实时荧光PCR技术定量检测乳腺癌患者血浆循环DNA

目的建立一种实时荧光定量PCR方法,并用该方法检测乳腺癌患者血浆循环DNA水平。方法用QIAamp血液DNA抽提试剂盒提取61例乳腺癌患者和25例健康妇女血浆循环DNA,用实时荧光定量PCR技术(SYBR Green I染料法)进行定量,结果用设定临界域值时的循环数的值(Ct值)表示,并对定量结果进行ROC曲线分析。结果:乳腺癌患者Ct值(27.71±1.41)显著低于健康对照(30.37±1.32,P<0.001),说明乳腺癌患者血浆循环DNA水平显著高于健康对照组;ROC曲线下面积为0.921。结论应用实时PCR技术检测乳腺癌患者血浆循环DNA水平有可能成为一种无创性乳腺癌分子诊断方法。     

塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长及其VEGF表达的影响

目的 研究塞来昔布对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B的生长及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用不同浓度的塞来昔布作用于HEC-1-B细胞,MTF法检测塞来昔布作用于HEC-1-B细胞24、48、72h后,对HEC-1-B细胞增殖的影响.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析其对HEC-1-B细胞VEGF mRNA表达的影响,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HEC-1-B细胞上清中VEGF蛋白表达量.结果 塞来昔布对HEC-1-B细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,塞来昔布能降低HEC-1-B细胞VEGF mRNA及蛋白的表达.结论 塞来昔布能抑制HEC-1-B细胞的生长及VEGF的分泌.     

低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞株生长和VEGF表达的影响

目的:探讨低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞株的生长以及其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:采用MTT方法观察一定浓度速碧林(低分子肝素钙注射液)作用于SGC-7901细胞12h,24h,48h后细胞的生长情况。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析SGC-7901细胞VEGF mRNA表达的变化,同时用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中VEGF的蛋白表达量。结果:速碧林对SGC-7901细胞的生长有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,速碧林能降低SGC-7901细胞VEGF mRNA以及蛋白的表达。结论:低分子肝素能抑制SGC-7901细胞的生长以及VEGF的分泌。     

连接酶链反应结合荧光PCR法检测UGT1A1*28基因多态性

目的: 建立一种连接酶链反应结合荧光PCR的方法,检测结肠癌患者外周血UGT1A1*28基因多态性,并探讨其临床应用价值。方法: 设计连接酶荧光PCR引物和探针,首先通过连接酶反应,然后结合荧光PCR技术检测UGT1A1*28基因多态性,构建标准品评判该体系的特异性和敏感性,并检测50例结肠癌患者外周血标本,与DNA测序进行平行比较。结果： 此方法能准确地区分UGT1A1*28基因TA6/6、TA7/7及TA6/7基因型,且最低可检测5 ng人基因组DNA, 50例结肠癌患者外周血标本的检测结果与测序结果一致。 结论： 连接酶链反应结合荧光PCR可准确检测出UGT1A1*28基因多态性。     

低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞增殖及其hTERT表达的影响

目的探讨低分子肝素（LMWH）对胃癌SGC-7901细胞增殖及其人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达的影响。方法不同浓度LMWH作用于SGC-7901细胞不同时间后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测细胞hTERT mRNA。结果LMWH作用后,SGC-7901细胞的生长受抑制,呈剂量和时间依赖性,细胞停滞于G1期,其hTERT mRNA表达下降。结论LMWH可抑制SGC-7901细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期、降低hTERT mRNA的表达有关。     

宫颈癌患者HPV感染和调节性T细胞的相关性研究

目的 探讨宫颈部位人乳头瘤病毒（HPV）感染与CD4＋ CD25＋ CD127-调节性T细胞（TReg）及机体免疫水平的关系.方法 采用第二代核酸杂交扩增技术（HC2）检测41例正常对照组、50例宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ、42例CIN Ⅱ～Ⅲ和70例感染HPV宫颈癌患者;采用流式细胞术检测外周血CD4＋CD25＋ CD127-TReg、细胞毒性T细胞（CTL）和NK百分率;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中TGF-β1和INF-γ的含量.结果 ①HPV感染率随着宫颈病变的加重而升高（P =5.75×10^-19）;②宫颈CIN Ⅱ～Ⅲ组与宫颈癌组外周血CD4＋CD25＋CD127-TReg、CTL、NK、TGF-β1、INF-γ与CIN Ⅰ组及正常对照组比较,差异均 有统计学意义（P=1.03×10^-9）;且在HPV阴阳性组间比较亦有统计学意义（P=2.33×10^-4）;③CTL与NK和Treg呈负相关（P值分别为1.62×10^-6和3.41×10^-5）;INF-γ含量与TReg呈负相关（P=2.11×10^-5）;④HPV与CD4＋ CD25＋ CD127-TReg百分率呈正相关（P =3.02×10^-6）.结论 宫颈HPV感染与TReg密切相关,TReg失调导致的免疫水平下降可能是宫颈癌免疫逃避机制之一.     

粪便DNA甲基化分析在结直肠癌早期诊断中的价值

近年来,研究表明DNA甲基化改变与肿瘤的发生发展关系密切,有望用于恶性肿瘤的分子诊断。由于结直肠癌(CRC)组织持续脱落细胞到粪便中,因此检测粪便中CRC相关基因的甲基化状态有可能成为一条无创诊断CRC的新途径。增生性息肉蛋白基因(HPPI)是在结肠增生性息肉中     

ＥＲＣＣ１ ｍＲＮＡ表达及基因多态性对胃癌辅助化疗预后的影响

目的:探讨切除修复交叉互补基(ERCC1)mRNA表达及118 C/T基因多态性与胃癌对奥沙利铂辅助化疗预后的关系.方法:根治术后胃癌患者62例,采用奥沙利铂为主的方案进行辅助化疗.采用半定量RT-PCR方法检测胃癌组织中ERCCl mRNA水平.采用PCR,LDR(连接酶检测反应)检测ERCCI 118C/T基因多态.结果:62例胃癌组织ERCC1 mRNA表达水平的中位值为0.672;ERCC1 118 C/C、C/T和T/T基因型分别占51.6%(32/66)、43.5%(27/62)和4.8%(3/62).ERCC1 mRNA高表达组(＞0.672)无复发生存率和总生存率均显著低于低表达组(P＜0.05);携带C/T和T/T基因型患者与C/C基因型患者的无复发生存率和总生存率差异无显著性(P＞0.05).多因素分析结果显示ERCC1 mRNA水平是影响患者预后的独立危险因素(P＜0.05),而ERCC1 118C/T多态与预后无关(P＞0.05).结论:ERCCI mRNA表达水平与接受奥沙利铂为主辅助化疗胃癌患者的预后有关,可用于其预后预测.     

PDGF家族在原发性胃腺癌组织中的表达及其意义

目的:研究血小板衍生生长因子(PDGFs)家族在原发性胃腺癌组织中的表达,阐明其与原发性胃腺癌临床病理特征的关系.方法:选择手术切除并经病理证实的58例原发性胃腺癌癌组织及其对应的癌旁组织标本,采用RT-PCR方法检测组织中PDGF-A、B、C、D mRNA的表达情况,明确PDGF家族在mRNA水平的表达谱;免疫组织化...     

外源性PDGF-DD蛋白对肝癌细胞株BEL-7402的体外作用

目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响.方法:浓度为0 ～ 100 pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-7402 48 h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGF mRNA和CXCR4 mRNA表达.结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0 ～ 100 pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGF mRNA和CXCR4 mRNA的表达.结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达.提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点.