miR-106b在阿尔茨海默病中的作用机制

目的 探讨miR-106b在阿尔茨海默病(Alzheimer''s disease,AD)发病中的作用.方法 取3月龄和6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time PCR检测3、6、9月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中miR-106b的表达,对芯片检测结果进行验证;通过构建miR-106b稳定转染细胞系和miR-106b knockdown研究miR-106b与TGFBR2表达之间的关系; 构建TGFBR2 3''UTR-荧光素酶报告载体,验证miR-106b是否可以直接调控TGFBR2蛋白的表达;采用Western blot的方法检测APPswe/ΔPSΔE9小鼠和对照小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达情况.结果 miR-106b在3月龄和6月龄AD模型小鼠脑组织中表达升高,在9月龄模型小鼠脑组织中表达降低;通过体外实验,我们发现miR-106b与TGFBR2蛋白的表达呈负相关;荧光素酶报告实验表明TGFBR2 3''UTR序列中包含miR-106b的结合位点;TGFBR2蛋白在3、6、9、12月龄AD模型小鼠脑组织中表达均降低.结论 miR-106b可能通过调控TGFBR2蛋白的表达影响TGF-β信号通路,从而参与AD的发病.     

Mir-106b对阿尔茨海默病昼夜节律调控的初步研究

目的探讨mir-106b在阿尔茨海默病发病中的作用。方法取6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time PCR对芯片检测结果进行验证;构建mir-106b表达载体,将其转染至SH-SY5Y细胞中构建mir-106b稳定转染的稳转细胞系。用Targetsan、Pictar、miRanda等靶基因预测软件,对mir-106b的靶基因进行预测,根据靶基因的功能选择可能与AD发病相关的靶基因,并用Western blot对所选择的靶基因在稳转细胞中的表达进行验证。用双荧光素酶报告检测系统检测mir-106b与其靶基因的结合位点。结果芯片结果显示,与野生型小鼠相比,6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中mir-106b的表达下降,经real-time PCR验证,mir-106b的表达在APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中的表达较野生型小鼠升高,差别具有统计学意义(P=0.03)。mir-106b稳转细胞系较对照mir-106b的表达升高2～5倍。神经PAS结构域蛋白2(neuronal PAS domain protein2,NPAS2)在mir-106b稳转细胞中的表达明显下降。双荧光素酶报告实验证实:与对照相比,带有NPAS2的3'UTR的荧光素酶报告载体与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性降低;荧光素酶报告载体的NPAS2-3'UTR突变后与mir-106b表达载体共转染,海肾荧光素酶/萤火虫荧光素酶的相对活性升高。结论mir-106b可能通过调节机体生物钟基因NPAS2的表达,影响阿尔茨海默病人的生活节律,参与阿尔茨海默病的发生。     

肝吻合状血管瘤1例

正患者女性,44岁。因上腹部闷胀不适伴乏力3个月余。影像学诊断示:肝右叶异常信号灶,符合富血供肿瘤MRI表现。门诊以"肝占位"于2019年3月27日收入院。病理检查眼观:肝组织1块,大小9 cm×7 cm×5 cm,临床已剖开,切面见一海绵状肿物,灰黄、灰红色,质软,半透明,肿物切面面积5 cm×4.5 cm,与周围组织界限较清楚(图1)。镜检:肿物与周围肝组织界限较清楚,为非浸润性生长方式,周围肝组织未见受累(图2)。病变富于腔隙     

阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

目的 探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用.方法 采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量 PCR验证结果 可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用.将靶基因APP mRNA的野生及突变3'UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点.结果 根据microRNA芯片结果 筛选出在3、6月龄APPSWE/PSI AE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量 PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高.通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的把基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5 Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少.将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3'UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3' UTR的结合位点.结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3'UTR区城.     

APP/PS双转基因阿尔茨海默病小鼠模型的老年斑及行为学动态分析

目的研究APP／PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠模型老年斑形成和行为改变的动态过程。方法将转APPswe突变基因小鼠与转PSAE9基因突变小鼠杂交，PCR鉴定APPswe／PSAE9双突变转基因小鼠的基因表型，筛选阳性小鼠建立APPswe／PS／kE9双转基因C57BL／6J小鼠模型。抗邮免疫组化、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin-S荧光分别动态检测3、4、5、6、9、12月龄APPswe／PSAE9双转基因小鼠大脑病理改变。荷兰Noldus公司EthovisionXT监测分析软件动态观察3、6、9月龄的APPswe／PSAE9双转基因小鼠Morris水迷宫行为学改变。利用SPSS16．0软件统计分析。结果建立了人APPswe／PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型。3月龄APP／PS1双转基因小鼠大脑组织抗Aβ1—17免疫组织化学、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin—S荧光未检测到有明显老年斑形成。4．5月龄APPswe／PSAE9双转基因小鼠大脑组织上述三种方法均可检测到老年斑。9、12月龄双转基因小鼠老年斑数量体积明显增加，出现与阿尔茨海默病患者较相似的老年斑改变。Morris水迷宫试验发现3、6、9月龄APPswe／PSAE9双转基因小鼠行为学结果与同月龄野生型小鼠有差异，说明与同月龄野生型小鼠相比出现记忆学习能力缺陷（P〈0．05）。结论成功建立了人APPswe／PSAE9双转基因小鼠阿尔茨海默病模型，为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。     

阿尔茨海默病中mir-222作用机制的初步研究

目的探讨mir-222在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法取6月龄APPswe／PSAE9小鼠脑组织，进行microRNA芯片的检测；利用real—timePCR对芯片检测结果进行验证；构建mir-222表达载体，将其转染至SH-SY5Y细胞中，转染后48小时提取蛋白检测p27kipl的表达情况。结果芯片结果显示，与野生型C57BL／6J小鼠相比，6月龄APPswe／PSAE9小鼠脑组织中mir-222表达明显下降，经real-timePCR验证，差别具有统计学意义（P=O．012）；将mir-222表达载体转染至SH—SY5Y细胞后，p27kipl表达减少。结论mir-222可能通过调节细胞周期抑制因子p27kipl的表达参与阿尔茨海默病的发生。     

胃癌组织中标记滞留细胞的初步鉴定

目的 研究裸鼠胃癌组织中标记滞留细胞的存在及其分布特点.方法 培养人胃癌细胞株BGC-823,5-BrdU标注后接种于裸鼠右腋窝皮下.于接种后10、20、28、35、42、49、56d处死裸鼠,取其右腋下肿瘤结节进行免疫组化检测.结果 实验组接种后第10天,裸鼠肿瘤组织中标记滞留细胞(LRCs)表达最高,达到96.14%,随着时间的增加,LRCs逐渐降低,到第80天在肿瘤中仅有极少量细胞表达BrdU,约占0.51%,主要位于癌巢的边缘部位,细胞形态与BrdU阴性细胞无明显的差异.结论 胃癌BGC-823细胞株在裸鼠体内形成的肿瘤内存在标记滞留细胞,这部分细胞与肿瘤干细胞密切相关,可能在维持肿瘤生长、转移、复发方面发挥重要作用.