鼠疫耶尔森氏菌荧光标记扩增片段长度多态性分型方法

目的 建立荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)技术平台，探讨鼠疫菌基因分型。方法 用5种核酸限制性内切酶消化鼠疫菌基因组DNA，选择最佳内切酶组合，酶切片段经接头连接后，用荧光素标记的5条EcoRⅠ引物和9条MseⅠ引物组成的引物配对扩增，选择最佳引物组合，进行系列PCR条件的优化。扩增产物经ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(遗传分析仪)检测，GeneScan等软件进行分析。结果 成功建立FAFLP技术平台。结论 FAFLP具有快速、简便、廉价、分辨率高、重复性好和污染少的优点，可用于鼠疫菌的基因分型分析。     

吡喹酮治疗后华支睾吸虫的组织化学变化

吡喹酮是目前治疗华支睾吸虫病的最有效药物。关于该药对华支睾吸虫的杀虫作用,迄今仅见虫体组织学方面的研究,为了进一步探讨该药对华支睾吸虫的作用机理。本文进行了组织化学方面的研究。     

鼠疫耶尔森菌pgm位点及其侧翼序列遗传变异的比较分析

目的研究鼠疫耶尔森菌中国自然分离株pgm位点及其侧翼序列的变异，了解不同疫源地菌株间的毒力差异，为鼠疫防治提供帮助。方法比较分析现有4株菌的pgm位点及其侧翼序列的变异，采用PCR、等位基因特异性PCR扩增260株中国自然分离株和7株假结核耶尔森菌。结果除锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株外，其他菌株均缺失了YPl666的70～87bp之间的18bp碱基。1406bp处T的缺失仅存在于东方型菌株中。北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株的pgm位点下游都没有IS100插入；锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株的色素沉着区有1个IS285插入，在其下游3kb区域还有1个IS100插入。冈底斯山型和昆仑山A、B型菌株的pgm位点上游侧翼区与其他菌株不同。36株菌的pgm位点缺失，缺失的菌株主要集中在鄂尔多斯高原型，松辽平原B型，昆仑山A、B型4种生态型菌株中。结论北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株是中国鼠疫耶尔森菌中比较古老的菌株。锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株是一个独特的分支，建议归为第4个生物型——田鼠型。北天山东段型及西段A、B型，锡林郭勒高原型，青海田鼠型菌株的pgm位点，由于在其下游没有IS100插入，所以稳定、不易缺失。pgm位点及其侧翼序列的变异与菌株的生物型、自然疫源地和生态型都具有一定的相关性。     

鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型--田鼠型的提出

目的 探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础。方法 通过全基因组序列的比较分析,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布。结果 田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大。所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变,所有甘油利用阴性菌株的glpD基因发生了突变,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变。结论 提出了一个新的生物型——田鼠型;相应糖醇代谢相关基因发生突变是4个生物型变异的遗传基础。     

我国4地区旋毛虫杂交实验

各地人体或动物旋毛虫，其形态相似，但生物学性状不尽相同［１，２］，因此有人认为用株或隔离群区别各地旋毛虫［３］。斋藤奖等［４］曾将中国长春（犬）旋毛虫与世界各地旋毛虫进行了同工酶及杂交对比研究，认为长春旋毛虫属于波兰—美国—泰国群，与日本旋毛虫关系较...     

吡喹酮治疗后华支睾吸虫的组织化学变化

华支睾吸虫实验感染的大鼠经吡喹酮治疗后,虫体的组织化学变化为:糖原在治疗后1h开始减少,24h明显减少,48h大部消失。治疗后1h虫体实质组织内蛋白质开始增加,24h实质组织、生殖器官内的蛋白质均明显增加。RNA在治疗后1h开始减少,24h逐渐减少,48h部分消失。琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氨酶和钙-三磷酸腺苷酶在治疗后1h开始弥散增加,24h明显增加。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在治疗后48h出现弥散性增加。但DNA、脂肪、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、单胺氧化酶和酚酶均未见明显变化。     

吡喹酮治疗后华支睾吸虫的组织化学变化

为进一步探讨吡喹酮对华支睾吸虫的杀虫机理,以华支睾吸虫实验感染大鼠,经吡喹酮治疗后,虫体的组织化学变化为:治疗后1h,虫体内糖原均有减少,24h后糖原更加减少,部分虫体内糖原几乎消     

华支睾吸虫尾蚴扫描电镜观察

华支睾吸虫尾蚴体部呈圆筒形,口吸盘明显大于腹吸盘。体表布满小棘,口吸盘上有4行较大的棘,其中第1行的最大,其余3行的依次变小,其数目分别约为12、18、19和18个。尾部细长,表面有由皮层形成的横行褶襞,腹面尚有数条纵行褶襞。尾部有膜状的背鳍和腹鳍。感觉器有3型:具长纤毛或短纤毛的感觉乳突、感觉小窝和中心具结节的环形乳突。     

鼠疫耶尔森菌菌株91001全基因组序列测定及初步分析

目的 测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株91001的全基因组序列，并通过比较基因组学研究，探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线。方法 采用全基因组鸟枪法测定91001菌株的全基因组序列，利用比较基因组方法对91001与另外2株鼠疫耶尔森菌(CO92和KIM)的全基因组进行比较研究。结果 91001菌株的基因组包括1条染色体和4个质粒(pPCP1、pCD1、pMT1和pCRY)。pPCP1质粒长度为9609bp，与参考菌株基本一致；pCD1质粒是编码Ⅲ型分泌系统的质粒，长度为70159bp，编码情况与参考菌株基本相同，但重排导致了质粒的结构与参考菌株存在差异；pMT1质粒长度为106642bp，保留了较多的原始质粒片段，毒力相关基因与参考菌株没有差异；pCRY质粒是本研究中新发现的质粒，在国内外研究中未曾报道，这一质粒长度为21742bp，具有独立复制能力，有一群编码Ⅳ型分泌系统的基因。91001菌株的染色体长度为4595065bp，有4037个编码序列(CDS)，其中141个是假基因；染色体中存在着非常丰富的插入序列，由于存在IS序列介导的基因组重排，91001菌株染色体的结构与参考菌株存在较大差异。通过比较基因组学分析，初步确定了91001菌株甘油降解阳性、硝酸盐还原阴性、阿拉伯糖分解代谢阴性以及蜜二糖分解阳性的遗传基础。结论 根据质粒结构、染色体基因组重排、硝酸盐还原阴性的机制以及假基因的分布等信息，推测以91001菌株为代表的田鼠型菌株是原始鼠疫耶尔森菌进化过程中的另一个分支，与现有菌株存在着比较明显的差异；而91001菌株独特的致病性可能与基因组中的假基因或大片段缺失有关。