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目的:观察乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase-A,LDH-A)在胆管癌组织及人胆管癌细胞株中的表达情况?方法:应用免疫组织化学方法检测32例胆管癌组织?15例癌旁组织中LDH-A的表达;采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)?Western blot法检测LDH-A在人胆管癌细胞株HuCCT1及人正常胆管上皮细胞株HIBEpic中的表达?结果:LDH-A在胆管癌组织中呈高表达18/32(56.3%,P < 0.01),在HuCCT1细胞中亦呈现高表达,而HIBEpic细胞则表现为低表达?结论:LDH-A在胆管癌组织及人胆管癌细胞株HuCCT1中高表达,说明LDH-A与胆管癌的发生?发展可能具有关联性? 相似文献
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目的:体外实验观察乳酸脱氢酶-A(lactate dehydrogenase-A,LDHA)短发夹RNA对胆管癌细胞系Hucct1 LDHA表达的抑制效果,筛选出针对LDHA基因有效的干扰靶点,并检测LDHA表达下调后,细胞增殖活力的改变情况?方法:设计合成干扰LDHA表达的寡核苷酸片段,经退火?连接等步骤克隆到线性化pGPU6/GFP/Neo真核表达载体,转化入DH-5α大肠杆菌中扩增,经质粒抽提纯化后测序鉴定?重组质粒用脂质体法转染胆管癌细胞系,荧光显微镜观察转染效率;并分别利用RT-PCR及Western blot技术检测LDHA mRNA及蛋白表达,验证短发夹RNA的干扰效果?将干扰效率最高的质粒转染Hucct-1,MTT法检测干扰组较对照组细胞增殖的变化?结果:成功构建了靶向LDHA基因的3个shRNA质粒表达载体,脂质体法平均转染效率为(80 ± 5)%?荧光定量RT-PCR和Western blot显示瞬时转染si-LDHA-1?si-LDHA-3的Hucct1细胞LDHA mRNA和蛋白表达均较阴性对照组有不同程度的下降,其中si-LDHA-3干扰效果尤为明显?MTT法检测显示转染组Hucct1细胞较阴性对照组增殖减慢,转染后96 h两组差异具有统计学差异(P < 0.05)?结论:重组质粒能有效干扰胆管癌细胞Hucct1中LDHA基因的表达,经瞬时转染筛选出了有效干扰靶位,下调LDHA的表达,明显抑制胆管癌细胞系Hucct-1的增殖活力? 相似文献
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