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目的 本文旨在构建11β-羟基类固醇脱氢酶2 (11β-HSD2)基因的重组真核表达载体,并检测其转染入哺乳动物细胞后对白介素6(interleukin-6,IL-6)表达水平的影响.方法 用PCR方法扩增11β-HSD2基因的全长cDNA,先亚克隆至pGMT载体,测序正确后再亚克隆至pcDNA3.1 myc-hisC 以构建其重组真核表达载体.将重组的真核表达载体瞬时转染人肺腺癌细胞系A549,用Western blot 方法鉴定表达情况,并用ELISA方法检测IL-6表达水平.结果 测序表明11β-HSD2的重组真核表达载体构建成功,Western blot显示真核表达载体能够在A549细胞中成功表达,并可使IL-6表达水平升高.结论成功构建了11β-HSD2基因的重组真核表达载体,初步验证了该基因的促炎效应. 相似文献
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目的 体外复制细胞炎性损伤模型用于体外炎症研究.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养后分组,用不同浓度(0、0.1、1、10、20μg/ml)的脂多糖(LPS)刺激,在不同时间点(4、12、24、48h)收样品,检测细胞上清中的白介素-6(IL-6)水平.结果 每个时间点的HUVEC:LPS(0.1、1、10、20μ,g/ml)比LPS(0μg/ml)刺激后IL-6分泌明显增高(P＜0.05);48h内随时间增加,IL-6分泌增加,呈线性关系;相同时间点不同LPS浓度(0.1、1、10、20 μg/ml)刺激细胞产生的IL-6分泌差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外LPS刺激HUVEC是理想的细胞炎性损伤模型. 相似文献
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