土茯苓活性分子落新妇苷抗顺铂诱导的人肾小管上皮细胞凋亡作用研究

目的观察土茯苓活性分子落新妇苷抗顺铂诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的作用。方法采用MTT法分别观察不同浓度落新妇苷(30、50、100、200、300μM)联合顺铂(50μM)对HK-2细胞活力的影响;将HK-2细胞分为对照组、顺铂组、落新妇苷(100、200μM)组,药物干预24h后,Annexin V/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved-caspase-3表达情况;RT-PCR法和Western blot法检测药物转运蛋白OCT2 m RNA和蛋白质表达情况。结果 MTT结果显示,落新妇苷能够增强顺铂诱导HK-2细胞活力(P0.05),且呈一定剂量依赖关系。流式细胞凋亡结果显示,与对照组比较,顺铂组细胞凋亡率显著升高[(61.5±5.67)%比(1.2±1.13)%,P0.01];落新妇苷能够显著抑制顺铂诱导HK-2细胞凋亡,尤其200μM剂量组显著[(33.5±6.93)%比(61.5±5.67)%,P0.01]。Western blot结果显示,与对照组比较,顺铂组细胞Bax、cleaved-caspase-3表达显著增加[(0.33±0.07)比(0.02±0.01)、(0.54±0.06)比(0.08±0.03),P0.01],Bcl-2表达显著减少[(0.11±0.02)比(0.63±0.07),P0.01];与顺铂组比较,落新妇苷能够显著下调Bax、cleaved-caspase-3,上调Bcl-2蛋白表达[Bax:(0.19±0.04)、(0.18±0.02)比(0.33±0.07),P0.05;cleaved-caspase-3:(0.28±0.06)、(0.20±0.05)比(0.54±0.06),P0.01;Bcl-2:(0.26±0.04)、(0.28±0.04)比(0.11±0.02),P0.05]。RT-PCR和Western blot结果显示,与顺铂组比较,落新妇苷能够显著抑制HK-2细胞药物转运蛋白OCT2 m RNA表达[(0.53±0.14)、(0.47±0.03)比(0.89±0.09),P0.01]和蛋白质表达[(0.36±0.08)、(0.25±0.03)比(0.52±0.05),P0.05,P0.01]。结论落新妇苷具有抑制顺铂诱导的HK-2细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制OCT2蛋白表达有关。