逍遥散调控肝窦内皮窗孔改善大鼠抑郁样行为的机制研究

【目的】探讨逍遥散对大鼠抑郁样行为的作用及其调节机制。【方法】将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组（剂量为19 g·kg－1·d－1）和氟西汀组（剂量为2 mg·kg－1·d－1）。采用慢性不可预测轻度应激（chronic unpredictable mild stress, CUMS）诱导大鼠抑郁样行为,旷场实验观察逍遥散对抑郁样行为的作用, Luminex液相芯片分析系统检测大鼠血清细胞因子,电镜观察大鼠肝窦内皮窗孔数量和大小, Western blot法分别检测肝组织中吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO）和色氨酸2,3-双加氧酶（tryptophan 2,3-dioxygenaes, TDO）表达。【结果】逍遥散可显著增加大鼠糖水消耗、爬格数和直立数,显著降低血清TNF-α、 IL-6水平,增加窗孔数量与大小,改善肝窦内皮血管化倾向,并降低TDO和IDO的表达（均P＜0.05或P＜0.01)。【结论】逍遥散可显著改善大鼠抑郁样行为,可能与其降低炎症因子、抑制IDO通路、改善肝窦内皮功能作用有关。     

以短肽K237为配体的靶向脂质体超声造影剂构建方法

目的 探讨以与血管内皮生长因子(VEGF)的主要受体KDR特异性结合的短肽K237(P)为配体制备靶向脂质体超声造影剂(P-Bio-Av-Bio-Mbs)的方法。 方法 采用生物素-亲和素桥接法构建P-Bio-Av-Bio-Mbs,流式细胞术筛选最佳配体适配剂量,光镜及荧光显微镜观察靶向微泡与KDR强阳性表达的人大肠癌LOVO细胞结合情况,计算花环形成率。分别以5、50、99 ml/h速率水流冲刷,光镜观察靶向微泡与LOVO细胞结合情况。 结果 不同亲和素剂量下(0、2、6、10、30 μg),微泡表面亲和素携带率差异有统计学意义(P<0.05)。M_avidin=6 μg时,携带率增长达平台期;不同短肽剂量下(0、30、40、50、60、70、100 μg),微泡表面短肽携带率差异有统计学意义(P<0.05),当M_K237=50 μg时,微泡表面短肽携带率增长达平台期。光镜下KDR强阳性表达的LOVO细胞周围花环形成率高达90.52%,荧光显微镜下微泡外壳发出明亮绿色荧光。随冲刷速度增加,靶细胞周围黏附的靶向微泡减少,在99 ml/h冲刷速度下,靶细胞周围仍可见花环结构。 结论 通过生物素-亲和素桥连作用,短肽K237被有效装配在P-Bio-Av-Bio-Mbs表面,体外具有靶向特异性及一定稳定性。流式细胞术是筛选靶向微泡配体适配剂量的可靠方法。     

过表达HSP20的慢病毒载体对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的构建过表达大鼠热休克蛋白20(HSP20)基因慢病毒载体,探讨其对H2O2诱导的大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠HSP20基因pHIV-HSP20过表达质粒慢病毒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其转染效率;包装慢病毒并转染H9C2心肌细胞;72 h后观察其转染效率,RT-PCR法检测细胞HSP20 mRNA表达,CCK-8、Hochest33258染色法检测H2O2诱导后H9C2心肌细胞凋亡情况。结果成功构建了HSP20慢病毒过表达载体,经293FT细胞包装后,其对H9C2细胞72 h的转染效率为95%;与慢性病毒组比较,H9C2细胞转染72 h后HSP20 mRNA水平显著升高,细胞活力下降,心肌细胞凋亡率明显降低(P均<0.01)。结论过表达HSP20能显著抑制H2O2诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

过表达ODC抑制氧化应激诱导大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的构建过表达鸟氨酸脱羧酶（ODC）基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体。侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高。过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义（P〈0.001）。结论成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

慢性应激肝郁模型大鼠蓝斑CRF、c—fos的表达及逍遥散的干预作用

目的观察慢性应激状态下大鼠一般状况,血清促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）浓度,蓝斑（LC）中促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、即刻早期基因c—fos的表达,以及逍遥散对其的干预效应。方法将18只sD健康雄性大鼠随机分为正常对照、模型、逍遥散治疗组,每组6只。采用束缚的方法造模,观察大鼠行为、饮食、排便的变化：造模21d后取出蓝斑,用ELISA法检测血清中CRH浓度,Real—timePCR检测蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA的表达。结果模型组大鼠行为、排便、饮食出现明显异常;与正常对照组比较,模型组大鼠血清CRH浓度升高,蓝斑中CRFmRNA和c—fos mRNA表达均上调（P〈0．01）;与模型组比较,逍遥散组大鼠血清CRH浓度下降,蓝斑中CRFmRNA和c-fosmRNA表达下调（P〈O．01）;逍遥散组较对照组CRH浓度升高、CRFmRNA和c-fos mRNA表达上调,但差异无统计学意义（P〉O．05）。结论神经递质CRF介导了慢性束缚应激中LC的激活,转录因子c—fos亦参与了其调控,而逍遥散则可以有效地进行干预,下调其过表达。     

基于转化医学的中医研究生培养模式的探讨

中医研究生存在着基础研究课题与临床脱节,缺少原始创新能力等问题。转化医学可能是沟通中医研究生基础研究与临床的桥梁。以转化医学思想为指导,提升中医研究生研究起点、强化中医经典文献学习、强调以临床为中心的课题设计并以团队协作的转化医学研究模式开展研究,是一个逐步深化和强化研究生培养、提升中医研究生原始创新能力和提高中医研究生培养水平的过程。     

肝主疏泄与肝窦内皮功能关系探讨

肝主疏泄与解剖学之脑和肝脏功能相关,其调畅气机的功能与肝脏调节物质代谢(能量)、流动以及分布有关,肝窦内皮细胞窗孔构成的肝筛结构可能是肝疏布、宣泄气机及精微、毒物的超微结构。慢性肝病如慢性肝炎、肝纤维化和脂肪肝的病机多为肝失疏泄、由气及血、络脉瘀阻,表现为肝窦内皮细胞窗孔数量、结构及功能异常,引起微循环障碍。因此,肝窦内皮功能障碍可能是肝失疏泄之络病的病机关键,是肝主疏泄之络病理论新的假说。     

雷公藤甲素对大肠癌细胞细胞周期的调控作用

目的:观察雷公藤甲素对大肠癌SW480细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:体外培养大肠癌SW480细胞,分别给予不同浓度的雷公藤甲素进行干预,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物对SW480细胞生长的抑制率,流式细胞术(FCM)测定SW480细胞周期及凋亡率变化。结果:MTT实验结果显示当药物浓度在20～100 mol/L之间时,体外雷公藤甲素可明显抑制SW480细胞的生长;FCM检测显示药物作用后,细胞凋亡率没有明显变化,但是S期细胞数目显著增多,细胞周期受到明显阻滞。结论:雷公藤甲素对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其机制可能是使细胞周期发生阻滞。     

毛蕊异黄酮对人黑色素瘤细胞A375增殖、迁移及侵袭的影响

目的：研究毛蕊异黄酮对人黑色素瘤细胞A375增殖、迁移及侵袭的影响.方法：以人黑色素瘤细胞A375为研究对象,MTT法检测不同浓度的毛蕊异黄酮对A375细胞活性的影响,划痕实验检测A375细胞的迁移,Transwell小室检测A375细胞的侵袭作用;qPCR检测A375细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达水平.结果：毛蕊异黄酮在6.25 ～ 100 μmol/L浓度内不能抑制A375细胞的增殖,划痕实验及Transwell检测结果显示毛蕊异黄酮可显著抑制A375细胞的迁移及侵袭（P＜0.01）,qPCR结果显示毛蕊异黄酮能抑制A375细胞MMP-2及MMP-9的表达.结论：毛蕊异黄酮在小于100 μmol/L浓度时抑制A375细胞的迁移及侵袭,其机制可能与抑制MMP-2及MMP-9表达有关.     

肿瘤微环境的脾虚本质探讨

肿瘤是当今世界面临的最严重的公共卫生问题。肿瘤的免疫编辑理论补充、更新了肿瘤细胞中心论观点。肿瘤微环境促进了肿瘤从免疫相持到免疫逃逸的演变过程,慢性炎症和免疫抑制是其核心特征。多种肿瘤脾虚模型和病例均可见到慢性炎症和免疫抑制,脾虚因而可能是肿瘤微环境的核心病机。健脾中药能有效治疗肿瘤并改善肿瘤微环境相关细胞和分子功能,具有逆转肿瘤免疫逃逸的潜能,应用健脾中药通过调控肿瘤微环境抗癌可能是中医肿瘤防治新思路。