亚低温对脑缺血性损伤后基因修复蛋白和增殖性抗原表达的影响

目的观察脑缺血再灌注后核苷酸切除修复交叉互补基因蛋白p80和增殖性细胞核抗原表达的时空变化及趋势,判断亚低温在缺血性脑损伤中是否具有作用。方法实验于2004-10/2005-05在哈尔滨医科大学病理教研室实验室完成。①取44只大鼠随机分为3组:假手术组(n=4),常温组和亚低温组(n=20),后两组根据再灌注时间分为再灌注3,12,24,48和72h5个亚组,每亚组4只。②用线栓法建立局部脑缺血模型,假手术组不插入栓线。③亚低温组于缺血30min时实施病灶侧脑部亚低温,脑温控制在32～35℃,持续4h,其他两组脑温保持在37℃左右。④各组在相应时间点断头处死大鼠取脑,用免疫组织化学方法检测p80和增殖性细胞核抗原的表达。结果44只大鼠进入结果分析。①p80表达:在假手术组极少,主要见于细胞质中;常温组p80的表达随再灌注时间延长而升高,48h达到峰值,72h时有下降的趋势;亚低温组的表达与常温组趋势一致,且均高于同一时间点的常温组。②增殖性细胞核抗原表达:假手术组有广泛表达,主要见于细胞核中;与假手术组相比,常温组在再灌3h表达即明显下降,随着再灌注时间的延长,表达逐渐升高,24h达到高峰,随后逐渐下降;亚低温组的表达在缺血再灌注后持续升高,且高于相应的常温组。结论亚低温能显著抑制或延迟p80和增殖性细胞核抗原在脑缺血再灌注损伤后表达的下降,提高DNA的修复能力,进而减轻缺血再灌后神经细胞的损伤。     

亚低温对脑缺血性损伤后基因修复蛋白和增殖性抗原表达的影响

目的 观察脑缺血再灌注后核苷酸切除修复交叉互补基因蛋白p80和增殖性细胞核抗原表达的时空变化及趋势，判断亚低温在缺血性脑损伤中是否具有作用。方法实验于2004-10／2005-05在哈尔滨医科大学病理教研室实验室完成。①取44只大鼠随机分为3组：假手术组（n=4），常温组和亚低温组（n=20），后两组根据再灌注时间分为再灌注3，12，24，48和72h5个亚组，每亚组4只。②用线栓法建立局部脑缺血模型，假手术组不插入栓线。③亚低温组于缺血30min时实施病灶侧脑部亚低温，脑温控制在32～35℃，持续4h，其他两组脑温保持在37℃左右。④各组在相应时间点断头处死大鼠取脑，用免疫组织化学方法检测p80和增殖性细胞核抗原的表达。结果 44只大鼠进入结果分析。①p80表达：在假手术组极少，主要见于细胞质中；常温组p80的表达随再灌注时间延长而升高，48h达到峰值，72h时有下降的趋势；亚低温组的表达与常温组趋势一致，且均高于同一时间点的常温组。②增殖性细胞核抗原表达：假手术组有广泛表达，主要见于细胞核中；与假手术组相比，常温组在再灌3h表达即明显下降，随着再灌注时间的延长，表达逐渐升高，24h达到高峰，随后逐渐下降；亚低温组的表达在缺血再灌注后持续升高，且高于相应的常温组。结论亚低温能显著抑制或延迟p80和增殖性细胞核抗原在脑缺血再灌注损伤后表达的下降，提高DNA的修复能力，进而减轻缺血再灌后神经细胞的损伤。     

小婴儿Pierre Robin序列征中腭与舌骨发育情况的观察

目的探讨在小婴儿Pierre Robin序列征中腭及舌骨的发育情况及其相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年12月在南京医科大学附属儿童医院烧伤整形科行双侧下颌骨牵张成骨术的年龄小于3个月龄的Pierre Robin序列征患儿的资料,根据患儿术前头面部三维螺旋CT结果,评估腭和舌骨的发育情况,并对患儿进行分组。根据腭形态将患儿分为腭裂组和高腭弓组,根据舌骨形态分为正常组、轻度组、重度组。分析各组患儿术前年龄、性别、体质量、术前及延长器置入术后呼吸支持(气管插管)、喂养支持(鼻饲)情况、术前及术后3个月(延长器取出术前)时的营养(血清白蛋白浓度)情况。正态分布数据以±s表示,非正态分布数据以M(P25,P75)表示。患儿年龄、体质量及血清白蛋白指标的组间比较采用独立样本t检验,各组间患儿术后插管及鼻饲时间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验,术前及术后血清白蛋白指标比较采用配对样本t检验,各组间术前患儿性别、气管插管、鼻饲喂养情况采用Fisher确切概率法分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果168例患儿被纳入研究,其中男79例,女89例,就诊年龄(36±22)d,入院时体质量(3.6±0.5)kg,术前插管率18.5%(31/168),术前鼻饲率33.3%(56/168)。观察腭形态发现122例(72.6%)患儿伴有腭裂(腭裂组),46例(27.4%)表现为高腭弓(高腭弓组)。腭裂组及高腭弓组患儿在入院年龄、体质量、性别、术前气管插管呼吸支持、血清白蛋白方面差异无统计学意义(P>0.05)。喂养支持方面,高腭弓组(45.7%,21/46)比腭裂组(28.7%,35/122)术前鼻饲率更高(P=0.044),且术后高腭弓组鼻饲时间明显长于腭裂组(H=11.565,P=0.001),差异均具有统计学意义。但2组患儿气管插管时间差异无统计学意义(P>0.05)。术后3个月2组患儿呼吸、喂养困难等情况均明显改善,术后均不需气管插管及鼻饲喂养,血清白蛋白均明显增加,与术前比较差异均具有统计学意义(P<0.001)。舌骨形态发育情况显示76例(45.2%)患儿舌骨形态发育正常(正常组),57例(33.9%)舌骨体或舌骨支结构完整,但形态较正常小(轻度组),35例(20.8%)部分或全部舌骨结构缺如(重度组)。正常组和轻度组在入院年龄和术前血清白蛋白方面比较差异无统计学意义(P>0.05);重度组的患儿年龄明显小于正常组和轻度组,术前血清白蛋白也较另2组低,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。术前呼吸支持方面,重度组气管插管率更高(34.3%),与正常组(14.5%)或轻度组(14.0%)之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05),正常组与轻度组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术前鼻饲喂养方面,轻度组(40.4%)、重度组(45.7%)与正常组(22.4%)鼻饲率差异均具有统计学意义(P<0.05),而轻度组与重度组之间差异无统计学意义(P>0.05)。术后情况比较,重度组与正常组和轻度组相比,气管插管时间及鼻饲时间明显延长,差异均具有统计学意义(P<0.05),而轻度组与正常组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组患儿术后3个月血清白蛋白均明显增加,与术前比较差异均具有统计学意义(P<0.001)。结论Pierre Robin序列征患儿存在不同程度的腭及舌骨形态异常。伴高腭弓患儿有较重的吞咽及喂养困难;严重舌骨发育畸形的患儿病情更重,有严重的呼吸和喂养困难。因此,早期评价腭及舌骨形态可能有助于评估术后预后情况,可尽快进行呼吸和喂养监测及相关的预防和治疗。     

额眶重建联合牵张成骨术治疗Crouzon综合征中三维重建模板的辅助作用

目的探讨三维重建模板在额眶重建联合牵张成骨术治疗Crouzon综合征中的应用效果。方法回顾性分析2018年1月至2021年12月南京医科大学附属儿童医院烧伤整形外科治疗的Crouzon综合征患儿的临床资料。根据具体治疗方法将患儿分为2组, 研究组为应用三维重建模板行额眶重建联合牵张成骨术, 对照组为未使用三维重建模板行该手术。对2组患儿术中出血量、手术时间、住院时间、头颅指数、额眶回缩率采用独立样本t检验进行分析比较, 2组并发症发生比例采用Fisher确切概率法进行分析比较, P<0.05为差异有统计学意义。结果研究组纳入10例患儿, 男6例, 女4例, 平均年龄19个月(9～37个月);对照组纳入8例患儿, 男5例, 女3例, 平均年龄25个月(8～46个月)。研究组术后随访18个月(12～36个月), 头颅外形均得到较好改善, 其中2例延长杆出口发生感染。对照组术后随访18个月(12～30个月), 头颅畸形得到改善, 其中1例发生皮下血肿, 1例延长杆出口发生感染。2组术中出血、手术时间、住院时间、头颅指数、额眶回缩率及并发症发生比例分别比较, 差异均无统计学意义(P均&g...     

miR-125b和血管内皮生长因子A在肝细胞癌中的表达及两者的相关性

目的:探讨miR-125b与血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况及与两者的相关性?方法:利用real-time PCR检测肝癌?癌旁组织?肝癌细胞Huh-7?HepG2以及正常肝细胞L02中miR-125b表达,应用real-time PCR和Western blot分别检测肝癌?癌旁组织中VEGF-A mRNA和蛋白表达?转染miR-125b模拟物(mimic)上调肝癌细胞HepG2中miR-125b表达后,real-time PCR和Western blot检测HepG2细胞中VEGF-A mRNA和蛋白表达?结果:miR-125b 在人肝癌组织中的表达较癌旁组织明显降低(P < 0.05);在肝癌细胞Huh-7?HepG2中的表达较L02明显降低(P < 0.05)?VEGF-A mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达较癌旁组织明显升高(P < 0.05)?miR-125b mimic上调HepG2中miR-125b表达后,转染组VEGF-A mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降(P < 0.05)?结论:miR-125b在肝癌中表达明显下调,而VEGF-A表达上调;低表达的miR-125b丧失对VEGF-A表达的抑制作用可能是肝癌发生的重要机制?     

问号钩端螺旋体GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学分析

目的分析问号钩端螺旋体(钩体)环二鸟苷酸(Cyclic dimeric-GMP,c-di-GMP)调节相关的GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学结果,为后续的功能研究奠定基础。方法 PSI-BLAST方法分析编码GGDEF和EAL/HDGYP结构域蛋白的基因;利用相应生物信息学软件对蛋白信号肽序列、跨膜序列、蛋白结构、同源性进行分析并构建目的蛋白进化树。结果问号钩体中22个蛋白分别含有GGDEF或EAL/HD-GYP结构域,多数蛋白均有感受器结构域和跨膜区。7个具有PAS输入感受器的GGDEF结构域蛋白进化较为独立,位于单独的一个分支,其余6个GGDEF结构域蛋白则分散在不同的分支上。4个EAL结构域蛋白和2个HD-GYP结构域蛋白进化上也较为独立,分别处于同一进化分支。3个GGDEF和EAL结构域耦合的蛋白在进化关系上更趋向于PDE活性蛋白。结论钩体具有多拷贝的合成和降解c-di-GMP相关蛋白编码基因,表明在钩体中c-di-GMP网络具有高度复杂性,同时反映出钩体对环境条件的改变具有复杂的应对机制。     

人参皂苷Rg1通过抑制MAPK-NLRP1通路减轻2型糖尿病诱导的神经元损伤

目的 研究人参皂苷Rg1对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)小鼠神经元损伤的影响并探讨其潜在机制。方法 雄性C57BL/6小鼠84只,随机分为7组：control组、HFD组、HFD+STZ组、Rg1(1、5、10 mg·kg^-1)和二甲双胍治疗组。用高脂饮食(HFD)和链脲霉素(STZ)制备T2DM小鼠模型,成功后给予8周的药物治疗。水迷宫评估小鼠学习记忆能力,HE染色、β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色、普鲁士蓝染色评估皮质和海马受损情况,免疫荧光检测脑内NEUN和NLRP1的共定位及表达,RT-PCR检测NLRP1相关mRNA水平,Western blot检测脑内NLRP1、MAPK相关蛋白的量。结果 水迷宫实验表明,经过Rg1治疗的小鼠学习记忆能力明显提高。组织学染色表明,Rg1能够使T2DM小鼠的神经元损伤、衰老以及脑血管损伤明显改善。免疫荧光检测表明,Rg1治疗减少了T2DM小鼠脑内的NLRP1在NEUN阳性神经元的表达。Western blot和RT-PCR结果显示,Rg1治疗降低了T2DM小鼠脑内NLRP1、A...     

病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡相关蛋白变化的影响

目的：观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后生长抑制和DNA损伤诱导基因45（Gadd45）和Bcl-2蛋白变化的影响。 方法：实验于2004-11／2005～07在哈尔滨医科大学病理教研室实验室完成。将雄性Wistar大鼠48只随机分为4组：（1）常温缺血组（n=20）：采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型，再灌3，12，24，48和72h分别处死，每个时间点4只。（2）亚低温缺血组（n=20）：造模和处死时间同常温缺血组，并于栓搴后30min实施病灶侧亚低温（设定制冷器温度为6-8℃，脑内缺血区温度为32℃左右）并持续4h。（3）假手术组（n=4）：手术，但不栓塞，术后24h处死。（4）正常组（n=4）：不干预。各组大鼠处死前进行神经功能缺陷评分（0—4分，评分越高，神经功能缺陷越重）；苏木精-伊红染色观察组织病理变化；采用免疫组化的方法检测Gadd45和Bcl-2蛋白的表达。 结果：48只进入结果分析。（1）神经功能缺陷评分：亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组（P〈0．05）。（2）Gadd45袭达：在再灌注3h表达增强，且随再灌注时间的延长而逐渐增强（P〈0．05），至48h达高峰，其后叉随之下降。亚低温缺血组各时间点表达明显少于常温缺血组（P〈0．05）。（3）Bcl-2表达：再灌注3h增多，随再灌注时间的延长，其表达逐渐增多（P〈0．05），至24h达高峰，其后叉随之下降，亚低温缺血组各时间点表达明显高于常温缺血组（P〈0．05）。 结论：Gadd45在脑缺血再灌注损伤过程中，早期能修复受损的DNA．损伤加重时则促进细胞凋亡；Bcl-2在脑缺血再灌注损伤过程中主要起抑制细胞凋亡的作用。亚低温能减少Gadd45的表达，增加Bcl-2的表达；能明显减轻缺血所致的损伤，并能明显抑制细胞调亡；对大鼠缺血后神经功能的恢复有确切的疗效。     

用K4M低温包埋剂和紫外线低温包埋机联合的免疫电镜法

目的 研究低温包埋剂及其聚合的环境对免疫电镜技术的重复性和稳定性的意义.方法 利用低温包埋剂Lowicryls K4M和紫外线低温包埋机(SPI#17020)处理免疫电镜组织标本.结果 观察到组织的超微结构和抗原性保存完好.结论 低温包埋剂Lowicryls K4M和紫外线低温包埋机的结合使用能较好地应用在免疫电镜技术中.