究在高分辨基因分型水平提供了一套有关中国人群HLA-A,-B,-C,-DRB1和-DQB1 5位点基因频率数据。     

显微手术切除前颅窝脑膜瘤手术效果的多因素分析

目的:分析影响显微手术切除前颅窝脑膜瘤手术效果的因素?方法:回顾性分析南京医科大学附属淮安第一医院于2011年7月~2013年7月采用显微手术切除的43例前颅窝脑膜瘤患者的临床资料,分析影响肿瘤残留?术后视力改善及并发症的相关因素,然后对有统计学意义的因素行Logistic逐步回归分析,研究其各自的独立危险因素?结果:肿瘤的形状及侵袭性是影响肿瘤残留的独立危险因素;肿瘤大小及神经血管包绕是影响术后视力改善的独立危险因素;神经血管包绕及侵袭性是影响术后并发症的独立危险因素?结论:前颅窝脑膜瘤患者的肿瘤大小?形状?神经血管包绕?侵袭性是肿瘤残留?术后视力改善及并发症的重要因素,能够为手术效果提供良好的预测价值?     

阿奇霉素间隙疗法治疗寻常性痤疮疗效观察

目的:探讨治疗寻常性痤疮依从性好,疗效高的抗生素。方法:口服阿奇霉素0.5g 1次/d,每周连服3 d,停服4 d,连服8周。结果:治疗组有效率为74.07%,对照组有效率为77.08%,两组疗效比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿奇霉素间隙疗法治疗寻常性痤疮依从性好,疗效高,且安全,值得临床推广。     

论鲎试验的“假阳性”

为了使细菌内毒素检查用于更多的药品注射液代管热原检查，几年来，不少药品检验所、药厂仍至医院制剂室，进行了大量的两种检查方法的对比研究工作，由于尝试验法比家兔热原检查法更灵敏．一些作者将省试验不合格的结果．称自试验为“假阳性”．笔者认为这一结论是欠妥的。众所周知，道试验是目前检测细菌内毒素最简便、最灵敏，特异性最好的方法。我国生产的鲨试剂灵敏度一般均能达到IEu／ml以下，更灵敏的鲨试剂可达0．03Eu／ml（约相当pg／ml水平）。而家兔热原检查法的灵敏性，一般仅能达到10EU从＊左右。一种物质能被一种方法检出，…     

一寻常型银屑病家系的HLA等位基因分析

目的分析北方一寻常型银屑病家系的发病与HLA-A、B、DRB1等位基因的相关性。方法采用序列特异性寡核苷酸探针-聚合酶链反应(PCR-SSO)方法检测一北方家系16人的HLA-A、B、DRB1等位基因。结果家系中共有6人患寻常型银屑病,其中4个早发寻常型银屑病患者(Ⅱ-2、Ⅱ-4、Ⅲ-1、Ⅲ-5)发病均在30岁以前,B位点均为B*13、DRB1位点均为DRB1*07;家系中有6人携带单倍型11-15-15,其中4人发病(Ⅰ-2、Ⅱ-2、Ⅱ-4、Ⅲ-1),年龄稍小的2人未发病(Ⅲ-3、Ⅲ-4)。结论此家系中寻常型银屑病的发病涉及多个易感位点,携带B*13-DRB1*07基因的早发病者可能与对遗传因素和/或环境因素敏感性增加有关;易感单倍型携带者的发病受环境因素和/或其他易感因素的影响。     

中国汉族人群CYP2C9常见多态性位点的检测及其与国外其他人群的比较研究

目的检测中国汉族人群细胞色素P450 2C9(CYP2C9)常见多态性位点的等位基因,为药物基因组学研究提供理论依据。方法用聚合酶链反应产物直接测序和基因克隆测序法对2127例中国汉族人群CYP2C9基因常见多态性位点CYP2C9*1、CYP2C9*2和CYP2C9*3等位基因进行检测,明确其在中国汉族人群中的等位基因及基因型频率分布,并与国外不同人群基因多态性进行比较研究。结果中国汉族人群CYP2C9基因常见等位基因CYP2C9*1、CYP2C9*2和CYP2C9*3的等位基因频率分别为96.94%、0.14%、2.92%,常见基因型CYP2C9*1/*1、CYP2C9*1/*2、CYP2C9*1/*3、CYP2C9*3/*3的基因型频率分别为94.12%、0.28%、5.36%、0.24%。结论中国汉族人群CYP2C9基因中以CYP2C9*1等位基因为最常见,CYP2C9*2和CYP2C9*3是中国汉族人群罕见等位基因;中国人群CYP2C9基因的等位基因频率与日本人群相近,与法国、西班牙和意大利等欧洲人群差异有统计学意义,该研究结果将为我国的临床药物基因组学研究提供有价值的理论依据。     

MEF2A第11号外显子CAG三联核苷酸重复序列的改变与其转录激活活性的相关性

目的 探讨MEF2A第11号外显子CAG三联核苷酸重复序列的改变与其转录激活活性的相关性.方法 PCR法扩增富含组氨酸钙结合蛋白(histidine-rich calcium-binding protein,HRC)基因启动子/增强子序列,插入报告载体pGL3-Basic中,生成pGL3-HRC enhancer质粒,该质粒与全长野生型MEF2A cDNA表达质粒pCDNA-MEFcDNA,或含4～15个CAG的变异型MEF2A cDNA表达质粒pCDNA-MEFcDNA-CAGr,以及内参质粒pRL-TK,用脂质体转染法共转染于293T细胞,Westernblot检测MEF2A蛋白的表达,双荧光素酶检测系统测定报告分子的表达.结果 成功构建了MEF2A蛋白体外转录激活活性检测系统;所构建的含4～15个CAG序列的MEF2A变异蛋白,与含11个CAG序列的野生型MEF2A蛋白之间其转录激活活性没有显著性差异.结论 目前已发现的MEF2A第11号外显子CAG重复数目的 改变不会影响MEF2A蛋白的转录激活活性.