海马组织蛋白质双向电泳条件实验研究

目的优化大鼠海马组织蛋白质双向凝胶电泳分离(2-DE)的实验条件。方法分离并比较不同大鼠海马组织总蛋白的制备方法,pH 3～10非线性胶条(NL)、pH 4～7的2种不同pH梯度预制胶条,300、700μg不同质量蛋白上样量,保存2个月及保存1年的标本对2-DE效果的影响。结果本研究采用裂解液及样本制备方法所得蛋白适于2-DE,海马组织总蛋白等电点(PI)主要在4～8;与300μg相比,700μg蛋白上样量对于信噪比控制效果更理想;新鲜标本中影响聚焦的物质较少,凝胶横纹少。结论新鲜海马组织匀浆经多次低温重复离心制备的蛋白,采用pH 4～7预制胶条(24 cm)及700μg上样量获得的2-DE图谱更理想。     

锰铅镉复合暴露对人神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的探索重金属复合暴露对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞的毒性效应。方法将SK-N-SH细胞分别暴露于空白培养基(对照)和氯化锰(125、250、500、750、1 000、1 500、2 000、4 000、6 000μmol/L),乙酸铅(500、750、1 000、1 500、2 000、2 500、3 000μmol/L),氯化镉(5、10、15、20、30、40、60、80μmol/L)单一及二元、三元复合溶液24、48、96 h后,检测细胞存活率,计算锰、铅、镉的药物抑制浓度(IC)。其中,二元、三元复合溶液的浓度均为相应金属IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)的等毒效应比混合,分别用毒性单位法、混合毒性指数法对毒性效应进行评价。结果与对照组相比,不同浓度锰、铅、镉单独染毒不同时间SK-N-SH细胞的存活率均较低,除500μmol/L铅染毒24、96 h组和5μmol/L镉染毒24、48 h组外,差异均有统计学意义(P0.05);随着锰、铅、镉单独染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SK-N-SH细胞的存活率均呈下降趋势。三种金属对SK-N-SH的细胞急性毒性依次为镉(IC_(50):38.728μmol/L)锰(IC_(50):442.739μmol/L)铅(IC_(50):1 624.850μmol/L)。同一金属不同染毒时间的IC_(50)排序均为96 h48 h24 h。锰和镉复合暴露对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h均表现为拮抗作用,在48 h均表现为协同作用;96 h在毒效应为IC_(10)、IC_(20)时均表现为部分相加作用,在IC_(30)、IC_(50)时均表现为协同作用。镉和铅对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h毒效应为IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)时均表现为拮抗作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用;在48 h毒效应为IC_(10)时表现为拮抗作用,在IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)时均表现为部分相加作用;在96 h时均表现为部分相加作用。铅和锰对SK-N-SH细胞的联合毒性在24、96 h毒效应为IC_(50)时分别表现为简单相加、协同作用,其余均表现为部分相加作用。锰、铅、镉对SK-N-SH细胞的联合作用在24、96 h时均表现为部分相加作用;48 h时在IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)均表现为协同作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用。结论三种金属对SK-N-SH细胞的毒性均表现为随暴露时间的延长而增强的趋势。金属复合暴露呈现复杂的毒性效应,毒性效应与特定的金属组合、暴露时间、暴露浓度密切相关。     

关于免疫学综合性实验教学方法的思考

美国著名教育家杜威(John,Dewey,1859~1952年)将实用主义哲学与美国教育实际相结合,创立了独具特色的教育理论,尤其是鼓励探究与创新是其教育思想的精髓。创新精神是社会发展、教育进步的直接强大动力,发达国家之所以如此快速发展,无一不是重视创新的结果。我国在改革开放后十分重视创新问题,在社会上形成了鼓励创新的气氛和环境。在医学高等教育中,实验是非常重要的教学环节,通过改革实验课教学促进对学生创新能力的培养势在必行。1医学免疫学综合性实验教学的必要性医学是实践性很强的科学,人们对生命现象和疾病发生机制的研究都是通过实验研究来确证的,直到现在,实验研究仍然是医学研究的基本方法。在医学教育过程中,实验教学的比重在各个学科所占的比重很大,有些甚至占总课时的50%以上。实验教学效果的好坏直接关系到学生对理论知识的理解和掌握。通常经典的实验教学方法均为论证性质,各个实验相互之间相对独立,虽然在一定程度上可以加深学生对理论的理解,但是在培养学生的创新能力,以及对学科知识体系的系统和整体理解方面比较薄弱。综合性实验是用3个以上相对独立的知识点完成实验题目的实验,是实验教学中重要的类型,通过在实验中对系统设计的几个实...     

关于制作微生物学与免疫学多媒体课件的调查

随着多媒体教学方法的开展 ,各学科都开始制作教学课件并试用于教学。为把我校微生物学与免疫学多媒体课件的制作全面铺开 ,我们微生物学与免疫学教研室也吸取外校多媒体课件制作经验 ,结合我校的教学资源、学生层次等实际情况 ,制作出了一套教学课件 ,并编写了配套教材 ,在 97级学生的教学中试用。由于多媒体教学方法是一种新型的教学手段 ,它是否优于传统的教学方法、教学效果如何、教学质量有否影响等都是师生们关注的问题。为此 ,我们选择了同时接受传统方式教学和多媒体方式教学的 97级本科各专业学生进行问卷调查 ,并做统计分析 ,结果…     

氢醌抑制HL-60细胞分化上调过氧化物酶2-Cys过氧化物氧还蛋白表达

目的研究氢醌(HQ)对HL-60细胞向单核系、粒系分化的影响。方法 HQ 1,5和50μmo·lL-1分别与豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)20 nmol·L-1或1.25%DMSO共同处理细胞,分别于48和96 h收集细胞。通过观察细胞形态、硝基四氮唑蓝还原反应鉴定细胞分化;CCK-8检测细胞增殖,荧光定量PCR检测2-Cys过氧化物氧还蛋白(Prxs)基因表达的变化;Western印迹检测2-Cys Prxs蛋白表达的变化。结果在HQ1~50μmol·L-1作用下,HL-60细胞向单核系分化受到抑制;HQ1和5μmol·L-1对DMSO诱导的粒系分化无影响,但HQ50μmol·L-1可抑制细胞向粒系分化。HQ5和50μmol·L-1与诱导剂的共同作用可以抑制HL-60细胞增殖。与正常对照组比较,PMA和DMSO组2-Cys Prxs基因表达水平均有降低的趋势,HQ1,5和50μmol.L-1+PMA20 nmol·L-1组PrxⅠ,PrxⅢ和PrxⅣ各个基因表达水平与PMA组比较均有增高的趋势;DMSO诱导分化组中仅HQ 50μmol·L-1+1.25%DMSO组PrxⅠ和PrxⅢ基因表达水平与单独DMSO组比较显著增高(P<0.05)。结论 HQ1和5μmol.L-1可以抑制HL-60细胞向单核系分化,HQ50μmol·L-1可抑制细胞向粒系分化,并上调PrxⅠ和PrxⅢ基因的表达。     

食蟹猴饲养环境氨气及饮水中重金属含量的分析

目的检测食蟹猴饲养基地猴舍中的氨气浓度及饮水中重金属含量。方法采集不同猴群、不同饲养方式、不同时点猴舍中的空气,纳氏试剂分光光度法检测氨气浓度。收集饲养基地内地下水出水口、蓄水池、猴舍终端、污水池等5个不同位置的水样标本,电感耦合等离子质谱仪(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)检测重金属含量。结果检疫群猴舍氨气浓度(0.59±0.03)mg/m3显著高于种群(0.34±0.03)mg/m3及商品群(0.27±0.04)mg/m3。不同饲养方式猴舍氨气含量依次为:检疫笼养(0.59±0.03)mg/m3种群笼养(0.48±0.02)mg/m3商品群圈养(0.30±0.02)mg/m3商品群笼养(0.25±0.01)mg/m3种群圈养(0.22±0.02)mg/m3。检疫群笼养、种群笼养明显较其他饲养方式猴舍氨气浓度高。不同猴群、不同饲养方式猴舍氨气在以早上清扫前含量最高。铁质水管连接的猴舍终端饮水中铁含量高于饮用水含量标准。结论本调研的食蟹猴饲养基地猴舍中的氨气浓度低于国家标准,铁质水管连接的猴舍终端铁含量超标。     

创新能力的培养是教学改革的重要任务

中国科学院院长周光召曾指出 :我国科学研究领域存在一个重要问题是创新不够。我们再看看近四十年来我国物理学或与之有关领域的重大成就 ,它们无疑是意义重大而且有世界影响的 ,但其中大多数属于制造出新的产品 ,或合成新的物质 ,或达到新的物理参数 ,而在基本概念、基本方法上创新者很少 ,医学科学研究特别是基础研究的成果主要以论文形式表现 ,且大多是跟踪性研究 ,创新性研究少。据我国科技信息研究所统计 ,包括 SCI(《科学引文索引》)在内的四种国际检索系统 ,是当今国际上最有影响的多学科索引刊物 ,它可反映出一个国家的科学活动在…     

牛磺酸改善染锰大鼠学习记忆能力的海马蛋白质组学研究

目的通过双向电泳实验(2-dimensional gel electrophoresis,2-DE)研究牛磺酸减轻急性染锰诱导大鼠学习记忆损伤的分子机制。方法 60只SPF雄性SD大鼠随机分3组:生理盐水(NS)对照组,连续腹膜内注射(ip)0.9%NS;染锰组,每日ip MnCl2.4H2O(15mg/kg.d);牛磺酸预防组,染锰的同时ip牛磺酸(200 mg/kg.d),各组大鼠连续注射4w。最后一次干预结束后进行水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力变化,分离大鼠海马组织并制备总蛋白,2-DE分离差异蛋白质并经辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析和Mascot数据库检索鉴定差异蛋白。结果水迷宫实验显示:平均逃避潜伏时间(s)染锰组大鼠39.8±2.3,较对照组29.5±2.5及牛磺酸预防组29.4±2.3显著延长(P<0.05),平台搜索次数各组间无显著差异,染锰组与对照组、预防组比对共有10个差异表达的蛋白质斑点,鉴定出4个表达下调的蛋白质,分别是NADH dehydrogenase(ubiquinone)Fe-S protein 1、Galactokinase I、whaq protein、beta-centractin。结论牛磺酸对急性染锰诱导的大鼠空间学习能力损伤有明显改善作用,蛋白质组学研究初步鉴定出4个在三组中共存的表达下调蛋白质点。[营养学报,2012,34(6):553-557]     

医学微生物学实验教学模式改革的探索

为调动学生学习微生物学的积极性和主动性,更好地培养学生综合能力和创新能力,从广西医科大学两个年级本科学生中各选一个班进行了微生物学实验教学模式改革,获得了较好的效果。同时针对改革探索过程中存在的问题,提出了改进的一些措施。     

苯的代谢产物氢醌改变细胞氧化还原状态诱导TNF-α表达

目的:研究苯的代谢产物氢醌(HQ)对HL-60细胞TNF-α产生和细胞活性的影响,并探讨这种影响是否通过氧化还原调节来实现.方法:HL-60细胞用不同浓度HQ刺激24 h后,收集细胞及培养液上清,检测细胞内活性氧、氧化型/还原型谷胱甘肽含量,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α含量.结果:5 μmol/L HQ即可诱导GSH水平增高,抑制HL-60细胞增殖,但对GSH/GSSG比例,TNF-α表达及细胞凋亡无显著影响.50、 100 μmol/L HQ可破坏细胞内氧化还原状态,GSH/GSSG比例下降,TNF-α表达增高,显著抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸能拮抗HQ诱导的TNF-α表达、增殖抑制及细胞凋亡.结论:HQ可通过改变HL-60细胞内氧化还原状态诱导TNF-α表达,导致细胞凋亡.