支气管肺泡灌洗液中性粒细胞比例对于肺部细菌感染的诊断价值

背景 下呼吸道感染特别是医院获得性肺炎发病率较高,增加了大量医疗负担,早期诊断对于下呼吸道感染的防治具有重要价值.目的 分析肺部细菌感染患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞分类特点及BALF中性粒细胞比例对下呼吸道细菌感染的诊断价值.方法 纳入2018年1月-2...     

淫羊藿苷对高重力环境下成骨细胞黏附和细胞骨架的影响

目的通过高加速度离心加载装置建立高重力加载模型,探讨不同高重力加载环境对成骨细胞黏附及细胞骨架的影响,并且分析淫羊藿苷对高重力加载后细胞黏附和细胞骨架的影响。方法将MC3T3-E1细胞按2×105个/cm2的密度接种于细胞培养皿中。实验共分为6组:对照组、单纯给药组、10 G加载组、10 G给药组、40 G加载组、40 G给药组。加载组应用高加速度离心加载机对细胞施行加载,连续加载3 d,每天30 min。对照组和单纯给药组暴露于正常重力情况下,其余条件与实验组无差别。给药组淫羊藿苷均采用10-7 mol/L浓度,且按预防给药的方法实验。通过茜素红染色、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、CCK-8细胞增殖实验、细胞骨架鬼笔环肽染色、qPCR和Western Blot等相关分子生物学技术检测淫羊藿苷对高重力环境下成骨细胞integrinα5、integrinβ1和F-actin的影响。结果所有模型均成功制备。茜素红染色:淫羊藿苷可促进成骨细胞钙化结节形成,10 G加载可促进成骨细胞矿化,而40 G加载则抑制成骨细胞的矿化。ALP活性检测:单纯给药组、10 G加载组、40 G加载组的检测OD值分别为0.246、0.331、0.163,与对照组的0.207相比,差异均有统计学意义(P<0.05);10 G给药组和40 G给药组分别为0.373和0.180,与各自加载组的差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8增殖实验:单纯给药组OD值为0.650,与对照组0.551的差异有统计学意义(P=0.031);10 G加载组和40 G加载组OD值分别为1.193和0.245,与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05);且10 G给药组和40 G给药组1.300和0.310,与各自加载组的差异有统计学意义(P<0.05)。鬼笔环肽染色:10 G加载细胞促进的数量增加,但细胞形态及骨架未见明显变化,40 G加载则抑制,淫羊藿苷对细胞形态无影响,但对加载损伤后的细胞有一定修复作用。QPCR和Western Blot实验结果一致证实,淫羊藿苷作用后,integrinα5、integrinβ1和F-actin的mRNA和蛋白表达上调,10 G加载可促进integrinα5、integrinβ1和F-actin mRNA和蛋白的表达,40 G加载则明显抑制其mRNA和蛋白的表达。结论10 G条件和淫羊藿苷干预均可促进成骨细胞的生长发育、细胞黏附及细胞骨架的稳定,而40 G则具有明显抑制作用。     

下调PALM3表达抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎性反应

目的 探讨抑制paralemmin-3（PALM3）表达对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞系（NR8383）炎性反应的影响。方法 将NR8383细胞并接种至6孔板中,待融合度达70%,加入0.5μg/ml LPS刺激12h,用免疫荧光检测细胞PALM3表达及亚定位;用0.5μg/ml LPS刺激NR8383细胞并在0、3、6、12、24和48h收集细胞提取总RNA,用RT-PCR法检测PALM3 mRNA;同前接种细胞至24孔板,待融合度达70%,将PALM3小干扰核糖核苷酸（siRNA）转染NR8383细胞（PALM3 siRNA转染组）,同时设立正常NR8383细胞组和对照转染组（转染control siRNA）,转染48h后,提细胞总蛋白用Western blot法检测PALM3蛋白水平;3组细胞给予LPS刺激12h,收集培养上清和核蛋白,用ELISA法检测培养上清中IL-8、IL-6的水平及核转录因子（NF-κB）转录活性。结果 PALM3分子在NR8383细胞中有表达,LPS可诱导PALM3表达;PALM3 siRNA转染后成功下调PALM3蛋白表达,予LPS刺激后,与正常细胞及对照转染组比较,PALM3 siRNA转染组培养上清中白介素-8（IL-8）和IL-6含量减少,PALM3 siRNA转染组细胞中NF-κB转录活性亦被抑制。结论 NR8383细胞中有PALM3表达,LPS可诱导NR8383细胞中PALM3的蛋白表达,下调PALM3表达可抑制LPS诱导的炎性反应。     

糖皮质激素减轻烟雾吸入性大鼠急性肺损伤后肺纤维化

目的 探究早期应用不同时程甲泼尼龙（MP）对大鼠烟雾吸入性肺损伤后期纤维化的改善作用。方法 178只成年雄性SD大鼠随机分为对照组（n=18）、单纯烟雾吸入组（smoke组,n=40）、烟雾吸入+MP1 d治疗组[smoke+MP（1D）组,n=40]、烟雾吸入+MP 3 d治疗组[smoke+MP（3D）组,n=40]、烟雾吸入+MP 7 d治疗组[smoke+MP（7D）组,n=40]。烟雾吸入大鼠在烟雾箱中烟雾暴露30 min以达到急性肺损伤标准,之后分别于烟雾吸入的1 d、1~3 d、1~7 d给予腹腔注射MP（每天4 mg/kg）,计算大鼠28 d生存率;烟雾吸入后的第7、14、28天取大鼠肺组织行马松三色染色、天狼星红染色,并进行肺纤维化评分;通过实时荧光定量PCR测定大鼠肺组织中转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA表达;通过蛋白质印迹法测定大鼠肺组织中髓过氧化物酶（MPO）、结缔组织生长因子（CTGF）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）、白细胞介素6（IL-6）的表达情况。结果 Smoke组大鼠烟雾吸入28 d生存率为47.50%,给予不同时程MP治疗后,生存率均提高至80%以上（P均<0.01）。马松三色染色及天狼星红染色结果显示smoke组大鼠肺纤维化程度加重,而smoke+MP（3D）组和smoke+MP（7D）组较smoke组和smoke+MP（1D）组纤维化程度改善,胶原沉积减轻（P<0.05或P<0.01）。烟雾吸入后smoke组和smoke+MP（1D）组大鼠肺组织中TGF-β1和α-SMA的mRNA表达水平逐步升高,28 d时smoke组和smoke+MP（1D）组高于smoke+MP（3D）和smoke+MP（7D）组（P<0.05或P<0.01）。烟雾吸入后28 d时smoke+MP（3D）组和smoke+MP（7D）组大鼠肺组织中MPO、CTGF、HMGB1、IL-6的表达水平低于smoke组和smoke+MP（1D）组（P<0.05,P<0.01）。但smoke+MP（3D）组和smoke+MP（7D）组上述指标差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 大鼠烟雾吸入后给予MP治疗可以提高其生存率,3 d或7 d的MP治疗可以改善大鼠28 d肺纤维化程度,但这两种治疗方案之间差异无统计学意义。     

呼吸危重症年度进展2021

呼吸危重症领域在2021年度(2020年10月1日到2021年9月30日)有了一些临床进展,重症肺炎发病早期、高炎性反应和病情较重的患者应用糖皮质激素有效;右美托咪定对年龄>65岁和外科术后有创机械通气患者能够获益;在呼吸支持领域,经鼻高流量湿化氧疗用于慢性阻塞性肺疾病急性发作、经鼻高流量湿化氧疗联合清醒俯卧位通气、有创机械通气患者采用电阻抗交点法指导滴定呼气末正压、早期应用体外膜氧合、结合神经调节辅助通气指导尽快撤机等相关研究,说明在动态评估的基础上采取个体化呼吸支持的重要性,这些研究成果相信也会对呼吸危重症患者临床救治提供证据支持。