水飞蓟宾体外对人肝癌细胞株HepG2蛋白表达的影响及临床意义

目的探讨水飞蓟宾在体外对人肝癌细胞Hep G2蛋白表达的影响及临床意义。方法采用MTT法检测不同浓度水飞蓟宾（Silibinin）对Hep G2细胞增殖的影响;采用台盼蓝法检测不同浓度水飞蓟宾对Hep G2细胞的杀伤活性;采用western blot免疫印迹法检测自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达水平;利用基因沉默技术,转染BNIP3小RNA（siRNA）抑制BNIP3的表达,之后再用MTT法和Western blot法检测水飞蓟宾对Hep G2细胞增殖和自体吞噬的影响。结果随着水飞蓟宾浓度的提高,水飞蓟宾在体外对Hep G2细胞的增殖抑制率和杀伤活性逐渐提高;水飞蓟宾在体外可显著诱导Hep G2细胞LC3-Ⅱ的表达;水飞蓟宾在体外可显著诱导Hep G2细胞BNIP3的表达;转染BNIP3 siRNA后,水飞蓟宾对Hep G2细胞的增殖抑制率25.3±4.0和LC3-Ⅱ表达水平0.35±0.11相比于对照组的增殖抑制率63.1±7.0和LC3-Ⅱ表达水平0.70±0.19显著下降。结论水飞蓟宾通过上调BNIP3的表达诱导人肝癌细胞发生自噬性死亡。     

桔梗皂苷D通过下调HAX1的表达抑制肝癌干细胞对5-氟尿嘧啶的抵抗性

目的: 探讨天然药物活性成分桔梗皂苷D是否能抑制肝癌干细胞对5-氟尿嘧啶的抵抗性并研究其机制。方法: MTT法和Annexin V染色流式细胞术检测桔梗皂苷D和5-氟尿嘧啶对HepG2肿瘤干细胞细胞活力和细胞凋亡的影响。采用western blot方法检测桔梗皂苷D是否调节HepG2肿瘤干细胞中HAX1的表达。运用JC-1染色流式细胞术、Annexin V染色流式细胞术及western blot方法研究桔梗皂苷D联合5-氟尿嘧啶对肝癌干细胞凋亡通路的影响。结果: 5 mmol/L 5-氟尿嘧啶处理下HepG2肿瘤干细胞的细胞活力抑制率为29.1±2.4,显著低于常规HepG2细胞的细胞活力抑制率(72.7±5.2, P<0.05)。5-氟尿嘧啶联合桔梗皂苷D对HepG2肿瘤干细胞的细胞活力的抑制率为66.7±3.4,凋亡诱导率为33.9±2.1,显著高于5-氟尿嘧啶单独处理的细胞活力抑制率(28.7±1.8,P<0.05)和凋亡诱导率(8.9±0.6,P<0.05)。桔梗皂苷D处理后HepG2肿瘤干细胞中HAX1的相对表达水平为0.24±0.02,相比于对照组(0.78±0.05)显著下降(P<0.05),表明桔梗皂苷D抑制肝癌干细胞HAX1的表达水平。5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D+HAX1质粒组的HepG2肿瘤干细胞凋亡率(10.1±0.7)显著低于5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D组(34.8±2.2,P<0.05),表明桔梗皂苷D通过下调HAX1的表达提高5-氟尿嘧啶对肝癌干细胞的凋亡诱导活性。5-氟尿嘧啶+桔梗皂苷D组HepG2肿瘤干细胞的相对线粒体膜电位(0.21±0.02)显著低于5-氟尿嘧啶组(0.84±0.04,P<0.05),表明桔梗皂苷D通过线粒体途径促进5-氟尿嘧啶对肝癌干细胞的凋亡诱导效应。结论: 桔梗皂苷D通过下调HAX1的表达抑制肝癌干细胞对5-氟尿嘧啶的抵抗性。